章春燕 （遼寧省朝陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心122000）

圓環(huán)病毒2型（Porcine Circovirus2，PCV2）屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，為環(huán)狀、單股DNA病毒。偽狂犬病病毒屬于皰疹病毒科甲皰疹病毒亞科，該亞科病毒的主要特征是宿主范圍寬廣，有高度的細(xì)胞致病性，復(fù)制周期短，常在神經(jīng)節(jié)內(nèi)形成潛伏感染。豬是唯一感染后可以存活的物種。這兩種病是目前對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害極大的病毒性傳染病，單獨(dú)引起的疾病造成的豬群死亡率不是很高，但并發(fā)或繼發(fā)其他細(xì)菌或病毒感染能引起豬群的死亡率大大增加，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，應(yīng)當(dāng)引起廣大養(yǎng)豬戶的重視。

2013年1月，我市某規(guī)?；i場(chǎng)仔豬出生3～5天時(shí)發(fā)生嘔吐現(xiàn)象和神經(jīng)癥狀，其中1月份生產(chǎn)的50頭母豬產(chǎn)下的小豬死亡率達(dá)50%，存活下來(lái)的仔豬在2月份生長(zhǎng)緩慢、漸進(jìn)性消瘦，皮膚發(fā)白，毛雜亂無(wú)光澤，精神沉郁，個(gè)別發(fā)病豬體溫升高到40℃左右，皮膚出現(xiàn)大面積紅色，有腹瀉癥狀，糞便呈黑色，有神經(jīng)癥狀，死亡率為7%～8%。3月初對(duì)該場(chǎng)進(jìn)行了樣品采集與檢測(cè)，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 豬場(chǎng)概況及免疫程序

該豬場(chǎng)現(xiàn)有生產(chǎn)母豬1000頭，設(shè)施良好，遠(yuǎn)離交通要道。此次發(fā)病持續(xù)3個(gè)月左右，該場(chǎng)仔豬在1～3日齡進(jìn)行了某進(jìn)口豬偽狂犬活疫苗的滴鼻，20日齡同時(shí)進(jìn)行支原體和豬瘟疫苗的免疫，保育豬45日齡進(jìn)行高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗的免疫，60日齡進(jìn)行豬瘟疫苗的二次免疫，育肥豬90日齡進(jìn)行豬偽狂犬疫苗的第二次免疫。

2 樣品采集及檢測(cè)

隨機(jī)采集該場(chǎng)的發(fā)病豬同舍豬群血清20份。分別采集腦、脾臟、肝臟、肺臟和腎臟等組織進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)。

對(duì)20份豬血清用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的方法檢測(cè)了高致病性豬藍(lán)耳病、豬2型圓環(huán)病毒和豬偽狂犬病的野毒抗體，所用的檢測(cè)試劑盒分別來(lái)自美國(guó)愛(ài)德士元亨和武漢科前，均為國(guó)家認(rèn)可診斷試劑廠家。

對(duì)組織病料采用熒光RT-PCR的方法檢測(cè)了豬圓環(huán)病毒和偽狂犬病毒的病原，所用試劑盒均來(lái)自北京生科尚儀。試驗(yàn)中RNA的提取采用了Trazol提取法，擴(kuò)增試劑采用每份15微升RT-PCR反應(yīng)液，0.25微升Tag酶，10微升RNA溶液，反應(yīng)體系為25微升。

對(duì)20份血清樣品也采用了熒光RT-PCR的方法檢測(cè)了高致病性豬藍(lán)耳病病原。所用試劑盒來(lái)自中山科技。試驗(yàn)中RNA的提取采用了硅膠膜-離心柱法，擴(kuò)增試劑采用每份17微升的PCR反應(yīng)液A，3微升PCR反應(yīng)液B，5微升RNA溶液，反應(yīng)體系為25微升。

3 檢測(cè)結(jié)果及分析

抗體檢測(cè)結(jié)果。從表1可以看出，該豬場(chǎng)高致病性豬藍(lán)耳病免疫抗體陽(yáng)性率達(dá)100%，疫苗免疫效果良好，能起到對(duì)高致病性豬藍(lán)耳病很好的保護(hù)。豬偽狂犬野毒抗體陽(yáng)性率達(dá)95%，且陽(yáng)性判定結(jié)果離散度較大，檢測(cè)結(jié)果表明該群體感染了偽狂犬野毒。豬圓環(huán)病毒抗體免疫抗體合格率剛達(dá)到70%，免疫效果不理想。

表1 ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果

病原檢測(cè)結(jié)果。對(duì)20份血清提取RNA，進(jìn)行了豬高致病性藍(lán)耳病病毒變異株的核酸檢測(cè)，沒(méi)有從血清中檢測(cè)到豬高致病性藍(lán)耳病病毒變異毒株。從剖殺豬的不同組織病料中均發(fā)現(xiàn)了豬圓環(huán)病毒的存在，卻未檢出豬偽狂犬病病毒。

4 討論

在對(duì)該場(chǎng)的流調(diào)中我們發(fā)現(xiàn)，該場(chǎng)未進(jìn)行豬圓環(huán)病毒滅活疫苗的免疫工作，但其豬群中圓環(huán)病毒的抗體陽(yáng)性率達(dá)70%，且不同個(gè)體之間差異較大，離散度達(dá)77。同時(shí)，從病豬的腦、心臟、肝臟和肺臟等組織中均檢測(cè)到了圓環(huán)病毒存在，由此我們可以將該場(chǎng)為圓環(huán)病毒的不穩(wěn)定場(chǎng)。從檢測(cè)結(jié)果可以看出，豬偽狂犬野毒抗體的離散度最高，達(dá)到121，該場(chǎng)偽狂犬病也是生產(chǎn)不穩(wěn)定存在的原因?？梢钥闯觯舜呜i群的不穩(wěn)定是由于存在圓環(huán)病毒與偽狂犬病毒的混合感染。