錢獻(xiàn)，楊南

(南昌市中心血站，江西南昌330025)

南昌血站病毒滅活血漿制品主要質(zhì)量控制指標(biāo)的分析

錢獻(xiàn)，楊南

(南昌市中心血站，江西南昌330025)

目的了解本血站經(jīng)亞甲藍(lán)/光化學(xué)法病毒滅活后，新鮮冰凍血漿、冷沉淀、冷上清中總蛋白、纖維蛋白原和凝血因子Ⅷ的含量是否符合《全血及成份血質(zhì)量要求》(GB18649-2012)的質(zhì)量要求。方法隨機(jī)采集100袋新鮮冰凍血漿，經(jīng)亞甲藍(lán)/光化學(xué)法病毒滅活過濾后留取1份標(biāo)本(病毒滅活新鮮冰凍血漿實驗組)，解凍后制備冷沉淀前各留取1份標(biāo)本(病毒滅活新鮮冰凍血漿實驗組)，采用改良快速融化離心法制備冷沉淀后各留取1份標(biāo)本(冷沉淀實驗組)，留取冷上清標(biāo)本各1份(冷上清實驗組)，三個實驗組分別檢測總蛋白、纖維蛋白原和凝血因子Ⅷ含量。結(jié)果病毒滅活新鮮冰凍血漿總蛋白和凝血因子Ⅷ含量分別為57.7g/L、0.66IU/ml,冷沉淀的纖維蛋白原和凝血因子Ⅷ含量分別為154.4mg/袋、87.8IU/袋，冷上清的總蛋白含量為46.3g/L。結(jié)論本站制備的病毒滅活新鮮冰凍血漿、冷沉淀符合《全血及成份血質(zhì)量要求》(GB18649-2012)的質(zhì)量要求，冷上清的血漿蛋白含量不足，不能標(biāo)注為病毒滅活冰凍血漿在臨床上使用。

新鮮冰凍血漿；冷沉淀；冷上清；蛋白；凝血因子

由于ELISA、NAT檢測技術(shù)的局限性、檢測項目的有限性,即使通過加強(qiáng)對低危獻(xiàn)血者的招募和血液的篩選，仍不可能完全避免經(jīng)血傳播病原體的漏檢，為有效降低疾病經(jīng)血傳播的風(fēng)險，亞甲藍(lán)/光化學(xué)法用于血漿病毒滅活在中國血站系統(tǒng)已得到廣泛采用。南昌血站于2009年開展亞甲藍(lán)/光化學(xué)法制備病毒滅活血漿，目前病毒滅活血漿已在南昌市各醫(yī)院得到廣泛應(yīng)用，為進(jìn)一步改進(jìn)病毒滅活血漿的制備方法、規(guī)范質(zhì)量控制，本站隨機(jī)抽取200份經(jīng)過亞甲藍(lán)/光化學(xué)法進(jìn)行病毒滅活處理的血漿樣本，進(jìn)行質(zhì)量指標(biāo)檢測。

1 材料與方法

1.1 研究對象隨機(jī)抽取符合《獻(xiàn)血者健康檢查標(biāo)準(zhǔn)》的無償獻(xiàn)血者血樣100份，使用ACD-B保養(yǎng)液血袋采集血液。

1.2 試劑與儀器ZBK-YBM-01醫(yī)用血漿病毒滅活柜(山東淄博中?？滇t(yī)療器具公司)，HXL血液濾白柜(青島海爾公司)，WG-G型低溫操作柜(山東威高集團(tuán)醫(yī)用高分子制品公司)，SDJ-20血漿速凍機(jī)(天津天商冰凍科技有限公司)；KJX-111冰凍血漿解凍箱(蘇州醫(yī)用儀器廠)，Thermo CRYOFUGE6000i大容量離心機(jī)(賽默飛世爾科技公司)，WG-JGJ-I型無菌接管機(jī)(山東威高集團(tuán)醫(yī)用高分子制品公司)，F(xiàn)B-20型血凝儀(山西亞森)，超低溫冰箱MDF-U50V(日本SANYO公司)?？偟鞍诇y定試劑盒(四川邁克生物科技公司)，凝血因子Ⅷ促凝活性檢測試劑盒、纖維蛋白原檢測試劑盒(成都協(xié)和生物技術(shù)公司)，一次性使用病毒滅活裝置配套用輸血過濾器(山東淄博中?？滇t(yī)療器具公司)。

1.3 方法血液采集后4h內(nèi)按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程分離新鮮血漿，向血漿中加入一定量亞甲藍(lán)，混勻后使亞甲藍(lán)最終濃度為1μg/ml，25 000～40 000 Lx光照強(qiáng)度的可見光照射35min，病毒滅活柜的溫度保持為5℃，將經(jīng)過光照后的血漿通過病毒滅活過濾器去除殘余的亞甲藍(lán)和白細(xì)胞后，各留取1份2ml標(biāo)本(病毒滅活FFP實驗組)，血漿連同留取的標(biāo)本置于-50℃血漿速凍機(jī)速凍2h后保存于-30℃，48h后，標(biāo)本(病毒滅活FFP實驗組)置于37℃解凍，解凍后檢測總蛋白、凝血因子Ⅷ含量，病毒滅活FFP采用改良快速融化離心法制備冷沉淀，制備好的冷沉淀各留取1份2ml標(biāo)本(冷沉淀實驗組)，檢測纖維蛋白原、凝血因子Ⅷ含量，去除冷沉淀后的血漿各留取1份2ml標(biāo)本(冷上清實驗組)檢測總蛋白含量。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析樣本測定結(jié)果采用IBM SPSS Statistics v19進(jìn)行統(tǒng)計，剔除離群值，所得結(jié)果用x±s表示。由于本次研究只分析樣品測定結(jié)果是否符合國家標(biāo)準(zhǔn)下限值，而非樣本均數(shù)與總體均數(shù)的比較，所以不需要進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)比較。

2 結(jié)果

檢測得三種病毒滅活血漿制品主要質(zhì)量指標(biāo)與國家標(biāo)準(zhǔn)的比較見表1。

表1 三種病毒滅活血漿制品主要質(zhì)量指標(biāo)與國家標(biāo)準(zhǔn)的比較

病毒滅活新鮮冰凍血漿總蛋白和凝血因子Ⅷ含量分別為57.7g/L、0.66IU/ml,冷沉淀的纖維蛋白原和凝血因子Ⅷ含量分別為154.4mg/袋、87.8IU/袋，符合《全血及成份血質(zhì)量要求》(GB18649-2012)的質(zhì)量要求，冷上清的總蛋白含量為46.3g/L，低于國家標(biāo)準(zhǔn)≥50g/L的要求。

3 討論

亞甲藍(lán)可與病毒核酸的鳥嘌呤以及病毒的脂質(zhì)包膜相結(jié)合，在可見光的作用下，可使病毒的核酸斷裂，包膜破損，使病毒完全失去穿透、復(fù)制及感染能力，從而達(dá)到滅活病毒的目的。亞甲藍(lán)/光化學(xué)法用于血漿病毒滅活在中國血站系統(tǒng)已得到廣泛采用，其效果與安全性已得到廣泛的驗證。

病毒滅活新鮮冰凍血漿富含多種凝血因子，特別是凝血因子Ⅷ，因此主要用于補(bǔ)充凝血因子特別是不穩(wěn)定因子，起止凝血作用，如甲乙型血友病患者出血，大容量的血漿置換，大面積燒傷體液外滲等。冷沉淀含有大量的凝血因子Ⅷ、血管性血友病因子(vWF)、纖維蛋白原、纖維結(jié)合蛋白，因容量小，有效成分濃度高，可以快速輸入迅速提升體內(nèi)的凝血因子水平，主要用于補(bǔ)充纖維蛋白原缺乏癥和甲型血友病患者出血[1-4]。有研究表明[5,6]經(jīng)過病毒滅活后，滅活病毒新鮮冰凍血漿與冷沉淀各種有效成份均有不同程度的下降，但沒有統(tǒng)計學(xué)上的差異，本站制備的病毒滅活新鮮冰凍血漿總蛋白和凝血因子Ⅷ含量分別為57.7g/L、0.66IU/ml，冷沉淀的纖維蛋白原和凝血因子Ⅷ含量分別為154.4mg/袋、87.8IU/袋，符合國家標(biāo)準(zhǔn)。目前冷沉淀的制備，有的血站從病毒滅活新鮮冰凍血漿制備，有的血站認(rèn)為從新鮮冰凍血漿制備可以獲得更高的質(zhì)量指標(biāo)，但是從安全輸血的角度來看，冷沉淀輸注量大，傳染病毒的風(fēng)險顯然較高，因此采用病毒滅活新鮮冰凍血漿制備冷沉淀就顯得更為安全。

與病毒滅活新鮮冰凍血漿與冷沉淀相比較，冷上清其不穩(wěn)定凝血因子、穩(wěn)定凝血因子、vWF和血漿蛋白的含量都明顯較低[5-7]，本站冷上清的總蛋白含量為46.3g/L，低于國家標(biāo)準(zhǔn)≥50g/L的要求，因此不能把冷上清標(biāo)識為普通冰凍血漿而應(yīng)用于臨床。而英國血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會輸血工作組于2004年發(fā)布的英國血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會輸血特別委員會在《新鮮冰凍血漿、冷沉淀和冷上清使用指南》中亦指出：冷上清血漿去除了Ⅷ因子和纖維蛋白原，缺乏vWF大分子量多聚體，但含有vWF金屬蛋白酶[8]，血栓性微血管疾病(TTP)是由于患者體內(nèi)vWF金屬蛋白酶活性的嚴(yán)重缺乏而致使vWF不能水解，從而形成超大vWF多聚體，后者可直接導(dǎo)致血小板聚集，很多臨床研究[9-11]也表明，冷上清在治療方面有確切的療效，如果能明確vWF金屬蛋白酶、vWF大分子量多聚體的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，就能成為一種新型的成分血，從而能充分利用寶貴的血液資源。

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R457.1+4

A

1674-1129(2014)04-0432-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.04.023

2014-04-02；

2014-06-17)

楊南。