李元成，崔志丹，沈 伶

子宮肌瘤是女性生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)的良性腫瘤，是影響婦女生殖健康的常見(jiàn)病及多發(fā)病。據(jù)報(bào)道，育齡婦女中其發(fā)病率高達(dá)25%～40%，年齡>40歲的婦女約有50%患有子宮肌瘤[1-2]。子宮肌瘤的發(fā)生、發(fā)展是多步驟、多因素的復(fù)雜過(guò)程，其病因尚未十分明確[3]。目前,普遍認(rèn)為是雌激素和孕激素相互作用引起的，為激素依賴(lài)性腫瘤，與基因、細(xì)胞增殖與凋亡、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑異常及細(xì)胞因子等多種因素有關(guān)[4]。胰島素樣生長(zhǎng)因子(insulin-like growth factor，IGF)家族由配體IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ、受體IGF-ⅠR和IGF-ⅡR 以及6種結(jié)合蛋白構(gòu)成。IGF具有促進(jìn)細(xì)胞分裂、增殖、分化、調(diào)節(jié)代謝以及血管形成的作用，當(dāng)其過(guò)度高表達(dá)時(shí)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[5]。本研究通過(guò)對(duì)子宮肌瘤患者IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、雌激素受體(estrogen receptor，ER)、孕激素受體(progestrone receptor，PR)的檢測(cè)，探討子宮肌瘤的發(fā)病機(jī)制，為子宮肌瘤的藥物治療提供理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1—9月在汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科住院手術(shù)治療臨床診斷為子宮肌瘤的患者56例為研究組，年齡36～52歲，平均(43.5±6.7)歲。所有患者行子宮肌瘤切除術(shù)(包括子宮全切術(shù)或子宮肌瘤剔除術(shù))，術(shù)后切除標(biāo)本送病理學(xué)檢查確診為子宮肌瘤。另選擇同期在本院進(jìn)行健康體檢的健康女性45例為對(duì)照組，年齡38～51歲，平均(44.1±5.2)歲。所有受檢者近3個(gè)月內(nèi)未使用任何激素類(lèi)藥物，并且排除糖尿病、甲狀腺功能亢進(jìn)或減低、卵巢腫瘤等合并癥。

1.2 方法

1.2.1 外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平的檢測(cè) 抽取肘靜脈血5 ml，標(biāo)本室溫靜置待血液完全凝固后，3 000 r/min離心10 min(離心半徑13.5 cm)，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法測(cè)定血清中IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平，樣本由專(zhuān)人負(fù)責(zé)檢測(cè)，操作嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。ELISA試劑盒由美國(guó)R&B公司提供。

1.2.2 標(biāo)本的采集及固定 子宮肌瘤標(biāo)本取自子宮肌瘤患者子宮肌瘤結(jié)節(jié)中心部位組織，置于10%中性甲醛溶液中固定24 h，常規(guī)石蠟包埋切片。

1.2.3 子宮肌瘤組織ER、PR的檢測(cè) 石蠟切片用二甲苯脫蠟至去離子化，乙二胺四乙酸(EDTA)修復(fù)緩沖液進(jìn)行抗原高壓熱修復(fù)，打孔劑洗滌后采用3%過(guò)氧化氫室溫孵育10 min，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌后滴加特異性ER和PR單克隆抗體，4 ℃孵育過(guò)夜，PBS洗滌加入二抗37 ℃孵育30 min，PBS洗滌，加入三抗37 ℃ 孵育30 min，PBS洗滌；二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，沖洗，蘇木素復(fù)染，脫水、透明、封片。各個(gè)受體細(xì)胞核內(nèi)或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有棕黃色顆粒染色者為陽(yáng)性染色細(xì)胞，陽(yáng)性判斷采用Sinicrope改良法。根據(jù)切片中染色細(xì)胞計(jì)數(shù)和染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分，表達(dá)評(píng)分=染色細(xì)胞計(jì)數(shù)評(píng)分×染色強(qiáng)度評(píng)分，表達(dá)評(píng)分<1分為陰性結(jié)果，2～3分為弱陽(yáng)性，4～5分為中度陽(yáng)性，>5分為強(qiáng)陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2.1 研究組與對(duì)照組外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平比較 研究組外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表1)。

2.2 子宮肌瘤患者ER(-)組與ER(+)組、PR(-)組與PR(+)組外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平比較 子宮肌瘤患者ER(-)22例(39.3%),ER(+)34例(60.7%)；PR(-)18例(32.1%),PR(+)38例(67.9%)。子宮肌瘤患者ER(+)組外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平均高于ER(-)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表2)；子宮肌瘤患者PR(+)組外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平均高于PR(-)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表3)。

Table1 Comparison of IGF-Ⅰ and IGF-Ⅱ levels in the peripheral blood between study group and control group

組別例數(shù)IGF-ⅠIGF-Ⅱ?qū)φ战M45 425±54234±44研究組561343±78739±18t值 4 17 2 13P值<0 05<0 05

注：IGF-Ⅰ=胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅰ，IGF-Ⅱ=胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅱ

Table2 Comparison of IGF-Ⅰ and IGF-Ⅱ levels between patients with ER (-) and ER (+)

組別例數(shù)IGF-ⅠIGF-ⅡER(-)組221125±69578±17ER(+)組341483±73843±18t值 2 35 2 51P值<0 05<0 05

注：ER=雌激素受體

2.3 子宮肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平與子宮肌瘤組織中ER、PR表達(dá)的相關(guān)性分析 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，子宮肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平與子宮肌瘤組織中ER、PR表達(dá)評(píng)分均呈正相關(guān)(P<0.05，見(jiàn)表4)。

Table3 Comparison of IGF-Ⅰ and IGF-Ⅱ levels between patients with PR (-) and PR (+)

組別例數(shù)IGF-ⅠIGF-ⅡPR(-)組181243±70678±18PR(+)組381552±75859±18t值 2 29 2 48P值<0 05<0 05

注：PR=孕激素受體

表4 子宮肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平與子宮肌瘤組織中ER、PR表達(dá)的相關(guān)性分析

Table4 Correlation analysis on IGF-Ⅰ and IGF-Ⅱ levels in the peripheral blood and the expression of ER and PR in uterine leiomyoma tissue

指標(biāo)ERr值 P值PRr值 P值IGF-Ⅰ0 5740 0000 5980 000IGF-Ⅱ0 6650 0000 6260 000

3 討論

子宮肌瘤是女性生殖器官中最常見(jiàn)的良性腫瘤，是影響婦女生殖健康的常見(jiàn)病及多發(fā)病，并且是導(dǎo)致不孕、月經(jīng)失調(diào)及子宮切除的主要原因。雖然絕大多數(shù)子宮肌瘤呈現(xiàn)良性，但也有少數(shù)產(chǎn)生惡變。子宮肌瘤發(fā)病機(jī)制尚未十分明確，其發(fā)生可能與女性體內(nèi)雌、孕激素分泌過(guò)高或長(zhǎng)期雌激素刺激有關(guān)。雌激素有誘發(fā)并促進(jìn)子宮肌瘤生長(zhǎng)的作用，使子宮肌瘤細(xì)胞增生肥大，肌層變厚，是誘發(fā)子宮肌瘤的一個(gè)重要內(nèi)分泌因素。近來(lái)研究表明孕激素對(duì)子宮肌瘤更有促生長(zhǎng)作用[6]。雌激素、孕激素分別通過(guò)ER、PR發(fā)揮生物學(xué)作用。ER、PR與雌、孕激素有較高的親和力，選擇性保留較高濃度的雌、孕激素，從而使其生物學(xué)效應(yīng)加強(qiáng)[7]。

胰島素樣生長(zhǎng)因子軸(IGFs)是人體內(nèi)具有多種重要功能的細(xì)胞因子。IGF-Ⅰ及IGF-Ⅱ?yàn)橐葝u素樣生長(zhǎng)因子家族的成員，參與胚胎發(fā)育、創(chuàng)傷愈合過(guò)程，并且與其他生長(zhǎng)因子一起協(xié)同促進(jìn)多種細(xì)胞的分化成熟。IGF-Ⅰ是一種在多種細(xì)胞和組織中發(fā)揮促有絲分裂和細(xì)胞分化作用的多肽類(lèi)生長(zhǎng)因子，在腫瘤生長(zhǎng)分化方面起著重要的調(diào)控作用[8]。血清及組織中IGF-Ⅰ過(guò)度表達(dá)時(shí)引起正常細(xì)胞活性改變，出現(xiàn)增殖失控、分化缺失及凋亡減少，導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[9]。多種類(lèi)型的腫瘤如肺癌、乳腺癌、肝癌、大腸癌組織中均可異常表達(dá)IGF-Ⅰ[10-11]。IGF-Ⅱ是由IGF-Ⅰ編碼產(chǎn)生的單鏈弱酸性多肽，是腫瘤自分泌生長(zhǎng)因子，在體內(nèi)外都有很強(qiáng)的促進(jìn)細(xì)胞分裂、增殖能力，IGF-Ⅱ過(guò)表達(dá)與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，此外IGF-Ⅱ還具有較強(qiáng)的促血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增加內(nèi)皮細(xì)胞的化學(xué)趨向性等作用[12-14]。子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展在與ER、PR相關(guān)的同時(shí)，IGF-Ⅰ及IGF-Ⅱ等細(xì)胞因子可能也扮演著重要角色，并可能與ER、PR相關(guān)聯(lián)[7]。

本研究結(jié)果顯示，子宮肌瘤組織ER和PR的陽(yáng)性表達(dá)率分別為60.7%和67.9%，與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[7]。與健康體檢人群比較，子宮肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平顯著升高，提示IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ在子宮肌瘤的發(fā)生和發(fā)展中可能發(fā)揮重要作用。本研究對(duì)ER(+)、ER(-)以及PR(+)、PR(-)患者IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平進(jìn)行比較，結(jié)果顯示子宮肌瘤ER(+)患者IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平高于ER(-)患者，子宮肌瘤PR(+)患者IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平高于PR(-)患者；相關(guān)性分析結(jié)果顯示，IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平與子宮肌瘤組織中ER、PR表達(dá)評(píng)分均呈正相關(guān)。因此認(rèn)為，IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ與ER、PR具有關(guān)聯(lián)性，子宮肌瘤的生長(zhǎng)與患者外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平升高有關(guān)，并且與子宮肌瘤ER、PR的表達(dá)呈正相關(guān)。但是因本研究為臨床橫斷面研究，尚難確定二者間的因果關(guān)系，仍需設(shè)計(jì)合理的大樣本研究來(lái)進(jìn)行進(jìn)一步論證。

綜上所述，女性外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平的變化可能會(huì)導(dǎo)致子宮間葉組織的異常改變，與子宮肌瘤發(fā)病密切相關(guān)，為從分子水平研究子宮肌瘤藥物治療開(kāi)辟新途徑。

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