董玉蘭，徐冉，陳龍山，馬亮

(景德鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院檢驗科，江西景德鎮(zhèn)333000)

·檢驗與臨床·

3394例女性患者宮頸人乳頭瘤病毒基因分型及臨床意義

董玉蘭，徐冉，陳龍山，馬亮

(景德鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院檢驗科，江西景德鎮(zhèn)333000)

目的調查女性人群宮頸人乳頭瘤病毒(HPV)感染情況及其亞型分布，為預防HPV感染和宮頸癌防治提供有價值的參考資料。方法采用DNA反向斑點雜交技術(RDB)檢測江西省景德鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院婦科3394例宮頸HPV感染與分型情況，并對HPV亞型感染情況進行對比分析。結果3394例就診者中共檢出HPV陽性者526例，陽性率為15.50%。其中單一型感染率為12.20%，主要以HPV52(18.06%，95/526)、16(11.60%，61/526)和58型(9.70%，51/526)感染為主，雙重及多重感染率為3.30%，主要以HPV16、52、58、6、39型感染為主。結論女性宮頸HPV感染主要以52、16和58型感染為主，常見感染亞型既符合亞洲人群的分布規(guī)律，又有一定的區(qū)域性。推測包含HPV-52和58型的預防性疫苗會為女性提供更高幾率的保護。

人乳頭瘤病毒；基因分型；宮頸癌

宮頸癌(Cervical cancer，CC)是世界第二大常見婦科腫瘤。流行病學研究已經證實人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)感染是導致浸潤性宮頸癌發(fā)生的主要因素，約99.7%的宮頸癌患者都可檢測到HPV-DNA[1]。本研究采用基因分型檢測技術對江西省景德鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院3394例婦女HPV感染情況進行調查分析，旨在了解本地區(qū)HPV感染現(xiàn)狀，為宮頸癌的防治提供基礎數(shù)據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象2011年1月至2013年12月來江西省景德鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院就診女性患者3394例，年齡18～87歲，平均41歲?；颊呔鶠槌醮芜M行HPV核酸檢測，均無宮頸疾病治療與抗HPV藥物治療史。

1.1.1 納入標準已婚或有性生活史，未妊娠，無子宮切除術和子宮頸手術史，無盆腔放射治療史。每一位研究對象均自愿接受HPV基因分型檢測并簽署知情同意書。

1.1.2 排除標準凡有下列情況者予以剔除：(1)既往有宮頸疾病治療與抗HPV藥物治療史；(2)處于月經期；(3)目前正在妊娠或者妊娠終止3個月內；(4)不同意接受HPV篩查檢測者。

1.2 儀器與試劑HPV基因分型檢測試劑購于中山大學達安基因股份有限公司，配有試劑盒Ⅰ和試劑盒Ⅱ，試劑盒Ⅰ主要為PCR反應液，試劑盒Ⅱ為HPV各亞型雜交膜條、雜交液、TMB等。PCR儀為ABI7300，雜交儀為電熱恒溫振蕩水槽(上海精宏實驗設備有限公司)。

1.3 實驗方法

1.3.1 標本采集宮頸脫落細胞：在無菌條件下，以窺陰器暴露宮頸，用棉拭子擦去宮頸分泌物，然后使用專用的宮頸刷置于宮頸口，用宮頸刷伸入宮頸管內2cm，旋轉數(shù)周并停留片刻后取出；將取樣后的宮頸刷放入裝有2ml細胞保存液(丹陽市東勝塑料制品有限公司)的有蓋試管中,擰緊瓶蓋，作好標記送檢驗室檢測。

1.3.2 核酸提取將采集的標本在震蕩器上充分震蕩混勻，吸取標本轉至1.5ml離心管中，12000r/min離心5min；去上清，沉淀加入50μl DNA提取液充分混勻，恒溫處理(10±1)min；12000r/min離心5min，備用。

1.3.3 PCR擴增HPV DNA提取上清5μl加入HPV核酸PCR擴增體系組份，6000 r/min瞬時離心后，將各反應管放入PCR儀，按下列條件擴增：93℃3min；93℃40s，55℃40s，72℃40s，40個循環(huán)；72℃延伸7min。

1.3.4 雜交及分析過程雜交、洗膜與顯色均嚴格按照說明書進行，雜交膜條上顯示藍色斑點為陽性，多個斑點為多重感染。統(tǒng)計HPV感染率及基因型分布。

1.4 統(tǒng)計學方法應用SPSS12.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各年齡組HPV感染情況3394例送檢標本中19種型別均可被檢出，HPV檢測陽性526例，陽性率為15.50%，其中單一感染414例，雙重及多重感染112例，感染率分別為12.20%和3.30%。從年齡分布上分析，30～34歲年齡段的患者HPV感染率最高，為18.91%(73/386)，其次為45～49歲的患者，感染率為16.64%(98/589)。在各年齡組中HPV感染的陽性率無顯著性差異(P＞0.05)。各年齡組患者HPV感染情況見表1。

表表11 33339944例例宮宮頸頸標標本本各各年年齡齡組組HHPPVV感感染染情情況況

2.2 HPV單一感染情況414例單一感染患者主要以HPV52、16和58型感染為主，占50.00%，分別為95例(22.95%)、61例(14.73%)和51例(12.32%)。其中低危型(HPV6、11、43型)感染44例(44/414，10.63%)，高危型感染(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304型) 370例(370/414，89.37%)。

2.3 HPV雙重及多重感染情況112例雙重及多重感染中，雙重感染88例(88/112，78.57%)，三重及三重以上感染24例(24/112，21.43%)，感染類型主要以HPV16、52、58、6、39為主，分別為25例(22.32%)、18例(16.07%)、13例(11.61%)、12例(10.71%)、10例(8.93%)，在各種亞型感染中，HPV39、6、11、51主要以復合感染為主。HPV各型感染分布見表2。

3 討論

本研究結果顯示HPV-52、16和58型是女性的主要感染型別，這與Cliffeord GM等[1]報道的HPV-52和58型在亞洲人群中占有相對優(yōu)勢相吻合。而HPV-52居首位，超過HPV-16，提示HPV感染型別存在一定的地域性。目前已經上市的針對高危型別HPV-16及HPV-18的預防性疫苗，對其它型別的交叉預防作用有限，推測第一代預防性疫苗的效果，需要考慮不同人群間HPV型別分布的差異。所以對于研發(fā)針對特定地區(qū)的第二代預防性疫苗，該地區(qū)HPV優(yōu)勢型別資料的獲得則具有指導意義。因此，從HPV感染的主要型別推斷包含HPV-52和58型的預防性疫苗會為本地區(qū)的女性提供更高幾率的保護。

表2 526例HPV陽性各亞型感染情況[n(%)]

目前已經有超過100種的HPV型別被檢測出，約40種型別與生殖器粘膜的感染有關[2]。本研究采用HPV-DNA-反向斑點膜雜交技術(RDB方法)對3394例女性患者進行HPV核酸檢測和基因分型，低危型6、11、43和高危型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304型)共19種型別均可被檢測出。結果526例患者HPV陽性，其陽性率為15.50%，與高宇琳[3]報道的廣東東莞較為接近。但比方麗娟等[4]報道的江西地區(qū)要低很多，形成這一差異的主要原因是研究對象的不同。為了進一步了解HPV在女性宮頸感染情況，本研究將患者按年齡分為不同組，得出各年齡組中HPV感染的陽性率差別不大。與楊君等[5]報道的重慶地區(qū)及項靜婉等[6]報道的浙江沿海地區(qū)的HPV感染陽性率的高峰出現(xiàn)在50歲以上女性人群不同，推測除存在地區(qū)間差異外，主要與年輕性活躍婦女HPV一過性感染及年齡因素致清除病毒能力弱所引起的持續(xù)性感染和潛在感染有關。

本研究中雙重及多重感染例數(shù)占總例數(shù)的21.29%(112/526)，提示女性人群多重感染率較高。雖然有關HPV的多重感染率與宮頸病變的關系目前還沒有確切的結論[7]，有研究認為宮頸病變的嚴重程度與HPV感染的基因型多寡無關，而與感染HPV亞型的致病能力有關[8]。但也有研究認為，HPV的多重感染者出現(xiàn)持續(xù)感染的風險更大[9]，而HPV的持續(xù)感染又是宮頸病變的原因。因此對于HPV多重感染者應建議定期隨訪和追蹤。

針對性地廣泛開展HPV核酸檢測及基因分型篩查可以及時發(fā)現(xiàn)高危人群，并且可能有助于高危人乳頭瘤病毒陽性婦女的危險分層[10]，從而做到早期阻斷宮頸癌病變的進一步發(fā)展，有效降低宮頸癌的發(fā)病率和死亡率。

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[4]方麗娟,袁水斌,王剛,等.江西地區(qū)人乳頭瘤病毒感染分型檢測的研究[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2013，31(2):181-182.

[5]楊君,周德平,陳鳳嫻,等.重慶地區(qū)2497例婦科就診患者HPV感染狀況分析[J].重慶醫(yī)科大學學報,2012,37(4):347-349.

[6]項靜婉,周仁芳,王攀,等.浙江省沿海地區(qū)女性人乳頭瘤病毒的感染狀況[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生,2011,49(35):74-75.

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R737.33,R446.62

A

1674-1129(2014)04-0440-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.04.027

2014-04-24；

2014-05-20)