尤榕，黃麗紅，黃智君

(江西省血液中心，江西南昌330052)

·檢驗(yàn)與臨床·

不同分離制備時(shí)間對(duì)凝血因子Ⅷ含量的影響探討

尤榕，黃麗紅，黃智君

(江西省血液中心，江西南昌330052)

目的分析不同分離時(shí)間制備新鮮冰凍血漿(FFP)對(duì)凝血因子Ⅷ(簡(jiǎn)稱Ⅷ因子)含量的影響。方法按不同分離制備時(shí)間(6～8h、9～12h、13～18h)分為3組，對(duì)3組新鮮冰凍血漿產(chǎn)品進(jìn)行凝血因子Ⅷ含量檢測(cè)。結(jié)果3組不同時(shí)間分離制備FFP的凝血因子Ⅷ含量采用單因素方差分析，F(xiàn)=35.07，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；再進(jìn)行兩兩比較，發(fā)現(xiàn)第1組vs第2組，P＞0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；第1組vs第3組和第2組vs第3組，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論實(shí)際采集、制備FFP全過程中，應(yīng)嚴(yán)格把控各個(gè)環(huán)節(jié)上的關(guān)鍵點(diǎn)，加強(qiáng)對(duì)采血、分離制備、速凍的時(shí)間和貯存、運(yùn)輸、離心、速凍溫度的控制；確保在12h內(nèi)制備的FFP的凝血因子Ⅷ的質(zhì)量，既滿足臨床輸注的安全性和有效性，又能滿足臨床對(duì)FFP需求量。

新鮮冰凍血漿；分離制備時(shí)間；凝血Ⅷ因子含量

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.033

新鮮冰凍血漿(FFP)中凝血因子Ⅷ是血友病患者缺乏的凝血因子之一，對(duì)這種患者的止血凝血，Ⅷ因子具有不可替代的作用。而血液采集、貯存、運(yùn)輸、分離、制備、速凍等過程中各關(guān)鍵點(diǎn)，均會(huì)影響凝血Ⅷ因子的含量。

制備新鮮冰凍血漿，使用抗凝劑為CPD、CP2D、CPDA-1的血液應(yīng)在8h內(nèi)分離并速凍，而抗凝劑為ACD的血液則在6h內(nèi)分離并速凍。當(dāng)血液采集時(shí)間200ml＞7min，或400ml＞13min時(shí)，所采集的全血不可用于制備新鮮冰凍血漿。血漿中不穩(wěn)定的凝血因子Ⅷ在體外半衰期為l2～24h[1]，隨著保存時(shí)間延長其活性逐漸降低，為了確保新鮮冰凍血漿質(zhì)量、維持凝血因子Ⅷ穩(wěn)定、提高臨床療效，應(yīng)盡量縮短新鮮液體血漿在室溫的停留時(shí)間[2]，采集后的血液盡快置于2℃～6℃保存，在運(yùn)輸過程中保持2℃～10℃,離心分離溫度控制在2℃～6℃。速凍是保存凝血因子Ⅷ的關(guān)鍵加工步驟，冷凍速率和血漿中心溫度是2個(gè)關(guān)鍵參數(shù)，分離后應(yīng)在60 min內(nèi)將血漿中心溫度降至-30℃以下快速凍結(jié)，在-18℃下保存有效期一年[3]。

FFP中含有全部的凝血因子,特別是不穩(wěn)定的Ⅴ、Ⅷ因子，Ⅴ、Ⅷ凝血因子在凝血過程中具有極其重要的作用,在FFP制備過程中保護(hù)Ⅴ、Ⅷ因子活性,減少其活性損失,對(duì)臨床血漿輸注的效果具有重要意義，而影響V、Ⅷ凝血因子活性的主要因素是溫度和時(shí)間[4]。在2012頒布新版《GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求》及第3版《臨床輸血》[5]中，F(xiàn)FP定義由原來在全血采集后6h(全血保養(yǎng)液為ACD)或8h(全血保養(yǎng)液為CPD、CPD-1)內(nèi)，改為最好在6～8h內(nèi)，但不超過18h分離出血漿并速凍呈固態(tài)的成分血。參考國外的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[6]，其中規(guī)定新鮮冰凍血漿(冷沉淀原料漿)的制備時(shí)間最長不宜超過18h。

FFP中不穩(wěn)定凝血因子(V因子和Ⅷ因子)的含量多少是評(píng)價(jià)新鮮冰凍血漿質(zhì)量的關(guān)鍵[7]，因此筆者針對(duì)在近同等條件下進(jìn)行采集、運(yùn)輸、分離條件、速凍、儲(chǔ)存的血液，但在不同時(shí)間段進(jìn)行分離制備FFP，檢測(cè)其凝血因子Ⅷ含量，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 對(duì)象及分組樣本為2012年7月至2014年8月間自愿無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本，全部采用抗凝劑CPDA-1配方，按不同時(shí)間段制備FFP樣本共183份,分為3組，第1組：6～8h內(nèi)分離制備，共94份樣本；第2組：9～12h內(nèi)分離制備，共42份樣本；第3組：13～18h小時(shí)分離制備，共47份樣本。

1.2 儀器與試劑儀器：為日本SYSMEX公司生產(chǎn)的CA-500全自動(dòng)血凝分析儀；深圳普特公司產(chǎn)的LWS-3100W型低溫工作臺(tái)，Dometic公司生產(chǎn)的MBF21血漿速凍機(jī)，三洋低溫冰箱。配套試劑：Ⅷ因子試劑、APTT試劑、氯化鈣CaCl2試劑，均在有效期內(nèi)使用。

1.3 方法按照《GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求》，F(xiàn)FP中凝血因子Ⅷ含量≥0.7IU/ml，對(duì)3組樣本進(jìn)行凝血因子Ⅷ含量檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)量數(shù)據(jù)采用x±s表示，對(duì)三組Ⅷ因子含量進(jìn)行單因素方差分析，進(jìn)行兩兩比較，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

不同分離制備時(shí)間對(duì)凝血因子Ⅷ含量的影響：在不同時(shí)間分離得到FFP的凝血Ⅷ因子含量，結(jié)果顯示(見表1)，采用單因素方差分析，F(xiàn)=35.07，P＜0.05有差別，后進(jìn)行兩兩比較，得出第1組vs第2組，P＞0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，第1組vs第3組和第2組vs第3組，均P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

表1 不同分離制備時(shí)間對(duì)Ⅷ因子含量的影響(±s)

表1 不同分離制備時(shí)間對(duì)Ⅷ因子含量的影響(±s)

組別Ⅷ因子含量( I U / m l ) P第一組第二組第三組0 . 9 0 ± 0 . 2 0 0 . 9 1 ± 0 . 3 4 0 . 5 6 ± 0 . 2 5第1組v s第2組，P = 0 . 9 7 2第1組v s第3組，P = 0 . 0 0 0第2組v s第3組，P = 0 . 0 0 0

3 討論

FFP含有V因子和Ⅷ因子等凝血因子，保持它們的生物活性，才能滿足臨床的要求。FFP主要用于治療凝血因子缺乏引起的出血，是多種凝血因子缺乏性疾病的有效的治療制品。常用于嚴(yán)重肝病患者、大量輸血伴發(fā)凝血功能障礙、血漿置換、燒傷、DIC等，所以臨床對(duì)FFP的需求量較大，根據(jù)本中心臨床供血數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，2012年較2011年增漲8%，2013年較2012年增漲45.22%，但由于原制備時(shí)間的限制(6～8h)，故原制備量較難滿足臨床需求。

現(xiàn)各血站在18h內(nèi)分離制備FFP的凝血因子Ⅷ是否能達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)，目前報(bào)道較少。本研究在對(duì)南昌地區(qū)不同時(shí)間段進(jìn)行分離制備的FFP，按照分離制備時(shí)間的不同分為3個(gè)時(shí)間組(6～8h、9～12h、13～18h)，對(duì)3組不同時(shí)間段凝血Ⅷ因子含量采用單因素方差分析，F(xiàn)=35.07，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，再進(jìn)行兩兩比較，顯示第1與第2組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但第3組與第1組、第2組間均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分析結(jié)果顯示，在6～12h內(nèi)進(jìn)行分離制備的FFP，其凝血因子Ⅷ含量基本符合國家標(biāo)準(zhǔn)，但13～18h分離制備的FFP的凝血因子Ⅷ含量，只有23.40%達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)。說明當(dāng)分離制備時(shí)間在13～18h，凝血因子Ⅷ受到影響而大部分失活，凝血因子Ⅷ在體外半衰期為8～12h，這是FⅧ：C活性喪失的主要原因[8]，l2h后分離的冰凍血漿，不穩(wěn)定凝血因子(特別是Ⅷ因子)會(huì)明顯降低，而影響凝血活性[9]，考慮FFP中的凝血因子易受血漿儲(chǔ)存、運(yùn)輸?shù)葪l件的影響而失活，從而導(dǎo)致血液療效的降低[10]。提示在實(shí)際采集、制備FFP全過程中，應(yīng)嚴(yán)格把控各個(gè)環(huán)節(jié)上的關(guān)鍵點(diǎn)，加強(qiáng)冷鏈對(duì)FFP整個(gè)制備過程的控制至關(guān)重要[11]，以及對(duì)采血，分離制備、速凍的時(shí)間的控制，確保FFP中凝血因子Ⅷ的質(zhì)量，符合國家標(biāo)準(zhǔn)。

通過對(duì)3組不同時(shí)間段凝血因子Ⅷ含量的分析研究，筆者認(rèn)為制備FFP的分離時(shí)間可延長至12h，在確保FFP中凝血因子Ⅷ質(zhì)量的同時(shí)，既保障臨床輸注的有效性和安全性，又滿足臨床對(duì)FFP的大量需求。

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R457.1+2，R554.1

A

1674-1129(2014)06-0735-02

2014-08-08；

2014-09-23)