羅建蓉，康小麗，錢金栿

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

澳洲大蠊與美洲大蠊總糖含量的比較研究

羅建蓉，康小麗，錢金栿*

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

目的:比較澳洲大蠊與美洲大蠊中總糖含量的差異。方法:采用苯酚-硫酸法測(cè)定總糖含量。結(jié)果：澳洲大蠊中總糖平均含量為139.6 mg∕g，美洲大蠊的為127.6 mg∕g，兩種蜚蠊的總糖含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：兩種蜚蠊中總糖含量豐富，且二者的含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

美洲大蠊;澳洲大蠊;總糖含量;苯酚-硫酸法

澳洲大蠊（Periplaneta australasiae）和美洲大蠊（Periplaneta americana）同為蜚蠊科大蠊屬昆蟲(chóng)，二者都被冠以蟑螂、蜚蠊等俗稱。蜚蠊的藥用歷史久遠(yuǎn)，歷代重要本草典籍《神農(nóng)本草經(jīng)》《新修本草》和《本草綱目》中均有記載。其性平、味咸，內(nèi)服可健脾消疳、活血通脈、利水消腫，外用則具有消腫生肌之功效〔1〕。

近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，美洲大蠊具有抗癌〔2-5〕、抗肝纖維化〔6-8〕、保肝〔9-11〕、抗菌〔12〕、促組織修復(fù)〔13〕等作用；其活性物質(zhì)為黏多糖、肽、氨基酸、核苷等成分〔14-15〕。而有關(guān)澳洲大蠊藥用價(jià)值的研究甚少，僅見(jiàn)程才芬、黃厚聘等報(bào)道澳洲大蠊的油狀醇提物（即蟑螂油）對(duì)小鼠S180肉瘤及人食管癌小鼠異種移植有抑制作用〔16-17〕。而對(duì)這兩種蜚蠊多糖含量的差異尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用苯酚-硫酸法測(cè)定澳洲大蠊和美洲大蠊中總糖含量，并用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析二者的差異，從多糖含量的角度來(lái)探討同屬昆蟲(chóng)澳洲大蠊是否能作為美洲大蠊藥材的補(bǔ)充藥源，為發(fā)掘大蠊屬昆蟲(chóng)中新的藥用資源提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1儀器TU-1901雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）；BL204電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；KDM型控溫電熱套（鄄城華魯電熱儀器有限公司）；DHG-9075A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科技有限公司）。

1.2材料野生美洲大蠊收集于云南省普洱市（樣品號(hào)：130702，131002）和云南省玉溪市元江縣（樣品號(hào)：130903），野生澳洲大蠊收集于云南省普洱市（樣品號(hào)：130601，130801，131001）和云南省玉溪市元江縣（樣品號(hào)：130701），樣品經(jīng)大理學(xué)院毛本勇教授鑒定分別為美洲大蠊（Periplaneta americana）和澳洲大蠊（Periplaneta australasiae）。樣品經(jīng)洗凈、干燥至恒重，粉碎過(guò)40目篩，制得樣品粉末，干燥儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.3藥品與試劑葡萄糖對(duì)照品（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20120407），硫酸、苯酚、鹽酸等試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1溶液的配制

2.1.1 苯酚溶液的配制 稱取150 g苯酚，按文獻(xiàn)〔18〕方法進(jìn)行蒸餾，制得精制苯酚。取適量精制苯酚，將其配成5%濃度的苯酚水溶液備用，用前新配。

2.1.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的制備 精密稱取經(jīng)干燥至恒重的葡萄糖對(duì)照品100 mg，加蒸餾水溶解，并配制成1 mg∕mL的葡萄糖對(duì)照品溶液。

2.1.3 蜚蠊供試液的制備 精密稱取蜚蠊樣品粉末約0.50 g，于100 mL圓底燒瓶中，加6 mol∕L鹽酸10 mL〔18〕，蒸餾水30 mL，用電熱套加熱回流1 h，濾集提取液，加活性炭0.1 g脫色，過(guò)濾，用蒸餾水洗滌殘?jiān)?，濾液轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中，定容，搖勻。精密移取上述溶液5 mL定容至10 mL量瓶中，作為蜚蠊供試液。

2.2測(cè)定波長(zhǎng)的確定分別取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液、蜚蠊供試液、蒸餾水各2 mL，參考文獻(xiàn)〔18〕方法顯色，并在300～800 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，光譜圖顯示在490 nm處葡萄糖及蜚蠊供試液的吸收均最大，故確定最佳測(cè)定波長(zhǎng)為490 nm。見(jiàn)圖1。

圖1 葡萄糖與蜚蠊總糖的吸收光譜圖

2.3顯色條件的考察

2.3.1 苯酚用量考察 按“2.1.3”項(xiàng)制備美洲大蠊供試液（樣品號(hào)：130903），取2 mL于25 mL量瓶中，分別考察苯酚用量0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，再各加5 mL濃硫酸，置60℃水浴加熱顯色30 min，冷卻，用蒸餾水定容，于490 nm處測(cè)定吸光度，結(jié)果表明用量為1 mL時(shí)吸光度值最大。

2.3.2 濃硫酸用量考察 分別移取“2.3.1”項(xiàng)下的供試液2 mL于6個(gè)25 mL量瓶中，各加5%苯酚溶液1 mL，分別加入濃硫酸5、10、15、20、25、30 mL，顯色測(cè)定方法同“2.3.1”項(xiàng)，結(jié)果顯示使用10 mL濃硫酸時(shí)吸光度值最大。

2.3.3 顯色時(shí)間考察 精密移取“2.3.1”項(xiàng)下的供試液2 mL于25 mL量瓶中，共8份，各加5%苯酚溶液1 mL，濃硫酸10 mL，分別置60℃水浴加熱顯色0、5、10、15、20、25、30、35 min，冷卻后定容，在490 nm處測(cè)定吸光度，結(jié)果為加熱顯色25 min的吸光度值最大。

2.3.4 加熱溫度的考察 分別移取“2.3.1”項(xiàng)下的供試液2 mL，共7份，各加5%苯酚溶液1mL和濃硫酸10 mL，分別于30、40、50、60、70、80、90℃水浴加熱顯色25 min，冷卻后定容至25 mL量瓶中，測(cè)定結(jié)果顯示水浴加熱溫度為40℃時(shí)吸光度值最大。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密移取葡萄糖對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL，于25 mL量瓶中，加蒸餾水使體積為2 mL，加1 mL 5%苯酚溶液、10 mL濃硫酸，于40℃加熱25 min，冷卻，定容，于490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定。以葡萄糖溶液的質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)，所測(cè)定的吸光度（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程Y=21.229X+0.096 6，r= 0.999 7，線性范圍為4～32 μg∕mL。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密移取蜚蠊供試液2 mL，按“2.4.1”項(xiàng)下方法顯色、測(cè)定吸光度，重復(fù)測(cè)定6次，其RSD為0.12%（n=6），結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5重復(fù)性試驗(yàn)取0.5 g美洲大蠊粉末（樣品號(hào)：130903），共6份，分別精密稱定，按“2.4.1”項(xiàng)下方法顯色測(cè)定，計(jì)算得該供試品中總糖的平均含量為144.2 mg∕g，RSD為1.68%（n=6）。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)移取同一供試溶液，按“2.4.1”項(xiàng)下方法顯色后，每隔30 min測(cè)定一次吸光度，樣品在5 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為1.39%。

2.7加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取美洲大蠊粉末（樣品號(hào)：130903）6份，每份約0.25 g，分別加入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品36 mg，按“2.1.3”項(xiàng)制備供試液，按上述確定的條件進(jìn)行顯色、測(cè)定吸光度，計(jì)算得平均回收率為98.83%，RSD為1.20%（n=6）。

2.8蜚蠊樣品測(cè)定取來(lái)源不同的蜚蠊樣品，每個(gè)樣品平行取樣3份，按“2.1.3”項(xiàng)制備供試液，按“2.4.1”項(xiàng)下方法顯色、測(cè)定吸光度，計(jì)算出蜚蠊藥材中總糖含量。見(jiàn)表1。

表1 蜚蠊樣品的測(cè)定結(jié)果

3 討論

實(shí)驗(yàn)分別測(cè)定了元江、普洱兩產(chǎn)地的澳洲大蠊和美洲大蠊中總糖含量，表1數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)雙樣本方差分析和雙樣本異方差t檢驗(yàn)處理，兩種蜚蠊總糖的P為0.18（>0.05），而不同批次的同種蜚蠊的總糖P<0.05。結(jié)果顯示兩種蜚蠊的總糖含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而不同批次的同種蜚蠊的總糖含量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由于蜚蠊樣品為野生狀態(tài)，其生存環(huán)境、食物、生長(zhǎng)周期、及捕捉時(shí)間等多種因素均會(huì)對(duì)其體內(nèi)總糖含量造成影響，致使不同批次的同種蜚蠊總糖含量有較大差異。

美洲大蠊提取物具有抗肝纖維化作用，其活性物質(zhì)之一為黏糖氨酸〔6-8，19-20〕。另蜚蠊中的黏多糖有抗艾滋病病毒作用〔14〕。由本實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知，澳洲大蠊中總糖平均含量為139.6 mg∕g，美洲大蠊的為127.6 mg∕g，其含量分別占藥材干重的13.96%和12.76%，表明了兩種蜚蠊中總糖含量豐富，且二者的含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這為澳洲大蠊用作美洲大蠊藥材的補(bǔ)充藥源提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。由此推測(cè)澳洲大蠊可能具有與美洲大蠊相似的生物活性，并提示澳洲大蠊也應(yīng)具有藥用開(kāi)發(fā)價(jià)值。而澳洲大蠊的生物活性及其成分組成仍待進(jìn)一步研究確定。

〔1〕云南省食品藥品監(jiān)督管理局.云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)〔S〕.昆明：云南科技出版社，2005：54.

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*通信作者：錢金栿，教授.

（責(zé)任編輯 李 楊）

Comparison on the Contents of Total Sugar between Periplaneta australasiae and Periplaneta americana

LUO Jianrong,KANG Xiaoli,QIAN Jinfu*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali Yunnan 671000,China）

Objective:To compare the contents of total sugar between Periplaneta australasiae and Periplaneta americana.Methods:The contents of total sugar were determined by Phenol-Sulfuric acid reaction system.Results:The average content of total sugar in Periplaneta australasiae was 139.6 mg∕g,and the average content in Periplaneta americana was 127.6 mg∕g.Conclusion:The two kinds of cockroaches were all rich in total sugar.There was no significant difference in the contents of total sugar between Periplaneta australasiae and Periplaneta americana.

Periplaneta australasiae;Periplaneta americana;Total sugar;phenol-sulfuric acid

R284

A

1672-2345（2014）02-0026-04

10.3969∕j.issn.1672-2345.2014.02.008

云南省教育廳重點(diǎn)基金資助項(xiàng)目（2012Z117）

2013-12-22

2014-01-02

羅建蓉，副教授，主要從事天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā).