華方波　張秀麗

[摘要] 目的 用高效液相色譜法測定養(yǎng)陰清肺口服液中毛蕊花糖苷的含量。 方法 色譜柱為Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84），檢測波長為334 nm，流速為1.0 ml/min，柱溫為28℃。 結(jié)果 毛蕊花糖苷進(jìn)樣量在10.12～253.00 μg（r=0.9995）線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為99.68%，RSD=0.8%（n=6）。 結(jié)論 高效液相色譜法方法準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于養(yǎng)陰清肺口服液的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 養(yǎng)陰清肺口服液；毛蕊花糖苷；高效液相色譜法

[中圖分類號] R286.0 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）02（a）-0015-03

養(yǎng)陰清肺口服液收載于原衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十五冊，由地黃、麥冬、白芍、薄荷腦等8味藥制備而成的口服液，具有養(yǎng)陰清肺、清肺利咽之功效，用于陰虛肺熱，咽喉干痛，干咳少痰，或痰中帶血[1-10]。由于原標(biāo)準(zhǔn)沒有對其主藥進(jìn)行質(zhì)量控制，本研究采用高效液相色譜法測定養(yǎng)陰清肺口服液中主藥地黃的毛蕊花糖苷含量，結(jié)果滿意。

1 儀器與試藥

島津LC-2010A型高效液相色譜儀（包括LC-2010型紫外檢測器，LC solution色譜工作站），毛蕊花糖苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111530-201208）；養(yǎng)陰清肺口服液（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號：2150006，2150007，2150010），乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84），檢測波長為334 nm，流速為1.0 ml/min，柱溫28℃，進(jìn)樣量為20 μl。理論板數(shù)按毛蕊花糖苷計(jì)算不低于5000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取毛蕊花糖苷對照品適量于100 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取1 ml置10 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得10.12 μg/ml的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取本品10 ml，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，加熱回流提取1.5 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 ml，濃縮至近干，殘?jiān)昧鲃酉嗳芙猓D(zhuǎn)至5 ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，即得。

2.4 陰性對照溶液的制備

按處方及工藝制備不含地黃的陰性樣品，同供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 陰性干擾試驗(yàn) 取“2.2，2.3，2.4”項(xiàng)下3種溶液各20 μl，分別注入高效液相色譜儀，測定。結(jié)果色譜圖中在毛蕊花糖苷峰相應(yīng)的保留時間附近未檢出干擾峰（圖1）。

2.5.2 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對照品溶液1、5、10、15、20、25 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=178 58X-5417，r=0.9995。結(jié)果表明，毛蕊花糖苷對照品進(jìn)樣量的線性范圍是10.12～253.00 μg。

2.5.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液20 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果毛蕊花糖苷峰面積的RSD為0.78%，說明儀器的精密度良好。

2.5.4 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批供試品（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號為2150010）樣品5份，分別依法處理后測定。結(jié)果毛蕊花糖苷含量的RSD為1.22%，說明該方法重復(fù)性良好。

2.5.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液（批號為2150010）20 μl，按上述色譜條件，分別于0、2、4、8、12 h時注入液相色譜儀，測定峰面積。結(jié)果RSD為0.78%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的供試品（批號2150010，毛蕊花糖苷含量為16.73 μg/ ml）6份，每份5 ml，分別精密加入毛蕊花糖苷對照品適量，按供試品溶液方法制備，依法測定含量并計(jì)算回收率（表1）。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.5.7 樣品含量測定 精密吸取對照品及供試品溶液各20 μl，分別注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果3批樣品（批號分別為2150010， 2150006，2150007）中的含量分別為16.73、14.92、15.37 μg/ml。

3 討論

本文對養(yǎng)陰清肺口服液中主藥地黃的主要有效成分毛蕊花糖苷建立了含量測定方法，結(jié)果可靠，對改進(jìn)養(yǎng)陰清肺口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有一定意義。

在供試品溶液制備過程中，為了保證樣品中毛蕊花糖苷的充分提取，用甲醇對樣品進(jìn)行回流提取1、1.5、2 h，結(jié)果顯示回流提取1.5 h效果最佳。

將流動相乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84）、乙腈-0.2%醋酸溶液（16∶84）進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示，乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84）分離效果最好。

由毛蕊花糖苷對照品溶液，在200～400 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果在波長334 nm處有最大吸收，所以334 nm作為測定波長。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：115.

[2] 周福成.高效液相色譜圖集[M].沈陽：遼寧科學(xué)技術(shù)出版社，2011：76.

[3] 莫迎.裸花紫珠制劑中毛蕊花糖苷含量測定[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，31（2）：245-247.

[4] 朱振興，段紅福.高效液相色譜法測定地黃中梓醇及毛蕊花糖苷的含量[J].中醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，28（7）：1023-1024.

[5] 吳競妮.高效液相色譜法測定消郁舒心膠囊中毛蕊花糖苷含量[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2013，32（11）：50-51.

[6] 邱廣仁，趙向陽.HPLC法測定咳嗽枇杷糖漿中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷[J].安微醫(yī)藥，2013，17（4）：573-574.

[7] 樊琪.左歸丸中毛蕊花糖苷含量測定[J].中國科技縱橫，2012，（6）：254.

[8] 張貴財(cái)，朱旭江，杜興，等.HPLC法測定蘭州肉蓯蓉中毛蕊花糖苷的含量[J].中國藥事，2010，24（8）：801-803.

[9] 張巖.高效液相色譜法測定寬腸理氣湯中松果菊苷和毛蕊花糖苷[J].中草藥，2010，41（12）：1994-1995.

[10] 邱倬星，熊學(xué)敏，胡曉艷，等.車前子超微速溶飲片中京尼平苷酸與毛蕊花糖苷的含量測定[J].中國醫(yī)藥科學(xué)，2013，3（5）：41-43.

（收稿日期：2013-12-04 本文編輯：郭靜娟）

[摘要] 目的 用高效液相色譜法測定養(yǎng)陰清肺口服液中毛蕊花糖苷的含量。 方法 色譜柱為Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84），檢測波長為334 nm，流速為1.0 ml/min，柱溫為28℃。 結(jié)果 毛蕊花糖苷進(jìn)樣量在10.12～253.00 μg（r=0.9995）線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為99.68%，RSD=0.8%（n=6）。 結(jié)論 高效液相色譜法方法準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于養(yǎng)陰清肺口服液的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 養(yǎng)陰清肺口服液；毛蕊花糖苷；高效液相色譜法

[中圖分類號] R286.0 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）02（a）-0015-03

養(yǎng)陰清肺口服液收載于原衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十五冊，由地黃、麥冬、白芍、薄荷腦等8味藥制備而成的口服液，具有養(yǎng)陰清肺、清肺利咽之功效，用于陰虛肺熱，咽喉干痛，干咳少痰，或痰中帶血[1-10]。由于原標(biāo)準(zhǔn)沒有對其主藥進(jìn)行質(zhì)量控制，本研究采用高效液相色譜法測定養(yǎng)陰清肺口服液中主藥地黃的毛蕊花糖苷含量，結(jié)果滿意。

1 儀器與試藥

島津LC-2010A型高效液相色譜儀（包括LC-2010型紫外檢測器，LC solution色譜工作站），毛蕊花糖苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111530-201208）；養(yǎng)陰清肺口服液（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號：2150006，2150007，2150010），乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84），檢測波長為334 nm，流速為1.0 ml/min，柱溫28℃，進(jìn)樣量為20 μl。理論板數(shù)按毛蕊花糖苷計(jì)算不低于5000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取毛蕊花糖苷對照品適量于100 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取1 ml置10 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得10.12 μg/ml的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取本品10 ml，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，加熱回流提取1.5 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 ml，濃縮至近干，殘?jiān)昧鲃酉嗳芙猓D(zhuǎn)至5 ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，即得。

2.4 陰性對照溶液的制備

按處方及工藝制備不含地黃的陰性樣品，同供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 陰性干擾試驗(yàn) 取“2.2，2.3，2.4”項(xiàng)下3種溶液各20 μl，分別注入高效液相色譜儀，測定。結(jié)果色譜圖中在毛蕊花糖苷峰相應(yīng)的保留時間附近未檢出干擾峰（圖1）。

2.5.2 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對照品溶液1、5、10、15、20、25 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=178 58X-5417，r=0.9995。結(jié)果表明，毛蕊花糖苷對照品進(jìn)樣量的線性范圍是10.12～253.00 μg。

2.5.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液20 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果毛蕊花糖苷峰面積的RSD為0.78%，說明儀器的精密度良好。

2.5.4 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批供試品（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號為2150010）樣品5份，分別依法處理后測定。結(jié)果毛蕊花糖苷含量的RSD為1.22%，說明該方法重復(fù)性良好。

2.5.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液（批號為2150010）20 μl，按上述色譜條件，分別于0、2、4、8、12 h時注入液相色譜儀，測定峰面積。結(jié)果RSD為0.78%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的供試品（批號2150010，毛蕊花糖苷含量為16.73 μg/ ml）6份，每份5 ml，分別精密加入毛蕊花糖苷對照品適量，按供試品溶液方法制備，依法測定含量并計(jì)算回收率（表1）。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.5.7 樣品含量測定 精密吸取對照品及供試品溶液各20 μl，分別注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果3批樣品（批號分別為2150010， 2150006，2150007）中的含量分別為16.73、14.92、15.37 μg/ml。

3 討論

本文對養(yǎng)陰清肺口服液中主藥地黃的主要有效成分毛蕊花糖苷建立了含量測定方法，結(jié)果可靠，對改進(jìn)養(yǎng)陰清肺口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有一定意義。

在供試品溶液制備過程中，為了保證樣品中毛蕊花糖苷的充分提取，用甲醇對樣品進(jìn)行回流提取1、1.5、2 h，結(jié)果顯示回流提取1.5 h效果最佳。

將流動相乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84）、乙腈-0.2%醋酸溶液（16∶84）進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示，乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84）分離效果最好。

由毛蕊花糖苷對照品溶液，在200～400 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果在波長334 nm處有最大吸收，所以334 nm作為測定波長。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：115.

[2] 周福成.高效液相色譜圖集[M].沈陽：遼寧科學(xué)技術(shù)出版社，2011：76.

[3] 莫迎.裸花紫珠制劑中毛蕊花糖苷含量測定[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，31（2）：245-247.

[4] 朱振興，段紅福.高效液相色譜法測定地黃中梓醇及毛蕊花糖苷的含量[J].中醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，28（7）：1023-1024.

[5] 吳競妮.高效液相色譜法測定消郁舒心膠囊中毛蕊花糖苷含量[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2013，32（11）：50-51.

[6] 邱廣仁，趙向陽.HPLC法測定咳嗽枇杷糖漿中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷[J].安微醫(yī)藥，2013，17（4）：573-574.

[7] 樊琪.左歸丸中毛蕊花糖苷含量測定[J].中國科技縱橫，2012，（6）：254.

[8] 張貴財(cái)，朱旭江，杜興，等.HPLC法測定蘭州肉蓯蓉中毛蕊花糖苷的含量[J].中國藥事，2010，24（8）：801-803.

[9] 張巖.高效液相色譜法測定寬腸理氣湯中松果菊苷和毛蕊花糖苷[J].中草藥，2010，41（12）：1994-1995.

[10] 邱倬星，熊學(xué)敏，胡曉艷，等.車前子超微速溶飲片中京尼平苷酸與毛蕊花糖苷的含量測定[J].中國醫(yī)藥科學(xué)，2013，3（5）：41-43.

（收稿日期：2013-12-04 本文編輯：郭靜娟）

[摘要] 目的 用高效液相色譜法測定養(yǎng)陰清肺口服液中毛蕊花糖苷的含量。 方法 色譜柱為Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84），檢測波長為334 nm，流速為1.0 ml/min，柱溫為28℃。 結(jié)果 毛蕊花糖苷進(jìn)樣量在10.12～253.00 μg（r=0.9995）線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為99.68%，RSD=0.8%（n=6）。 結(jié)論 高效液相色譜法方法準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于養(yǎng)陰清肺口服液的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 養(yǎng)陰清肺口服液；毛蕊花糖苷；高效液相色譜法

[中圖分類號] R286.0 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）02（a）-0015-03

養(yǎng)陰清肺口服液收載于原衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十五冊，由地黃、麥冬、白芍、薄荷腦等8味藥制備而成的口服液，具有養(yǎng)陰清肺、清肺利咽之功效，用于陰虛肺熱，咽喉干痛，干咳少痰，或痰中帶血[1-10]。由于原標(biāo)準(zhǔn)沒有對其主藥進(jìn)行質(zhì)量控制，本研究采用高效液相色譜法測定養(yǎng)陰清肺口服液中主藥地黃的毛蕊花糖苷含量，結(jié)果滿意。

1 儀器與試藥

島津LC-2010A型高效液相色譜儀（包括LC-2010型紫外檢測器，LC solution色譜工作站），毛蕊花糖苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111530-201208）；養(yǎng)陰清肺口服液（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號：2150006，2150007，2150010），乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84），檢測波長為334 nm，流速為1.0 ml/min，柱溫28℃，進(jìn)樣量為20 μl。理論板數(shù)按毛蕊花糖苷計(jì)算不低于5000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取毛蕊花糖苷對照品適量于100 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取1 ml置10 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得10.12 μg/ml的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取本品10 ml，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，加熱回流提取1.5 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 ml，濃縮至近干，殘?jiān)昧鲃酉嗳芙猓D(zhuǎn)至5 ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，即得。

2.4 陰性對照溶液的制備

按處方及工藝制備不含地黃的陰性樣品，同供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 陰性干擾試驗(yàn) 取“2.2，2.3，2.4”項(xiàng)下3種溶液各20 μl，分別注入高效液相色譜儀，測定。結(jié)果色譜圖中在毛蕊花糖苷峰相應(yīng)的保留時間附近未檢出干擾峰（圖1）。

2.5.2 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對照品溶液1、5、10、15、20、25 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=178 58X-5417，r=0.9995。結(jié)果表明，毛蕊花糖苷對照品進(jìn)樣量的線性范圍是10.12～253.00 μg。

2.5.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液20 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果毛蕊花糖苷峰面積的RSD為0.78%，說明儀器的精密度良好。

2.5.4 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批供試品（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號為2150010）樣品5份，分別依法處理后測定。結(jié)果毛蕊花糖苷含量的RSD為1.22%，說明該方法重復(fù)性良好。

2.5.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液（批號為2150010）20 μl，按上述色譜條件，分別于0、2、4、8、12 h時注入液相色譜儀，測定峰面積。結(jié)果RSD為0.78%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的供試品（批號2150010，毛蕊花糖苷含量為16.73 μg/ ml）6份，每份5 ml，分別精密加入毛蕊花糖苷對照品適量，按供試品溶液方法制備，依法測定含量并計(jì)算回收率（表1）。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.5.7 樣品含量測定 精密吸取對照品及供試品溶液各20 μl，分別注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果3批樣品（批號分別為2150010， 2150006，2150007）中的含量分別為16.73、14.92、15.37 μg/ml。

3 討論

本文對養(yǎng)陰清肺口服液中主藥地黃的主要有效成分毛蕊花糖苷建立了含量測定方法，結(jié)果可靠，對改進(jìn)養(yǎng)陰清肺口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有一定意義。

在供試品溶液制備過程中，為了保證樣品中毛蕊花糖苷的充分提取，用甲醇對樣品進(jìn)行回流提取1、1.5、2 h，結(jié)果顯示回流提取1.5 h效果最佳。

將流動相乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84）、乙腈-0.2%醋酸溶液（16∶84）進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示，乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84）分離效果最好。

由毛蕊花糖苷對照品溶液，在200～400 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果在波長334 nm處有最大吸收，所以334 nm作為測定波長。

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（收稿日期：2013-12-04 本文編輯：郭靜娟）