臧希卉

吉林省疾病控制中心消毒所，吉林長春 130000

為了防止丙型肝炎的交叉感染發(fā)生，往往在對抗-HCV 指標(biāo)進(jìn)行篩查的時候，都會采用靈敏度較高的試劑來完成篩選。目前，為了快速地縮短運(yùn)用抗-HCV 進(jìn)行檢驗(yàn)的“窗口期”，很多機(jī)構(gòu)已將HCV 核酸的檢測方法使用于對抗-HCV 的篩選[1]。為了探討與分析抗-HCV 陽性反應(yīng)中，受檢者血清中的HCV 核酸的檢測狀況，本研究選取部分受檢者抗-HCV 陽性的血清，進(jìn)行HCV 核酸指標(biāo)的相關(guān)檢測和研究，取得了較好的效果，現(xiàn)進(jìn)行如下報道。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集本所從2011年6月—2013年5月期間篩選出血清抗-HCV 陽性反應(yīng)標(biāo)本一共152 份，其中，同時使用兩種ELISA 的試劑而進(jìn)行檢測呈陽性反應(yīng)的血清一共50 份，使用單種試劑而通過檢測呈陽性反應(yīng)的血清一共102 份，主要包括使用試劑2 檢測出的陽性(含使用試劑1 檢測出陰性)標(biāo)本共有59 份；使用試劑1 來檢測出的陽性(包含使用試劑2 檢測出陰性)標(biāo)本共有43 份。

1.2 檢測方法

使用HCV 核酸擴(kuò)增酶免檢測試劑盒（由華美生物制造）、抗-HCV ELISA 檢測試劑和基因擴(kuò)增儀以及高速冷凍離心機(jī)等?？笻CV 陽性的標(biāo)本采用受檢者的單份血清進(jìn)行HCV 核酸擴(kuò)增酶免的檢測，然后依照說明書來進(jìn)行操作，首先在采集血液以后，于6 h 內(nèi)進(jìn)行血清的分離，放置于零下70℃的冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存，在實(shí)驗(yàn)之前解凍后，取每份樣品100μL 的放到樣品管內(nèi)，再用酶免樣品處理液和乙醇（濃度為75%）來處理血清樣品，棄上清以后快速進(jìn)行烘干；然后將1 其在樣品管內(nèi)冷卻，并加入反轉(zhuǎn)錄酶與反轉(zhuǎn)錄混合物以后進(jìn)行孵育，另外加入尿嘧啶DNA 糖基化酶和PCR擴(kuò)增反應(yīng)的混合物，迅速在擴(kuò)增儀內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)增處理[2]；之后把擴(kuò)增的產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到捕捉板內(nèi)，同時加入雜交反應(yīng)液后，在溫度是37℃的環(huán)境中，進(jìn)行孵育、洗板并顯色，最后再用酶標(biāo)儀來確認(rèn)檢測的結(jié)果，然后分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)原理

本文研究所得的數(shù)據(jù)全部采用軟件SPSS 18.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)進(jìn)行處理，兩組之間的計(jì)數(shù)資料對比采用χ2的檢驗(yàn)，全部計(jì)量資料用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行表示，以P＜0.05，表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

通過本次試驗(yàn)中收集的50 份通過2 種ELISA 試劑來檢測抗-HCV 呈陽性反應(yīng)血清。其中，共有7 份抗-HCA 呈陽性受檢者，運(yùn)用2 種試劑進(jìn)行檢測都顯示出強(qiáng)陽性(S/CO 大于10)，其HCV核酸檢測也全部顯示為陽性（比例為100%），其它43 份抗-HCA陽性受檢者，經(jīng)檢測均顯示為較弱的陽性(S/CO 小于5)，其中HCV 核酸檢測顯示陽性的共20 份（占46.5%）。

另外，通過運(yùn)用1 種試劑來檢測抗-HCV 陽性血清，都顯示出較弱陽性(S/CO 小于5)，該HCV 核酸檢測的陽性率也比較低（11例，占10.8%），說明抗-HCV 陽性反應(yīng)血清中的HCV 核酸的檢出率和S/ CO 數(shù)值的高低存在相關(guān)性。同時，運(yùn)用2 種試劑檢測抗-HCV 陽性率要比運(yùn)用1 種試劑進(jìn)行檢測抗HCV 陽性率，二者對比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同試劑抗-HCA 陽性血清核酸擴(kuò)增酶免檢結(jié)果對比

3 討論

本次試驗(yàn)中收集的50 份抗HCA 陽性中，有7 份抗HCA 呈陽性受檢者，運(yùn)用2 種試劑進(jìn)行檢測都顯示出強(qiáng)陽性(S/CO 大于10)，其HCV 核酸檢測也全部顯示為陽性（比例為100%），因此可以證明，若抗HCV 呈陽性并且HCV 核酸檢測也呈現(xiàn)陽性，則可以確定已經(jīng)是HCV 感染；但是，如果抗-HCV 呈現(xiàn)陽性，為何HCV 核酸檢測結(jié)果卻呈現(xiàn)陰性？ 究其原因則值得進(jìn)行深入的研究和分析。

許志遠(yuǎn)等[3]研究證明，即使血清當(dāng)中僅存在有1 個病毒核酸分子，那么經(jīng)過PCR 擴(kuò)增以后也可以被檢測出來，但是在實(shí)際的操作中，由于檢測出血清中的病毒核酸如果含量真是太少，常常會導(dǎo)致在提取核酸時無法實(shí)現(xiàn)。同樣，對于PCR 試劑的檢測靈敏度和樣本及擴(kuò)增體系中，均很有可能存在著某類抑制病毒核酸擴(kuò)增效果的影響因素等，從而影響到病毒核酸的總檢出率與準(zhǔn)確性[4]。在本組檢測中，一部分抗HCV 呈弱陽性，反應(yīng)血清的HCV 核酸在進(jìn)行檢測時卻呈陰性，43 份抗HCA 陽性受檢者經(jīng)檢測均顯示為較弱的陽性(S/CO 小于5)，其中HCV 核酸檢測顯示陽性的共20 份（占46.5%）。其余為陰性，這些極有可能和上述相關(guān)因素密切相關(guān)。

林洪鏗等[5]有關(guān)研究文獻(xiàn)報道，只有55%的抗HCV 陽性者可以檢測出HCV RNA，此時病毒極有可能會自發(fā)性的丟失。通過對本組資料進(jìn)行分析表明，仍然有抗HCA 受檢者，在通過使用兩種試劑情況下，進(jìn)行的抗-HCV 檢測呈現(xiàn)陽性，但實(shí)在通過HCV 核酸檢測時卻呈現(xiàn)陰性，其中很大的原因的，就是抗HCV 檢驗(yàn)篩查結(jié)果屬于假陽性，而在現(xiàn)實(shí)中，受檢者根本并沒有被感染HCV；另外的原因則可能是：HCV 的病毒血癥已經(jīng)完全消退或者是病毒的基因產(chǎn)生了變異等。另據(jù)閔志軍等[6]有關(guān)文獻(xiàn)表明，抗-HCV呈陽性的受檢者，在通過HCV 的核酸檢測雖然呈現(xiàn)陰性，但是仍然會使他人受到交叉感染。

以上研究表明，通過針對HCV 的血液指標(biāo)篩查，不應(yīng)當(dāng)僅僅參照HCV 核酸而進(jìn)行檢測，而應(yīng)當(dāng)取代為抗-HCV 的指標(biāo)檢測，而且兩者必須密切結(jié)合，這樣才能有效地縮短患者HCV 感染的“窗口期”，以此來保證供血和受血者的安全與健康。

[1]歐陽玲,李雪麗,黃呈輝,等.對HBsag 和抗-HCV ELISA 篩查陽性獻(xiàn)血者進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)分析[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，20119(12)：177-178.

[2]任芙蓉，龔曉燕，李晶晶，等.獻(xiàn)血員丙型肝炎病毒抗體酶免疫法檢測試劑的測定值與其真陽性的相關(guān)性[J].中華肝臟病雜志，2012,13(7)：255.

[3]許志遠(yuǎn),李冬妹,冷嬋,等.對國產(chǎn)及進(jìn)口抗-HCV 酶聯(lián)免疫試劑實(shí)驗(yàn)室檢測效果的探討[J].中國輸血雜志，2010,16(2)：104.

[4]Operska EA,Mosley JW.HCV viral load in anti-HCV-positive donors and terout come in their recipients[J].Transfasion，2011,18(3)：750-752.

[5]林洪鏗,江偉梅,周曉真,等.獻(xiàn)血者ELISA 抗-HCV 篩查反應(yīng)性強(qiáng)度與RIBA 確證陽性的相關(guān)性研究[J].中國輸血雜志，2010,20(8)：83-85.

[6]閔志軍,張力超,張建偉,等.試劑盒平衡時間對抗-HCV 檢測結(jié)果的影響因素分析[J].臨床血液學(xué)雜志：輸血與檢驗(yàn)版，2010,11(6)：128.