摘要：實(shí)驗(yàn)確定了京尼平苷酸、桃葉珊瑚苷和芍藥苷的質(zhì)譜和液相的檢測(cè)方法。繪制出了京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線和藥時(shí)曲線。

關(guān)鍵詞：京尼平苷酸；桃葉珊瑚苷；芍藥苷

中圖分類號(hào)： S571.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 1674-0432（2014）-02-23-2

杜仲茶具有一定的降壓效果，其中京尼平甘酸、桃葉珊瑚苷等成分具有很顯著功能活性，而且含量較高。我們就是要建立一套完整的提取、檢測(cè)方法，為以后的藥代動(dòng)力學(xué)研究作理論基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器與試劑

市售杜仲茶，產(chǎn)地為湖南張家界。

正丁醇，J&K Chemical Ltd。

乙醇，J&K Chemical Ltd。

甲醇，J&K Chemical Ltd。

去離子水，選用哈爾濱市文景蒸餾水廠的。

高速中藥粉碎機(jī)，選用浙江永康溪岸藥具廠的。

Waters高效液相色譜儀，選用美國(guó)Waters公司的。

BS210S電子天平，選用北京賽多利斯有限公司的。

DT200A電子天平，選用江蘇常熟長(zhǎng)青儀器儀表廠的。

22R型高速離心機(jī)，選用德國(guó)Heaerussepatech公司的。

KQ-250DB型臺(tái)式數(shù)控超聲波清洗器，選用昆山市超聲儀器有限公司的。

Agilent 1100高效液相色譜儀，選用美國(guó)AB公司的。

京尼平苷酸標(biāo)準(zhǔn)品，選用Sigma公司的。

桃葉珊瑚苷標(biāo)準(zhǔn)品，選用Sigma公司的。

芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品，選用Sigma公司的。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠，雌雄各半，體重（240±20）克，清潔級(jí)，由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 原料處理

稱取杜仲茶50克，粉碎，溶解在500毫升水中，溫度60℃熱回流提取30分鐘。然后過濾，濾渣溶解在500毫升水中，溫度60℃熱回流提取30分鐘。過濾后，將兩次濾液混合在一起。用等體積正丁醇萃取3次，將3次萃取液混合?；旌虾蟮妮腿∫河眯D(zhuǎn)蒸發(fā)儀處理，溫度60℃，每次時(shí)間不超過30分鐘。將最后得到的固體樣品凍干，保存待用。

3 方法

3.1 液相方法

安捷倫C18 色譜柱（250 mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相組成是水和甲醇，比例為57%水和43%甲醇，流速1.0毫升/分鐘，進(jìn)樣量10微克。

3.2 質(zhì)譜方法

質(zhì)譜條件掃描方式采用負(fù)離子多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式MRM電壓-4 500伏，離子源霧化溫度300℃，霧化氣82.7 千帕，氣簾氣68.9千帕。京尼平苷酸分子量373.2，碎片分子量211.1，DP電壓-77伏，CE電壓-18.5伏，CXP電壓-10伏。桃葉珊瑚苷分子量345.2，碎片分子量182.9，DP電壓-49伏，CE 電壓-13伏，CXP電壓-2伏。芍藥苷分子量479.3，碎片分子量121.1，DP電壓-60伏，CE電壓-22伏，CXP電壓-8伏。

4 制備及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

4.1 標(biāo)準(zhǔn)品的制備

稱取一定量的京尼平苷酸[1]和桃葉珊瑚苷用甲醇溶解，配成濃度為1毫克/毫升的混合標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)液。稱取一定量的芍藥苷，用甲醇溶解，配成濃度為100納克/毫升的標(biāo)準(zhǔn)液。用200微克的空白血漿、100毫升的芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)液、100毫升的混合標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)液（經(jīng)稀釋），混合后使得混合標(biāo)準(zhǔn)品的濃度分別為0.192，0.96，4.8，24，120，600，3000納克/毫升。渦旋30秒后12000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘取上清液。

4.2 血樣的制備

血漿樣品制備血樣于12000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘后取血漿200微克，加入100毫升的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，100毫升芍藥苷，渦旋30 秒，12 000 轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清液進(jìn)行血漿中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的LC-MS/MS測(cè)定。

4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

用內(nèi)標(biāo)法繪制京尼平苷算和桃葉珊瑚苷[2]的標(biāo)準(zhǔn)曲線，芍藥苷為內(nèi)標(biāo)。

5 大鼠給藥

大鼠以每克體重給藥1毫克的給藥量進(jìn)行口服給藥，取血時(shí)間為0，0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，5，6，8，10，12，24h。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)出血樣中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的含量，繪制藥時(shí)曲線。

6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

6.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖1 京尼平苷酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

根據(jù)測(cè)得京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷和混合標(biāo)準(zhǔn)品也內(nèi)標(biāo)芍藥苷相應(yīng)的濃度及峰面積，繪制出相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖1、圖2。其中京尼平苷酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=2.041x + 0.1482，R2 = 0.9999，桃葉珊瑚苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y = 7.9851x + 0.5673，R2 = 0.9998。

圖2桃葉珊瑚苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

6.2 給藥后血樣中含量的測(cè)定

圖3京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷藥時(shí)曲線

根據(jù)所繪制的京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)大鼠口服給藥后血樣中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷對(duì)應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)和濃度作藥時(shí)曲線圖。

7 結(jié)論

原料經(jīng)處理后給藥，從藥時(shí)曲線中可以看出，京尼平苷酸最大濃度可達(dá)大概45納克/毫升，而桃葉珊瑚苷只能達(dá)到25納克/毫升左右，濃度值略低，可考慮使用氯仿或四氯化碳等其他常見有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取。

參考文獻(xiàn)

[1]彭婕，錢之玉，等.京尼平苷和西紅花酸保肝利膽作用的比較.中國(guó)新藥雜志，2003（2）.

[2]成龍，楊紅軍，等.京尼平苷及京尼平的藥代動(dòng)力學(xué)研究—排泄動(dòng)力學(xué).第六次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合中青年學(xué)術(shù)研討會(huì). 2009.

作者簡(jiǎn)介：馬宇亮，黑龍江工業(yè)學(xué)院環(huán)境工程系，碩士研究生，研究方向：生物及生物制藥。

摘要：實(shí)驗(yàn)確定了京尼平苷酸、桃葉珊瑚苷和芍藥苷的質(zhì)譜和液相的檢測(cè)方法。繪制出了京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線和藥時(shí)曲線。

關(guān)鍵詞：京尼平苷酸；桃葉珊瑚苷；芍藥苷

中圖分類號(hào)： S571.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 1674-0432（2014）-02-23-2

杜仲茶具有一定的降壓效果，其中京尼平甘酸、桃葉珊瑚苷等成分具有很顯著功能活性，而且含量較高。我們就是要建立一套完整的提取、檢測(cè)方法，為以后的藥代動(dòng)力學(xué)研究作理論基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器與試劑

市售杜仲茶，產(chǎn)地為湖南張家界。

正丁醇，J&K Chemical Ltd。

乙醇，J&K Chemical Ltd。

甲醇，J&K Chemical Ltd。

去離子水，選用哈爾濱市文景蒸餾水廠的。

高速中藥粉碎機(jī)，選用浙江永康溪岸藥具廠的。

Waters高效液相色譜儀，選用美國(guó)Waters公司的。

BS210S電子天平，選用北京賽多利斯有限公司的。

DT200A電子天平，選用江蘇常熟長(zhǎng)青儀器儀表廠的。

22R型高速離心機(jī)，選用德國(guó)Heaerussepatech公司的。

KQ-250DB型臺(tái)式數(shù)控超聲波清洗器，選用昆山市超聲儀器有限公司的。

Agilent 1100高效液相色譜儀，選用美國(guó)AB公司的。

京尼平苷酸標(biāo)準(zhǔn)品，選用Sigma公司的。

桃葉珊瑚苷標(biāo)準(zhǔn)品，選用Sigma公司的。

芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品，選用Sigma公司的。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠，雌雄各半，體重（240±20）克，清潔級(jí)，由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 原料處理

稱取杜仲茶50克，粉碎，溶解在500毫升水中，溫度60℃熱回流提取30分鐘。然后過濾，濾渣溶解在500毫升水中，溫度60℃熱回流提取30分鐘。過濾后，將兩次濾液混合在一起。用等體積正丁醇萃取3次，將3次萃取液混合?；旌虾蟮妮腿∫河眯D(zhuǎn)蒸發(fā)儀處理，溫度60℃，每次時(shí)間不超過30分鐘。將最后得到的固體樣品凍干，保存待用。

3 方法

3.1 液相方法

安捷倫C18 色譜柱（250 mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相組成是水和甲醇，比例為57%水和43%甲醇，流速1.0毫升/分鐘，進(jìn)樣量10微克。

3.2 質(zhì)譜方法

質(zhì)譜條件掃描方式采用負(fù)離子多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式MRM電壓-4 500伏，離子源霧化溫度300℃，霧化氣82.7 千帕，氣簾氣68.9千帕。京尼平苷酸分子量373.2，碎片分子量211.1，DP電壓-77伏，CE電壓-18.5伏，CXP電壓-10伏。桃葉珊瑚苷分子量345.2，碎片分子量182.9，DP電壓-49伏，CE 電壓-13伏，CXP電壓-2伏。芍藥苷分子量479.3，碎片分子量121.1，DP電壓-60伏，CE電壓-22伏，CXP電壓-8伏。

4 制備及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

4.1 標(biāo)準(zhǔn)品的制備

稱取一定量的京尼平苷酸[1]和桃葉珊瑚苷用甲醇溶解，配成濃度為1毫克/毫升的混合標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)液。稱取一定量的芍藥苷，用甲醇溶解，配成濃度為100納克/毫升的標(biāo)準(zhǔn)液。用200微克的空白血漿、100毫升的芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)液、100毫升的混合標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)液（經(jīng)稀釋），混合后使得混合標(biāo)準(zhǔn)品的濃度分別為0.192，0.96，4.8，24，120，600，3000納克/毫升。渦旋30秒后12000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘取上清液。

4.2 血樣的制備

血漿樣品制備血樣于12000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘后取血漿200微克，加入100毫升的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，100毫升芍藥苷，渦旋30 秒，12 000 轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清液進(jìn)行血漿中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的LC-MS/MS測(cè)定。

4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

用內(nèi)標(biāo)法繪制京尼平苷算和桃葉珊瑚苷[2]的標(biāo)準(zhǔn)曲線，芍藥苷為內(nèi)標(biāo)。

5 大鼠給藥

大鼠以每克體重給藥1毫克的給藥量進(jìn)行口服給藥，取血時(shí)間為0，0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，5，6，8，10，12，24h。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)出血樣中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的含量，繪制藥時(shí)曲線。

6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

6.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖1 京尼平苷酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

根據(jù)測(cè)得京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷和混合標(biāo)準(zhǔn)品也內(nèi)標(biāo)芍藥苷相應(yīng)的濃度及峰面積，繪制出相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖1、圖2。其中京尼平苷酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=2.041x + 0.1482，R2 = 0.9999，桃葉珊瑚苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y = 7.9851x + 0.5673，R2 = 0.9998。

圖2桃葉珊瑚苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

6.2 給藥后血樣中含量的測(cè)定

圖3京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷藥時(shí)曲線

根據(jù)所繪制的京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)大鼠口服給藥后血樣中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷對(duì)應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)和濃度作藥時(shí)曲線圖。

7 結(jié)論

原料經(jīng)處理后給藥，從藥時(shí)曲線中可以看出，京尼平苷酸最大濃度可達(dá)大概45納克/毫升，而桃葉珊瑚苷只能達(dá)到25納克/毫升左右，濃度值略低，可考慮使用氯仿或四氯化碳等其他常見有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取。

參考文獻(xiàn)

[1]彭婕，錢之玉，等.京尼平苷和西紅花酸保肝利膽作用的比較.中國(guó)新藥雜志，2003（2）.

[2]成龍，楊紅軍，等.京尼平苷及京尼平的藥代動(dòng)力學(xué)研究—排泄動(dòng)力學(xué).第六次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合中青年學(xué)術(shù)研討會(huì). 2009.

作者簡(jiǎn)介：馬宇亮，黑龍江工業(yè)學(xué)院環(huán)境工程系，碩士研究生，研究方向：生物及生物制藥。

摘要：實(shí)驗(yàn)確定了京尼平苷酸、桃葉珊瑚苷和芍藥苷的質(zhì)譜和液相的檢測(cè)方法。繪制出了京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線和藥時(shí)曲線。

關(guān)鍵詞：京尼平苷酸；桃葉珊瑚苷；芍藥苷

中圖分類號(hào)： S571.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 1674-0432（2014）-02-23-2

杜仲茶具有一定的降壓效果，其中京尼平甘酸、桃葉珊瑚苷等成分具有很顯著功能活性，而且含量較高。我們就是要建立一套完整的提取、檢測(cè)方法，為以后的藥代動(dòng)力學(xué)研究作理論基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器與試劑

市售杜仲茶，產(chǎn)地為湖南張家界。

正丁醇，J&K Chemical Ltd。

乙醇，J&K Chemical Ltd。

甲醇，J&K Chemical Ltd。

去離子水，選用哈爾濱市文景蒸餾水廠的。

高速中藥粉碎機(jī)，選用浙江永康溪岸藥具廠的。

Waters高效液相色譜儀，選用美國(guó)Waters公司的。

BS210S電子天平，選用北京賽多利斯有限公司的。

DT200A電子天平，選用江蘇常熟長(zhǎng)青儀器儀表廠的。

22R型高速離心機(jī)，選用德國(guó)Heaerussepatech公司的。

KQ-250DB型臺(tái)式數(shù)控超聲波清洗器，選用昆山市超聲儀器有限公司的。

Agilent 1100高效液相色譜儀，選用美國(guó)AB公司的。

京尼平苷酸標(biāo)準(zhǔn)品，選用Sigma公司的。

桃葉珊瑚苷標(biāo)準(zhǔn)品，選用Sigma公司的。

芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品，選用Sigma公司的。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠，雌雄各半，體重（240±20）克，清潔級(jí)，由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 原料處理

稱取杜仲茶50克，粉碎，溶解在500毫升水中，溫度60℃熱回流提取30分鐘。然后過濾，濾渣溶解在500毫升水中，溫度60℃熱回流提取30分鐘。過濾后，將兩次濾液混合在一起。用等體積正丁醇萃取3次，將3次萃取液混合?；旌虾蟮妮腿∫河眯D(zhuǎn)蒸發(fā)儀處理，溫度60℃，每次時(shí)間不超過30分鐘。將最后得到的固體樣品凍干，保存待用。

3 方法

3.1 液相方法

安捷倫C18 色譜柱（250 mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相組成是水和甲醇，比例為57%水和43%甲醇，流速1.0毫升/分鐘，進(jìn)樣量10微克。

3.2 質(zhì)譜方法

質(zhì)譜條件掃描方式采用負(fù)離子多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式MRM電壓-4 500伏，離子源霧化溫度300℃，霧化氣82.7 千帕，氣簾氣68.9千帕。京尼平苷酸分子量373.2，碎片分子量211.1，DP電壓-77伏，CE電壓-18.5伏，CXP電壓-10伏。桃葉珊瑚苷分子量345.2，碎片分子量182.9，DP電壓-49伏，CE 電壓-13伏，CXP電壓-2伏。芍藥苷分子量479.3，碎片分子量121.1，DP電壓-60伏，CE電壓-22伏，CXP電壓-8伏。

4 制備及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

4.1 標(biāo)準(zhǔn)品的制備

稱取一定量的京尼平苷酸[1]和桃葉珊瑚苷用甲醇溶解，配成濃度為1毫克/毫升的混合標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)液。稱取一定量的芍藥苷，用甲醇溶解，配成濃度為100納克/毫升的標(biāo)準(zhǔn)液。用200微克的空白血漿、100毫升的芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)液、100毫升的混合標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)液（經(jīng)稀釋），混合后使得混合標(biāo)準(zhǔn)品的濃度分別為0.192，0.96，4.8，24，120，600，3000納克/毫升。渦旋30秒后12000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘取上清液。

4.2 血樣的制備

血漿樣品制備血樣于12000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘后取血漿200微克，加入100毫升的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，100毫升芍藥苷，渦旋30 秒，12 000 轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清液進(jìn)行血漿中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的LC-MS/MS測(cè)定。

4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

用內(nèi)標(biāo)法繪制京尼平苷算和桃葉珊瑚苷[2]的標(biāo)準(zhǔn)曲線，芍藥苷為內(nèi)標(biāo)。

5 大鼠給藥

大鼠以每克體重給藥1毫克的給藥量進(jìn)行口服給藥，取血時(shí)間為0，0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，5，6，8，10，12，24h。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)出血樣中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的含量，繪制藥時(shí)曲線。

6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

6.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖1 京尼平苷酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

根據(jù)測(cè)得京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷和混合標(biāo)準(zhǔn)品也內(nèi)標(biāo)芍藥苷相應(yīng)的濃度及峰面積，繪制出相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖1、圖2。其中京尼平苷酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=2.041x + 0.1482，R2 = 0.9999，桃葉珊瑚苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y = 7.9851x + 0.5673，R2 = 0.9998。

圖2桃葉珊瑚苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

6.2 給藥后血樣中含量的測(cè)定

圖3京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷藥時(shí)曲線

根據(jù)所繪制的京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)大鼠口服給藥后血樣中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷對(duì)應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)和濃度作藥時(shí)曲線圖。

7 結(jié)論

原料經(jīng)處理后給藥，從藥時(shí)曲線中可以看出，京尼平苷酸最大濃度可達(dá)大概45納克/毫升，而桃葉珊瑚苷只能達(dá)到25納克/毫升左右，濃度值略低，可考慮使用氯仿或四氯化碳等其他常見有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取。

參考文獻(xiàn)

[1]彭婕，錢之玉，等.京尼平苷和西紅花酸保肝利膽作用的比較.中國(guó)新藥雜志，2003（2）.

[2]成龍，楊紅軍，等.京尼平苷及京尼平的藥代動(dòng)力學(xué)研究—排泄動(dòng)力學(xué).第六次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合中青年學(xué)術(shù)研討會(huì). 2009.

作者簡(jiǎn)介：馬宇亮，黑龍江工業(yè)學(xué)院環(huán)境工程系，碩士研究生，研究方向：生物及生物制藥。