歐陽貴平，謝香萍，薛玉華，江海清，江萍，孔小青，吳煜

(贛州市南康區(qū)第一人民醫(yī)院檢驗科，江西贛州341400)

·質(zhì)量控制·

混合血清自制多項目質(zhì)控品與商品化質(zhì)控品的應用評價

歐陽貴平，謝香萍，薛玉華，江海清，江萍，孔小青，吳煜

(贛州市南康區(qū)第一人民醫(yī)院檢驗科，江西贛州341400)

目的評價以冰凍患者混合血清自制多項目生化質(zhì)控品的可靠性和穩(wěn)定性及自制質(zhì)控品聯(lián)合商品化質(zhì)控品應用于常規(guī)室內(nèi)質(zhì)量控制。方法收集日常工作中生化檢驗剩余標本，加萬分之二疊氮鈉、混勻、離心、分裝、低溫保存，多次重復檢測自制質(zhì)控品的12個項目，評價自制質(zhì)控品在低溫保存下的穩(wěn)定性、室內(nèi)差異、瓶間差異及與商品化質(zhì)控品聯(lián)合應用于室內(nèi)質(zhì)量控制的性能。結(jié)果自制質(zhì)控品12個項目的批內(nèi)和天間變異均在5%以內(nèi)，符合質(zhì)量控制要求；置-40℃保存9個月12個檢測項目穩(wěn)定性良好，常規(guī)9項生化項目偏移均符合1/2美國CLIA,88可接受性能指標，ASO、RF和CRP三項偏移均＜±5%。瓶間分裝差異在室內(nèi)質(zhì)控品要求的允許范圍內(nèi)；自制質(zhì)控品與兩個批號參考質(zhì)控品由于質(zhì)控品原因引起的失控次數(shù)占總失控次數(shù)的百分率比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，室內(nèi)質(zhì)量控制效果良好。結(jié)論自制質(zhì)控品符合臨床使用性能，可替代參考質(zhì)控品(正常參考值)用于室內(nèi)質(zhì)量控制，聯(lián)合商品化質(zhì)控品(異常值)可滿足臨床實驗室室內(nèi)質(zhì)量控制要求，避免和彌補全部使用商品化質(zhì)控品成本高、質(zhì)控項目不全面等缺點，實現(xiàn)檢驗科節(jié)約成本和提高檢驗質(zhì)量的統(tǒng)一。

自制質(zhì)控品;商品化質(zhì)控品;室內(nèi)質(zhì)量控制

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.020

依據(jù)《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》，臨床檢測項目都要進行室內(nèi)質(zhì)量控制(IQC),并應使用正常和異常至少兩個濃度值質(zhì)控品的要求。合格的質(zhì)控物是開展室內(nèi)質(zhì)量控制的前提，在我國室內(nèi)質(zhì)控品主要采用進口凍干質(zhì)控品，其優(yōu)點主要是質(zhì)控品項目多、儲存時間長、便于運輸，但存在價格昂貴、需要準確加入一定量的重蒸水復溶，復溶過程也容易因加水不準或干粉丟失等原因造成測值誤差和瓶間差，部分檢測項目的質(zhì)控品難以購買等問題。國外有學者進行了液性質(zhì)控品穩(wěn)定性的研究[1],國內(nèi)部分研究人員如姜慧芬[2]、鐘志敏[3]、黎卓華[4]、王琳[5]、唐立萍[6]報道了自制室內(nèi)質(zhì)控品用于臨床免疫分析、類風濕因子、臨床凝血功能和血脂檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制，并得到了良好的驗證，具有無基質(zhì)效應、成本低、無須復溶等優(yōu)點，但存在項目單一、異常值標本不易短期內(nèi)大量收集，難以達到室內(nèi)質(zhì)量控制高、低兩種濃度質(zhì)控品的要求。我們根據(jù)實際工作需要利用患者混合血清制備(部分項目正常濃度、部分項目異常濃度)多項目質(zhì)控品并聯(lián)合商品化質(zhì)控品(異常值濃度)用于IQC，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑葡萄糖(GLU)氧化酶法、尿素(UREA)紫外-谷氨酸脫氫酶法、尿酸(UA)氧化酶法、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)紫外-蘋果酸脫氫酶法、C-反應蛋白(CRP)免疫比濁法、白蛋白(ALB)溴甲酚綠法、甘油三酯(TG)甘油磷酸氧化酶法、膽固醇(CHO)氧化酶法，試劑盒均為上海科華生物公司產(chǎn)品；抗鏈球菌溶血素O(ASO)膠乳增強免疫比濁法、類風濕因子(RF)膠乳增強免疫比濁法、淀粉酶(AMY)麥芽七糖苷法，試劑盒均為寧波美康生物公司產(chǎn)品；肌酐(CREA)肌氨酸氧化酶法，英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司產(chǎn)品。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.1.2 儀器日立7180全自動生化分析儀，海爾低溫冷凍冰箱，上海躍進數(shù)顯式三用電熱恒溫水浴箱，鑫奧GENIUS 5K-D離心機。

1.1.3 自制質(zhì)控品的制備收集實驗室日常檢測標本中的無污染、溶血、黃疸和脂血新鮮血清(CRP濃度＞20mg/L、RF＞50IU/ml、ASO＞50IU/ml、AST＞30U/ L)500ml,其大多數(shù)項目為正常參考值范圍。所有標本經(jīng)檢測術前四項(HBsAg、抗-HCV、抗-HIV1/2、TP-Ab)均為陰性，儲存于-40℃保存?zhèn)溆?。復溶冰凍混合血清，初步檢測相關物質(zhì)的濃度是否與預期值(自制質(zhì)控品正常項目值與881UN定值相近；異常項目值大于或小于634UE定值)相符合，加入萬分之二的疊氮鈉，將容器用薄膜封口，上下左右振搖15min，重復5次，每次間隔10min，混勻, 3800r/min離心10min，除去纖維蛋白沉淀物，用Eppendolf管按1ml分裝，-40℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.4 參考質(zhì)控品用RANDOX生化質(zhì)控品,采用RANDOX生化質(zhì)控品HUM PREC CONTROL3,批號為∶634UE,HUM PREC CONTROL2,批號為∶881UN。

1.2 方法所有測試均是在儀器維護保養(yǎng)后，檢測項目重新定標，有參考質(zhì)控品的在室內(nèi)質(zhì)控在控的情況下測定。

1.2.1 室內(nèi)差異評價批內(nèi)重復性試驗：取制備好的質(zhì)控品在盡可能短的時間內(nèi)進行20次連續(xù)檢測，并求其x、s、和CV%。天間重復性試驗：將自制質(zhì)控品每天一次隨機插入常規(guī)標本中檢測，連續(xù)檢測20天并求其x、s、和CV%。

1.2.2 穩(wěn)定性評價低溫冰凍貯存條件下的長期穩(wěn)定性觀察是血清樣品穩(wěn)定性研究的重要部分[7],自制質(zhì)控品置-40℃0、3、6和9個月分別抽取20支自制質(zhì)控品復溶并混勻，當天連續(xù)檢測20次，當月x與初始x比較，計算偏移。偏移(%)=[(當月檢測值-初始檢測值)÷初始檢測值]×100%。按1/2美國CLIA,88可接受性能指標規(guī)定進行評價，即CHO、GLU、ALB的偏移≤±5%，UREA的偏移≤±4.5%，CREA的偏移≤±7.5%，AMY的偏移≤±15%，TG的偏移≤±12.5%，UA的偏移≤±8.5%，AST的偏移≤±10%。其它三項(ASO、RF和CRP)由于方法學不同沒有規(guī)定。

1.2.3 瓶間差異分析取20管自制質(zhì)控品在儀器穩(wěn)定的條件下，每管測定一次，為總不精密度，計算x總、S總和CV;取其中一管質(zhì)控品連續(xù)測定20次，為測定不精密度，計算其x測、S測和CV,根據(jù)文獻[8]推存的國外有關瓶間差評價方法對自制質(zhì)控品瓶間差進行評價,按以下公式計算真實的瓶間差CV。

1.2.4 自制質(zhì)控品與參考質(zhì)控品應用于室內(nèi)質(zhì)量控制，其操作嚴格按照本室SOP文件進行。并對自制質(zhì)控品與參考質(zhì)控品用于室內(nèi)質(zhì)量控制的性能進行分析。

1.2.5 統(tǒng)計學分析采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件包處理，組間比較用χ2檢驗,P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 室內(nèi)差異評價自制質(zhì)控品12個項目測定結(jié)果的批內(nèi)和天間CV值均小于5%，重復性良好，結(jié)果見表1。

表1 自制質(zhì)控品重復性測定結(jié)果和保存于-40℃置0、3、6和9個月測定結(jié)果比較(n=20)

2.2 穩(wěn)定性評價自制質(zhì)控品9個項目偏移結(jié)果均符合1/2美國CLIA,88可接受性能指標規(guī)定，置-40℃保存3、6、9個月9個檢測項目穩(wěn)定性均符合要求；其他三項ASO、RF和CRP的偏移均＜±5%穩(wěn)定性良好，能滿足室內(nèi)質(zhì)量控制的要求，詳見表1。

2.3 瓶間差異分析自制質(zhì)控品12項檢測項目瓶間差CV值均符合衛(wèi)生部臨床檢驗中心規(guī)定的質(zhì)控品技術規(guī)格[9]，結(jié)果詳見表2。

2.4 聯(lián)合應用自制質(zhì)控品與參考質(zhì)控品(兩個批號)應用半年,二者對失控的檢出有良好的一致性,自制質(zhì)控品檢出的98次失控中,UREA和GLU各出現(xiàn)一次由于質(zhì)控品原因引起的失控,占2.04%；批號為881UN參考質(zhì)控品檢出64次失控,只有CREA出現(xiàn)一次失控占1.56%；批號為634UE參考質(zhì)控品檢出67次失控,GLU出現(xiàn)一次失控占1.49%；二者由于質(zhì)控品原因引起的失控次數(shù)占總失控次數(shù)的百分率比較,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。室內(nèi)質(zhì)控Z-分數(shù)圖顯示自制質(zhì)控品與兩個批號參考質(zhì)控品半年的平行日間質(zhì)控數(shù)據(jù)走勢、離散程度和對失控的檢出非常相似。

3 討論

從表1結(jié)果可以看出，自制質(zhì)控品9個項目偏移結(jié)果均符合1/2美國CLIA,88可接受性能指標，ASO、RF和CRP的偏移均＜±5%,據(jù)國外文獻報道質(zhì)控的標準是15%[10],穩(wěn)定性良好。在-40℃放置9個月成份穩(wěn)定，說明本實驗室自制的多項目質(zhì)控品12個檢測項目有良好的重復性和穩(wěn)定性，其瓶間差完全符合衛(wèi)生部臨床檢驗中心文件《臨床化學質(zhì)控血清一般技術要求》對于質(zhì)控品瓶間差的要求：酶項目CV小于2%，其余項目CV小于1%，存放后不穩(wěn)定成分(如膽紅素、血糖和酶等)其CV值不能超過原來CV值的1.5倍。從自制質(zhì)控品與參考質(zhì)控品聯(lián)合應用于室內(nèi)質(zhì)控的結(jié)果和室內(nèi)質(zhì)控圖分析，顯示兩種質(zhì)控品半年的平行日間質(zhì)控數(shù)據(jù)走勢、離散程度和對失控的檢出都非常相似，二者由于質(zhì)控品原因引起的失控與總失控次數(shù)百分率比較無統(tǒng)計學差異，進一步說明了自制質(zhì)控品的性能穩(wěn)定，可以替代相同或相近濃度的商品化質(zhì)控品，完全能用于室內(nèi)質(zhì)量控制。需要指出的是，由于方法學的改進，如ASO、RF和CRP等免疫學檢測項目，在多數(shù)基層醫(yī)院采用生化分析儀檢測，但很多試劑廠家暫時還不能提供相關質(zhì)控品，自制質(zhì)控品在這些項目室內(nèi)質(zhì)量控制中取得了良好的效果，彌補了商品化質(zhì)控品不能覆蓋的部分檢測項目。由于時間和實驗條件的限制，對此自制質(zhì)控品更多的檢測項目分析還有待進一步研究、完善。

綜上，本實驗室自制的質(zhì)控品符合室內(nèi)質(zhì)控品應具有的分析物穩(wěn)定、均一、瓶間差異小、合理的分析物濃度、特別是無基質(zhì)效應等要求，自制的質(zhì)控品主要以正常值為主，部分項目為異常值，具有原料來源便利，制作技術較為成熟的特點，有利于IQC和EQA的開展，聯(lián)合異常值商品化質(zhì)控品用于室內(nèi)質(zhì)量控制，能彌補基層醫(yī)院對多項目質(zhì)控品的需要；自制質(zhì)控品還能解決商品化質(zhì)控品價格昂貴、需要復溶、不能覆蓋全部檢測項目等缺點，使自制質(zhì)控品和商品化質(zhì)控品達到優(yōu)勢互補，實現(xiàn)檢驗科節(jié)約成本和提高檢驗質(zhì)量的統(tǒng)一。

表2 自制質(zhì)控品的瓶間差分析

[1]Goi G,Besozzi M,Bairati C,et al.Preparation of a stable liquid material for calibration and quality control for lysosomal enzymes in plasma.Assay of enzymes of lysosomal origin in plasma,I[J].Eur J Clin Chem Clin Biochem,1992,30(10)∶595-598.

[2]姜慧芬,張劍英,陳文虎.自制凍干多項目腫瘤標志物質(zhì)控品的評價[J].浙江實用醫(yī)學,2013,18(1)∶9-11.

[3]鐘志敏,王維,莫云丹,等.自制腫瘤標志物復合質(zhì)控血清穩(wěn)定性的研究[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志,2011,10(15)∶1137-1141.

[4]黎卓華,李鄂,王希平,等.自制類風濕因子質(zhì)控品應用及其質(zhì)量的監(jiān)控作用評價[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2007,28(9)∶860-861.

[5]王琳,王筆金.自制凝血質(zhì)控品用于室內(nèi)質(zhì)控的研究[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2009,27(4)428-429.

[6]唐立萍,張瑞鎬,居漪,等.復合血脂質(zhì)控品的制備及性能評價[J].檢驗醫(yī)學,2013,28(5)∶430-433.

[7]ISO Guide 35.Reference material general and statigtical principles for certifications[S].ISO,Geneva,Switzer,2006.

[8]王建中,汪潤,袁家穎,等.流式細胞計數(shù)淋巴細胞亞群的全血質(zhì)控品的研究[J].中華檢驗醫(yī)學雜志,2005,2(9)∶897-901.

[9]葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].第3版.南京∶東南大學出版社,2006∶88-89.

[10]Wilson JF.Survey of reference ranges and clinical measurements for psychoactive drugs in serum[J].Ther Drug Monit,2003,25(2)∶243-247.

R446.11+2

A

1674-1129(2014)06-0705-03

2014-03-09；

2014-09-25)

贛州市科技局計劃項目(GZ2014ZSF383)