張盼盼，馬明珠，王集會(huì)

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東濟(jì)南250355；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，山東濟(jì)南250355）

中藥全蝎的研究進(jìn)展

張盼盼1，馬明珠1，王集會(huì)2

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東濟(jì)南250355；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，山東濟(jì)南250355）

隨著生物技術(shù)的發(fā)展對(duì)中藥全蝎有效成分的提取由傳統(tǒng)的水提、醇提過(guò)渡到半仿生及仿生提取，且隨著分子生物學(xué)的發(fā)展對(duì)其藥理研究多集中于小分子蛋白。本文將根據(jù)近年來(lái)國(guó)內(nèi)外公開(kāi)發(fā)表的有關(guān)文獻(xiàn)，從中藥全蝎的提取工藝、化學(xué)成分及其藥理研究等方面進(jìn)行綜述。

中藥全蝎；綜述；提取工藝；化學(xué)成分；藥理研究

全蝎為節(jié)肢動(dòng)物門(mén)蛛形綱鉗蝎科東亞鉗蝎的干燥全體，主要產(chǎn)于山東、河南、河北等地，是我國(guó)傳統(tǒng)中藥材，具有通絡(luò)止痛、攻毒散結(jié)等功效，中醫(yī)應(yīng)用已有上千年的歷史。傳統(tǒng)用藥一般入丸劑、散劑，其次入煎劑，加工方式主要有鹽蝎、凍干粉、低溫冷凍致死風(fēng)干等，現(xiàn)代對(duì)于全蝎的提取主要有傳統(tǒng)的水提、醇提及當(dāng)前較為熱門(mén)的仿生提取和勻漿提取。現(xiàn)代研究表明鮮全蝎含有蝎毒、牛磺酸、棕櫚酸、三甲胺、甜菜堿、卵磷脂、軟硬脂酸等蛋白質(zhì)及非蛋白質(zhì)成分［1］。全蝎的藥效部位主要是蝎毒，而蝎毒的主要有效成分為蛋白質(zhì)類(lèi)［2］，隨著國(guó)內(nèi)外分子生物學(xué)的發(fā)展已從全蝎及其制品中分離得到數(shù)十種單體，包括蝎毒蛋白、多肽、寡肽，也可能含有核苷、糖肽及其低聚物，并具有廣泛的藥理活性，在臨床上用于多種疾病的治療?，F(xiàn)對(duì)中藥全蝎的提取工藝、化學(xué)成分及其藥理研究等方面進(jìn)行綜述。

1 取工藝研究

孟琳等［3］以可溶性蛋白得率和總提取物得率為指標(biāo)，比較水回流法、醇回流法、勻漿法、酶解法4種不同的提取方法，并選擇最佳工藝，結(jié)果顯示，12倍量水，高速，勻漿提取2次的提取工藝最佳。張永清等［4］以出干率、蛋白質(zhì)含量、氨基酸含量、各種元素含量等，并結(jié)合水與乙醇提取液紫外吸收成分差異比較為指標(biāo)，對(duì)比清水煮烘、鹽水煮烘、直接烘干、燙死烘干4種全蝎加工方法，結(jié)果說(shuō)明沸水燙死后風(fēng)干最佳。王集會(huì)等［5］以含水量、含鹽量及可溶性蛋白為指標(biāo)，對(duì)比研究沸鹽水煮、冰箱快速冷凍常溫風(fēng)干兩種產(chǎn)地加工方法，結(jié)果顯示冰箱快速冷凍常溫風(fēng)干的方法加工全蝎較好。侯林等［6］以水溶性蛋白含量和抗腫瘤活性為指標(biāo)，對(duì)比研究?jī)龈扇蛡鹘y(tǒng)全蝎加工方法，結(jié)果顯示凍干全蝎醇浸出物得率明顯高于傳統(tǒng)清水煮制全蝎，但低于鹽水煮制全蝎；水溶性蛋白的量及抗癌活性均顯著高于傳統(tǒng)炮制全蝎，主要因凍干加工可有效避免傳統(tǒng)炮制加熱對(duì)有效蛋白的破壞及水的溶解。

譚銀合等［7］以蝎毒蛋白的含量為指標(biāo)，利用紫外－分光光度法測(cè)定蛋白含量，用正交試驗(yàn)篩選全蝎水煎煮和乙醇回流兩種提取方法的最佳提取工藝，結(jié)果顯示每次4倍量50%乙醇回流提取30 min反復(fù)3次最佳。林超等［8］以丙氨酸含量為指標(biāo)，以時(shí)間、溫度、酶底比為考察因素，利用正交試驗(yàn)選取胃蛋白酶、胰蛋白酶酶解全蝎的最佳工藝，結(jié)果顯示先用40℃人工胃液加入2.5%胃蛋白酶酶解4 h，殘?jiān)D(zhuǎn)入53℃人工腸液，加入5.0%胰蛋白酶酶解4 h的工藝最佳，并用凱氏定氮法測(cè)得此條件下蛋白質(zhì)水解率達(dá)80.7%，抗腫瘤藥效顯示全蝎酶解液對(duì)肝癌H22具有明顯抑制作用，藥效強(qiáng)于全蝎原粉。

2 成分及其藥理研究

研究表明，鮮全蝎含有蝎毒、?；撬?、軟硬脂酸、棕櫚酸、膽甾醇、卵磷脂等成分［1］，以及蝎酸鈉鹽。蝎毒主要有蛋白成分和非蛋白成分，蛋白成分分為毒性蛋白和酶［1］，酶部分主要有乙酰膽堿酯酶、透明質(zhì)酸酶、磷脂酸酶等，非蛋白成分含有脂類(lèi)、組織胺、有機(jī)酸和游離氨基酸等［9］。

2.1 抗腫瘤化學(xué)成分及藥理研究 隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，近幾年國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)蝎毒抗腫瘤成分分離及其藥理作用的研究由大分子量蛋白質(zhì)（主要集中在7 000分子量以上的成分）不斷向小分子量多肽靠近，給藥途徑由注射給藥向口服給藥發(fā)展，作用機(jī)理不斷明確。

董偉華等［10］從東亞鉗蝎蝎毒中分離得到APBMV，藥理研究表明APBMV能高效殺傷多種腫瘤細(xì)胞，減輕化療骨髓抑制，對(duì)癌細(xì)胞有明顯殺傷作用，并能提高正常組織細(xì)胞的免疫活性。韓雪飛等［11］的研究進(jìn)一步證明APBMV不是單體，HPLC顯示有4個(gè)峰，并通過(guò)分子篩色譜－粒子交換技術(shù)從APBMV中分離得到AP－III，AP－III能有效抑制H22的生長(zhǎng)，在較高濃度時(shí)抑瘤率能到46.69%。氯毒素能特定的與rBmK CTa細(xì)胞表面，為氯通道的阻斷劑［12］。分子量為8 293 Da的HS－1為全蝎多縮氨酸中鉀渠道阻斷家族之一［13］。沈東海等［14］從東亞全蝎中提取、分離、篩選出了抗腫瘤的有效成分APBMV（分子量小于3 500），通過(guò)觀察純化的APBMV灌胃對(duì)昆明小鼠肝癌H22移植瘤的抑制作用證實(shí)其具有較高的抗癌活性，且有顯著性量效關(guān)系，同時(shí)證明口服蝎毒同樣可以抑制腫瘤生長(zhǎng)，說(shuō)明蝎毒抗癌有效成分主要集中在分子量小于3 500的成分中，也說(shuō)明蝎毒抗癌成分是從APBMV中分離得到的純化度更高抑制腫瘤作用更強(qiáng)的有效成分，為今后分離純化更高抑制腫瘤作用更強(qiáng)的成分和蝎毒藥物劑型的研制奠定了基礎(chǔ)。

侯毅等［15］研究蝎毒多肽提取物（PESV）對(duì)人膀胱癌T24細(xì)胞增殖的抑制作用及機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，PESV對(duì)腫瘤癌T24細(xì)胞增殖具有明顯抑制作用，其誘導(dǎo)T24細(xì)胞凋亡的作用可能與上調(diào)BXA和下調(diào)Bel－2的表達(dá)有關(guān)。徐林等［16］研究發(fā)現(xiàn)，蝎毒多肽提取物（PESV）能抑制小鼠Lewis肺癌的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移，其機(jī)制可能與抑制OPN和MMP－29的表達(dá)有關(guān)。楊文華等［17］研究蝎毒多肽提取物對(duì)白血病小鼠Bcl－2、SDF－1α與TGF－β1表達(dá)的影響，結(jié)果表明其可以有效地降低白血病小鼠血清及骨髓中Bel－2、SDF－1α的表達(dá)，提高TGF－β1的表達(dá)，從而較好的阻抑白血病細(xì)胞增殖和浸潤(rùn)。鄭安紅等［18］研究發(fā)現(xiàn)蝎毒多肽提取物PESV聯(lián)合5－氟尿嘧啶可抑制小鼠H22肝癌移植瘤血管生成擬態(tài)形成，并且其作用機(jī)制可能與抑制腫瘤微環(huán)境中HIF－1α和MMP－2有關(guān)。孫曉佳等［19］研究發(fā)現(xiàn)，蝎毒多肽提取物（PESV）可能通過(guò)抑制腫瘤微環(huán)境中DII4 Notch1的表達(dá)抑制腫瘤新生微血管發(fā)揮功能，從而發(fā)揮抗腫瘤功效的。王兆朋等［20］研究化療期間再增值腫瘤細(xì)胞中H22腫瘤細(xì)胞HIF－α和SDF－1／CXCR4表達(dá)的變化及PESV對(duì)其表達(dá)的影響，認(rèn)為在化療期間腫瘤組織產(chǎn)生HIF－α，HIF－1α誘導(dǎo)間質(zhì)組織分泌SDF－1，HIF－1α促進(jìn)VEGF的表達(dá)上調(diào)，從而誘發(fā)新生血管的生成。PESV有效抑制HIF－1α和SDF－1的表達(dá)，從而發(fā)揮了抗腫瘤作用。陳曉敏等［21］觀察東亞鉗蝎毒素ITX對(duì)C57BL／6小鼠Lewis肺癌（LLC）組織生長(zhǎng)的影響，觀察腫瘤和肺臟的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況，認(rèn)為ITX能夠通過(guò)加強(qiáng)腫瘤微環(huán)境中以炎癥為代表的非特異性免疫促進(jìn)C57BL／6小鼠LLC的生長(zhǎng)。邢百倩等［22］通過(guò)親和層析法提取蝎毒促增值肽在SD大鼠BMSCs中的靶蛋白探究促增值肽的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Bmkpp（一種含66個(gè)氨基酸的小分子多肽）在BMSCs上有獨(dú)特的靶標(biāo)，且Bmkpp可通過(guò)膜而與胞內(nèi)的靶點(diǎn)相作用，也證明了Bmkpp的作用靶點(diǎn)可因不同細(xì)胞而有別，也可作用于同一細(xì)胞的不同靶點(diǎn)。王晶娟等［23］研究全蝎蛋白藥效組分對(duì)Bel7402腫瘤細(xì)胞凋亡的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)當(dāng)濃度在37 g·L－1以上時(shí)全蝎蛋白藥效組分具有明顯的抑殺作用且效果與劑量呈線(xiàn)性正相關(guān)。全蝎蛋白藥效組分在體外有穩(wěn)定抑殺癌細(xì)胞的特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)表明全蝎蛋白藥效組分具有促進(jìn)Bel7402細(xì)胞凋亡、抑制增值的作用，其生物效應(yīng)指標(biāo)為9.25～175 g·L－1。腫瘤的免疫細(xì)胞治療是通過(guò)恢復(fù)與增強(qiáng)腫瘤患者自身的免疫檢測(cè)和殺菌能力來(lái)治療的。白潔等［24］從東亞全蝎蝎尾中提取到的小分子多肽BmK IA作用于人T淋巴細(xì)胞系Jurkat E6－1，發(fā)現(xiàn)在一定范圍內(nèi)，可顯著促進(jìn)T細(xì)胞的增殖。

2.2 抗凝化學(xué)成分及藥理研究 許文博等［25］通過(guò)對(duì)全蝎胃蛋白酶酶解液經(jīng)凝膠過(guò)濾層析后所得混合多肽的體外抗凝成分及其組分分析進(jìn)行研究，推測(cè)全蝎胃蛋白酶抗凝組分主要為分子量3 000以下的寡胎類(lèi)，且抗凝作用顯著。易小民等［26］通過(guò)觀察全蝎純化液對(duì)凝血酶誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放血管性血友病因子（vWF）和6－酮－前列腺素F1α的影響，探討全蝎抗凝作用的研究機(jī)制。結(jié)果表明全蝎純化液能抑制凝血酶誘導(dǎo)HUVEC釋放vWF，并能夠?qū)鼓笇?duì)HUVEC釋放6－keo－PGF1α的抑制作用，提示全蝎純化液對(duì)凝血酶誘導(dǎo)VEC損傷具有保護(hù)作用。石雕等［27］將SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、全蝎純化液組觀察其對(duì)血栓重量、TXB2、6－keo－PGF1α的影響。結(jié)果顯示與模型組相比全蝎純化液組TXB2和6－keo－PGF1α相對(duì)更為平衡，從而對(duì)血管內(nèi)皮組織具有保護(hù)和修復(fù)作用，恢復(fù)前列環(huán)素酶合成功能，有效地預(yù)防了血栓的形成。王巧云等［28］對(duì)蝎毒纖溶活性肽對(duì)缺氧血管內(nèi)皮細(xì)胞抗凝和纖溶功能的影響進(jìn)行研究，實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、缺氧模型組、藥物干預(yù)組3組，通過(guò)觀察細(xì)胞形態(tài)及培養(yǎng)上清液中的漂浮細(xì)胞情況來(lái)判斷影響。結(jié)果表明人臍靜脈EC缺氧損傷模型與正常對(duì)照組對(duì)比，模型組PAI活性顯著增高，t－PA活性顯著下降，6－keto－PGF1α和NO的量顯著下降；表明在人臍靜脈EC缺氧損傷那個(gè)模型中，由于內(nèi)皮細(xì)胞受損其分泌功能失調(diào)減弱了內(nèi)皮細(xì)胞的抗凝和纖溶功能。蝎毒纖溶活性肽可顯著降低漂浮細(xì)胞數(shù)，顯著提高6－keto－PGF1α和NO的水平，調(diào)節(jié)PAI和t－PAI的活性，提示蝎毒纖溶活性肽對(duì)EC在缺氧環(huán)境的生長(zhǎng)具有保護(hù)作用，改善EC分泌失調(diào)，增強(qiáng)了其抗凝與纖溶功能，可能是蝎毒有效成分治療缺血性心腦血管疾病的機(jī)制之一。

2.3 其他成分 黃迎春等［29］研究東亞全蝎的提取物對(duì)抗戊四氮所致的癲癇作用及對(duì)致癲癇小鼠大腦皮質(zhì)N－甲基－D天冬氨酸受體的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)適量的提取物能夠有效治療戊四氮引起的癲癇，顯著延長(zhǎng)癲癇小鼠的發(fā)作潛伏期，作用機(jī)制可能與抑制NMDAR結(jié)合活性以及激活GABAAR的結(jié)合活性有關(guān)。陳國(guó)光等［30］研究全蝎酶制劑對(duì)小鼠H22肝癌、S180肉瘤移植瘤的生長(zhǎng)影響。將試驗(yàn)組小鼠分兩批分別接種S180肉瘤腹水、H22小鼠腹水與對(duì)照組比較，結(jié)果顯示全蝎生物酶制劑對(duì)H22肝癌、S180肉瘤生長(zhǎng)有一定抑制作用。

3 結(jié)語(yǔ)

近年來(lái)對(duì)于全蝎的提取工藝不斷發(fā)展，有傳統(tǒng)的水提、醇提到現(xiàn)代的半仿生提取，但對(duì)于全蝎的發(fā)酵尚未見(jiàn)報(bào)道。有關(guān)研究表明通過(guò)發(fā)酵可以提高中藥材的有效成分提出率，而研究表明全蝎的有效成分多集中于分子量較小的蛋白，可以通過(guò)微生物對(duì)于全蝎的發(fā)酵作用獲得小分子量的蛋白，或者利用發(fā)酵和仿生提取相結(jié)合的方法提取，利用超濾和納濾對(duì)不同分子量的蛋白進(jìn)行分類(lèi)，并通過(guò)藥理實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確定有效部位。對(duì)于全蝎抗腫瘤成分的研究多集中于蝎毒蛋白，但有關(guān)研究表明抗腫瘤有效成分可能不止是蝎毒蛋白還有可能是寡肽、核苷酸、糖肽、三者低聚物等，抗腫瘤研究也應(yīng)按蛋白分子量區(qū)分開(kāi)多肽和寡肽、糖肽、核酸－蛋白低聚物分別進(jìn)行細(xì)胞藥理和動(dòng)物藥理實(shí)驗(yàn)。

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Research progress on Buthusmartensi Karsch

ZHANG Pan-pan1，MAMing-zhu1，WANG Ji-hui2
（1.College of Pharmacy，Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China；2.Experimental Center，Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China）

With the development of biotechnology for scorpion active ingredients of Buthusmartensi Karsch by the transition of the traditional water extraction，alcohol extraction to the semi bionics and bionic extraction，and with the development ofmolecular biology for its pharmacological research focused on the smallmolecular protein.This article summarized Buthusmartensi Karsch extraction process，chemical composition and pharmacological research and so onaccording to the published literatures at home and abroad in recent years.

Buthusmartensi Karsch；Review；Extraction process；Chemical composition；Pharmacological

R284

：A

2095－5375（2014）07－0411－004

張盼盼，女，研究方向：制藥工程，E－mail：lanfengxinzi91＠126.com

王集會(huì)，男，副教授，研究方向：中藥學(xué)，Tel：15853143465，E－mail：wangjihui10＠126.com