王 濤 李 玉 周 峰 李正鵬 郭力剛 鮑大鵬 譚 琦

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適于液體菌種生產(chǎn)的杏鮑菇優(yōu)良菌株篩選*

王 濤 李 玉 周 峰 李正鵬 郭力剛 鮑大鵬 譚 琦**

（國家食用菌工程技術(shù)研究中心，農(nóng)業(yè)部應(yīng)用真菌資源與利用重點開放實驗室，上海市農(nóng)業(yè)遺傳育種重點開放實驗室，上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，上海 201403）

以液體菌種菌絲量、菌球密度、直徑、發(fā)菌周期、出菇周期和產(chǎn)量等為指標(biāo)，對XH、BX、GR、U5-125、U5-150 五個杏鮑菇菌株進(jìn)行篩選。對五個菌株液體菌種的菌絲量、菌球密度、直徑變化曲線分析表明，BX生長過程中菌絲量最大，在接種期為0.93 g/mL，其次是XH；BX菌球密度最大，菌球直徑較小。栽培試驗表明，XH產(chǎn)量最高，為209.2 g。BX發(fā)菌周期與出菇周期都較短，分別為18.1天和12.1天。

杏鮑菇；液體菌種；菌絲量；產(chǎn)量

杏鮑菇因菇肉肥厚，口感脆嫩，具有杏仁味與鮑魚味，深受人們的喜愛，是一種廣泛進(jìn)行工廠化栽培的珍稀食藥用菌。

現(xiàn)在使用液體菌種的食用菌已有50余種[1]，而在我國工廠化生產(chǎn)中，金針菇使用液體菌種最多，其次是杏鮑菇。樂濤等[2]以液體菌種菌絲量為指標(biāo)，從6個香菇菌株選育出1個適合袋栽的液體菌種。閆靜等[3]也對秀珍菇液體菌種的選育進(jìn)行過報道。馬立芝等報道用液體菌種生產(chǎn)杏鮑菇生物學(xué)效益可達(dá)80%～100%，總產(chǎn)量提高4.25%[1]。相對于固體菌種而言，液體菌種有工藝簡便、周期短、菌種純、成本低等特點[4]。本研究采用搖瓶試驗和出菇試驗，從5個杏鮑菇菌株中篩選適合應(yīng)用于生產(chǎn)的液體菌株。

1 材料與方法

1.1 供試菌株 5個供試菌株分別為XH、BX、GR、U5-125、U5-150，來源于上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所。

1.2 PDA母種制備 PDA斜面配方為：去皮馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂15～20 g，水1 000 mL，pH自然。

1.3 一級液體母種 培養(yǎng)基配方為白砂糖20 g/L，豆粕粉3 g/L，酵母浸粉2 g/L，磷酸二氫鉀0.8 g/L，硫酸鎂0.7 g/L。其中，豆粕粉由豆粕經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后過100目篩。裝瓶量150 mL/250 mL，即250 mL搖瓶裝液量150 mL。

每搖瓶接種4～5塊0.5 cm2大小的PDA母種培養(yǎng)基。培養(yǎng)溫度22 ℃，搖床轉(zhuǎn)速140 r/min，培養(yǎng)7天。

1.4 液體搖瓶培養(yǎng) 液體搖瓶培養(yǎng)基配方同一級液體母種。裝瓶量150 mL/250 mL，接種量為300 μL。

1.5 培養(yǎng)與出菇 培養(yǎng)料配方為木屑45%，玉米芯20%，麩皮15%，米糠15%，玉米粉5%，含水量65%～67%。栽培瓶為1 100 mL塑料瓶，裝瓶量為750 g，每個處理32瓶。121 ℃滅菌2 h，冷卻至25 ℃以下接種。液體菌種搖瓶培養(yǎng)7天，培養(yǎng)液中除菌球外顏色澄清，以接種量20～25 mL接入栽培瓶。栽培瓶轉(zhuǎn)入培養(yǎng)室發(fā)菌，控制溫度20～23 ℃，空氣相對濕度75%，CO2濃度2 000～3 000 mL/m3（ppm，下同）。待菌絲發(fā)滿整個栽培瓶5天后進(jìn)行搔菌，經(jīng)搔菌的栽培瓶置于溫度16 ℃，空氣相對濕度85%～97%，CO2濃度1000～1500 mL/m3的栽培房內(nèi)倒扣培養(yǎng)8天出菇（栽培房的環(huán)境調(diào)控系統(tǒng)為荷蘭AEM公司產(chǎn)品）。之后翻轉(zhuǎn)栽培瓶，繼續(xù)培養(yǎng)，環(huán)境條件不變。使用SPSS 19.0和Excel 2013對所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。

1.6 測定方法

（1）菌絲量生長曲線測定。液體搖瓶培養(yǎng)基從開始培養(yǎng)至出現(xiàn)少量菌球時（一般為第3天或第4天），每隔24 h測定一次菌絲量。測定方法為，取100 mL菌液，使用80目的無紡布過濾，反復(fù)洗滌后置于65 ℃下烘干至恒重，稱重量。每次測3瓶，取平均值。

（2）菌球密度與菌球直徑生長曲線的測定。吸取菌液1 mL至干凈培養(yǎng)皿中，加適量水稀釋，放入菌落計數(shù)器中，讀取菌球個數(shù)與每個菌球直徑，計算平均值。液體搖瓶培養(yǎng)基從第3天或第4天起，每隔24 h測定一次。每次測3瓶，取平均值。

（3）菌液pH變化的測定。使用賽多利斯PB-10型pH計測定菌液的pH。每隔24 h測定一次，每次測3瓶，取平均值。

（4）各個菌株發(fā)菌周期與栽培性狀測定。從菌液接入栽培瓶開始，至菌絲發(fā)滿整個栽培瓶，計算發(fā)滿瓶所需時間。待出菇時，記錄出菇時間；子實體長至菌蓋伸展而邊緣尚內(nèi)卷時，記錄子實體個數(shù)，測量并記錄單菇重，單瓶產(chǎn)量，子實體長度，菌柄長度，菌蓋直徑，菌柄直徑。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌絲量生長曲線 5個菌株菌絲量生長曲線如圖1所示。

微生物發(fā)酵過程中，對數(shù)期菌絲生長平衡，代謝旺盛，代時穩(wěn)定，是擴(kuò)大接種的最佳時期[5]，5個菌株XH、BX、GR、U5-125、U5-150對數(shù)期的時間分別是5～10天，4～8天，5～10天，5～13天，6～12天，而在對數(shù)期相同時間菌絲量從大到小依次是BX、XH、GR、U5-125、U5-150。在本試驗搖瓶接種后第7天，5個菌株菌絲量分別為BX 0.93 g/mL，XH 0.58 g/mL，GR 0.4 g/mL，U5-125 0.43 g/mL，U-150 0.38 g/mL。因此，菌株BX較早進(jìn)入最佳接種期，其次為XH。

2.2 菌球密度的變化 5個菌株菌球密度的變化如圖2所示。

圖1 五個菌株液體菌種的菌絲量生長曲線

從圖2可知，菌株BX菌球密度始終較大，第7天為42 g/mL；其次是GR和XH；U5-125、U-150菌球密度較小，在第7天均為10 g/mL左右。在真菌生長過程中，隨著菌絲的生長和菌球數(shù)量增加，到后期，由于菌液有一定的粘稠度與機(jī)械剪切力，菌球數(shù)目也會增多。而菌球密度越大，則接入栽培瓶時的發(fā)菌點越多，越有利于菌絲吸收營養(yǎng)。

圖2 五個菌株液體菌種的菌球密度的變化

2.3 菌球直徑的變化 5個菌株菌球直徑的變化如圖3所示。

圖3 五個菌株液體菌種的菌球直徑的變化

在發(fā)酵培養(yǎng)的前期，菌液發(fā)菌點較少，菌絲易集中同一點生長，使菌球變大，隨著菌球密度增大，菌液的摩擦力也會增大，從而使菌球變小。菌絲球越小越利于充分吸收利用氧氣與養(yǎng)分。5個菌株在接種期的6～9天時，菌球直徑較小的是BX與XH，分別為1.66 mm與1.64 mm。

2.4 栽培周期與出菇性狀 5個菌株的栽培性狀如表1所示。

表1 5個菌株的栽培性狀

5個菌株中，BX發(fā)菌較快，發(fā)滿栽培瓶需18.1天，其次是XH，為19天；出菇時間BX較短，為12.3天；產(chǎn)量XH較高，為209.2 g，其次是BX；BX的子實體較長，但菌柄與菌蓋較小，單菇重在5個菌株中最小，為42.1 g。在出菇過程中，BX菌株產(chǎn)生菇蕾最多，單瓶子實體個數(shù)為4.6個。U5-125和U5-150子實體商品性狀較差，子實體短而粗，產(chǎn)量較低。

3 小結(jié)與討論

在液體發(fā)酵過程中，BX菌株具有較大的菌絲量，發(fā)酵周期短，生長對數(shù)期菌球密度大，菌球直徑較小，其在生產(chǎn)中能與栽培料充分接觸，發(fā)菌較快。因此，BX比較適合發(fā)酵生產(chǎn)，XH次之。

發(fā)酵過程中，培養(yǎng)基的配方與物理性狀也是重要的影響因素。適宜的碳氮比可產(chǎn)生更多的菌絲量，在配方相同的情況下，培養(yǎng)基粘稠度越大產(chǎn)生的菌球越多。此外，還受搖床的轉(zhuǎn)速和溫度等的影響。因此，選用適宜的配方與環(huán)境因子可使培養(yǎng)液產(chǎn)生更多的菌絲量，而要使菌球密度、大小更合適，尚需作進(jìn)一步研究。

出菇過程中，XH的單瓶子實體產(chǎn)量最高，為209.2 g。因而在實際生產(chǎn)時，要求生產(chǎn)周期短的，可選用菌株BX；要求產(chǎn)量高的，可選用XH。此外，市場上商品菇的菇形也會影響銷售，菌株BX菇形細(xì)長，U5-125與U5-150菇形粗短，XH菇形相對適中。在實際生產(chǎn)中，可根據(jù)市場不同的需求選用不同的菌株。

[1] 張勝友. 中國液體菌種生產(chǎn)新技術(shù)[M]. 武漢: 華中科技大學(xué)出版社，2010: 1-2.

[2] 樂濤. 六個香菇菌株液體菌種代料栽培的比較試驗[J]. 食用菌, 2006(2): 13-14.

[3] 閆靜. 秀珍菇不同菌株液體菌種比較研究[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報, 2007, 19(2): 127-129.

[5] 蔡信之, 黃君紅. 微生物學(xué)（第二版）[M]. 北京: 高等教育出版社, 2002: 152.

[4] 馬立芝. 杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)及貯藏工藝的研究[D]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué), 2005.

上海市國際科技合作基金項目（11490704300），國家星火計劃項目（2012GA680001）。

王濤(1987— )，男，在讀碩士，從事杏鮑菇液體菌種工廠化栽培研究，E-mail: angtao_01@foxmail.com

，E-mail: syj0@saas.sh.cn

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2095-0934（2014）02-086-03