蔡慧琳,司徒瑞儒

(廣州市海珠區(qū)第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,廣東廣州510220)

顯色培養(yǎng)基檢測醫(yī)務(wù)人員手和鼻咽攜帶耐甲氧西林金黃色葡萄球菌方法的應(yīng)用評價(jià)

蔡慧琳,司徒瑞儒

(廣州市海珠區(qū)第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,廣東廣州510220)

目的通過對本院醫(yī)生、護(hù)士及護(hù)理員的手及鼻咽前庭進(jìn)行耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)檢出情況的分析，比較兩種檢驗(yàn)方法MRSA的檢出效果。方法將醫(yī)護(hù)人員的678例手標(biāo)本及179例鼻咽前庭標(biāo)本分別用兩種檢驗(yàn)方法進(jìn)行MRSA鑒定，一種將標(biāo)本用血平板分離培養(yǎng)初篩后，再用全自動微生物鑒定儀進(jìn)行菌種鑒定，同時(shí)用頭孢西丁(30μg/片)和苯唑西林(1μg/片)紙片擴(kuò)散法按2010年美國CLSI抗菌藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)鑒定MRSA，此傳統(tǒng)檢測方法為本實(shí)驗(yàn)的參考方法，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，另一種將標(biāo)本直接接種于MRSA選擇性顯色培養(yǎng)基上，根據(jù)判定說明書觀察在培養(yǎng)基上金黃色葡萄球菌的生長情況鑒定MRSA，此為快速檢測方法，并進(jìn)行兩種方法MRSA檢出效果的比較。結(jié)果傳統(tǒng)檢測方法檢出手標(biāo)本有5株MRSA，44株甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌(MSSA)，鼻咽前庭拭子標(biāo)本有3株MRSA，22株MSSA；快速檢測方法檢出手標(biāo)本有6株MRSA，43株MSSA，鼻咽前庭拭子標(biāo)本有3株MRSA，22株MSSA。結(jié)論采用MRSA選擇性顯色培養(yǎng)基方法與傳統(tǒng)檢測方法比較，手標(biāo)本檢出MRSA的總符合率為95.9%，鼻咽前庭標(biāo)本檢出MRSA的總符合率為100%，兩種檢測方法對于MRSA及MSSA檢出結(jié)果均無顯著性差異(P＞0.05)，由于其操作簡便，特異性高，適合于在各級臨床實(shí)驗(yàn)室廣泛推廣用于鑒定MRSA。

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌;頭孢西??；苯唑西林

自1961年英國首次發(fā)現(xiàn)耐甲氧西林金黃色葡萄菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)以來[1]，隨后歐美和亞洲各國MRSA的分離量逐年增加，現(xiàn)已成為醫(yī)院感染的主要病原菌之一，并且由于其多重耐藥現(xiàn)象日益嚴(yán)重，其防治形勢十分嚴(yán)峻，已成為當(dāng)前醫(yī)院感染控制的難點(diǎn)，并引起各國衛(wèi)生行政部門及世界衛(wèi)生組織的高度重視。有研究發(fā)現(xiàn)，在大約30%～50%人的皮膚和鼻咽部，都有金黃色葡萄菌的定植[2]，而醫(yī)護(hù)人員的帶菌率可高達(dá)70%以上，且多為耐藥性菌株，是醫(yī)源性感染的主要傳染源。因此臨床上除考慮患者作為傳染源外，醫(yī)護(hù)人員帶菌、環(huán)境污染等均可成為MRSA感染或爆發(fā)流行的潛在危險(xiǎn)因素[3]。另外隨著MRSA感染疾病治療費(fèi)用高額，不但給社會造成了很大的負(fù)擔(dān)，也給患者帶來心理的傷害和經(jīng)濟(jì)上的負(fù)擔(dān)[4]，所以預(yù)防MRSA感染至關(guān)重要。本文通過用傳統(tǒng)檢測方法和快速檢驗(yàn)方法對本院醫(yī)護(hù)人員的678例手標(biāo)本及179例鼻咽前庭標(biāo)本進(jìn)行MRSA檢出效果的比較，分析快速檢測方法與傳統(tǒng)檢測方法對于MRSA的鑒定結(jié)果有否顯著性差異，為有助于MRSA的快速準(zhǔn)確檢出，以建立實(shí)時(shí)的監(jiān)控體系，對醫(yī)院獲得性感染的防控有著十分重要的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2013年5月至2014年2月以來我院醫(yī)生、護(hù)士及護(hù)理員的手及鼻咽前庭拭子標(biāo)本，手標(biāo)本為678例，鼻咽前庭拭子標(biāo)本為179例。其中678例手標(biāo)本采樣中，醫(yī)生236例，護(hù)士389例，護(hù)理員53例；179例鼻咽前庭拭子標(biāo)本采樣中，醫(yī)生79例，護(hù)士83例，護(hù)理員17例。

1.2 標(biāo)本采集和處理

1.2.1 標(biāo)本采集標(biāo)本采集前先對采樣人員進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)采樣方法及流程的培訓(xùn)，以保證采樣的一致性。用無菌生理鹽水濕潤棉拭子對醫(yī)生、護(hù)士、護(hù)理員的手及鼻咽前庭進(jìn)行采樣，采樣完成后將所采集的標(biāo)本立即送檢。

1.2.2 標(biāo)本接種按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》將所采集的678例手標(biāo)本及179例鼻咽前庭拭子標(biāo)本分別接種于5%羊血瓊脂培養(yǎng)基和選擇性顯色培養(yǎng)基中，并放置孵箱35℃培養(yǎng)48h。

1.2.3 待檢菌株選取10株大腸埃希菌、20株銅綠假單胞菌、35株肺炎克雷伯菌、6株白念珠菌、17株糞腸球菌、6株奇異變形桿菌、9株尿腸球菌作MRSA選擇性顯色培養(yǎng)基的特異性觀察。

1.3 試劑和儀器5%羊血瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)基和MRSA選擇性顯色培養(yǎng)基均由迪景公司提供。VITEK 2 COMPACT全自動微生物鑒定儀為法國生物梅里埃公司產(chǎn)品。

1.4 方法

1.4.1 MRSA初篩孵箱35℃培養(yǎng)48h后，觀察接種于5%羊血瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)基上有無菌落生長，菌落形態(tài)及顏色，然后進(jìn)行革蘭染色、觸酶、凝固酶(玻片法)、生化反應(yīng)(葡萄糖發(fā)酵、甘露醇發(fā)酵等)、DNA酶等鑒定試驗(yàn)為陽性的菌株篩查為金黃色葡萄球菌。

1.4.2 MRSA選擇性顯色培養(yǎng)基菌種鑒定觀察接種于MRSA選擇性顯色培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)狀況，依據(jù)這種MRSA選擇性顯色培養(yǎng)基判定說明書對在此培養(yǎng)基上生長的金黃色葡萄球菌進(jìn)行MRSA鑒定。

1.4.3 MRSA確診將通過傳統(tǒng)檢測方法篩查為金黃色葡萄球菌的菌株用VITEK 2 COMPACT全自動微生物鑒定儀進(jìn)行菌種鑒定，同時(shí)用苯唑西林(1ug/片)及頭孢西丁(30μg/片)紙片擴(kuò)散法，按照2010年美國CLSI抗菌藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，苯唑西林紙片擴(kuò)散法抑菌圈≤10mm為耐藥，判定為MRSA,≥13mm為敏感，判定為MSSA；頭孢西丁紙片擴(kuò)散法抑菌圈≤19mm為耐藥，判定為MRSA，≥20mm為敏感，判定為MSSA。

1.5 數(shù)據(jù)處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料比較采用配對χ2檢驗(yàn)，P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 快速檢測方法與傳統(tǒng)檢測方法對于醫(yī)護(hù)人員手和鼻咽前庭拭子標(biāo)本MRSA檢出效果比較將678例醫(yī)護(hù)人員的手標(biāo)本和179例醫(yī)護(hù)人員的鼻咽前庭拭子標(biāo)本分別用兩種方法進(jìn)行MRSA檢測，快速檢測方法對于手標(biāo)本的MRSA檢出效果與傳統(tǒng)檢測方法相比，其陽性符合率為83.3%，陰性符合率為97.7%，總符合率為95.9%；快速檢測方法對于鼻咽前庭拭子標(biāo)本的MRSA檢出效果與傳統(tǒng)檢測方法相比，其陽性符合率為100%，陰性符合率為100%，總符合率為100%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩種檢測方法對于手標(biāo)本和鼻咽前庭拭子標(biāo)本的MRSA及MSSA檢測結(jié)果無顯著性差異(P> 0.05)，見表1。

表1 兩種檢測方法對于手和鼻咽前庭標(biāo)本比較

2.2 MRSA選擇性顯色培養(yǎng)基特異性觀察將10株大腸埃希菌、20株銅綠假單胞菌、35株肺炎克雷伯菌、6株白念株菌、17株糞腸球菌、6株奇異變形桿菌、9株尿腸球菌均接種于MRSA選擇性顯色培養(yǎng)基上，35℃需氧條件下培養(yǎng)48h后觀察細(xì)菌生長情況，結(jié)果顯示上述各菌都沒有生長，表明該種培養(yǎng)基抑制了葡萄球菌屬以外的細(xì)菌生長，有很好的特異性。

3 討論

金黃色葡萄球菌被發(fā)現(xiàn)不同程度地定植于人的皮膚和鼻咽部中，有時(shí)它會進(jìn)入人體而引起感染，這種感染輕微的會在皮膚上長瘡和出疹，嚴(yán)重的則引起肺炎或血液感染。對葡萄球菌引起的感染通常用青霉素類的抗菌素進(jìn)行治療，這種治療多數(shù)情況下都有效，但部分葡萄球菌對甲氧西林敏感性下降甚至耐藥，即耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)[5]。隨著抗菌藥物的廣泛使用，耐甲氧西林葡萄球菌的耐藥情況日益嚴(yán)重[6]。由于MRSA在醫(yī)院和社區(qū)的感染人數(shù)快速增加，醫(yī)院內(nèi)MRSA感染的預(yù)防和控制迫在眉睫。MRSA篩查結(jié)果可指導(dǎo)接觸預(yù)防感染控制措施的執(zhí)行。然而，“MRSA篩查－接觸預(yù)防”感染控制策略受較多因素影響，幾項(xiàng)大規(guī)模的前瞻性觀察研究顯示MRSA篩查能否預(yù)防MRSA傳播和感染尚有爭議[7]，也因?yàn)槠鋵Χ喾N抗生素耐藥，引起的感染難以控制而成為醫(yī)院和社區(qū)發(fā)生感染的嚴(yán)重問題，已被列為世界三大最難解決的感染性疾患的第一位。當(dāng)考慮為感染性疾病時(shí)，應(yīng)盡早查明感染病原，根據(jù)病原種類及藥敏試驗(yàn)結(jié)果，針對性選擇抗菌藥物是有效控制感染的關(guān)鍵所在[8]。醫(yī)院內(nèi)的MRSA篩查并不能阻止抗生素耐藥的發(fā)生及MRSA的進(jìn)化，其目的是為降低醫(yī)院內(nèi)感染的發(fā)生和避免患者由此而來的嚴(yán)重感染。臨床上醫(yī)護(hù)人員帶菌均可成為MRSA感染的潛在危險(xiǎn)因素，如果沒有形成醫(yī)院感染的概念，或即使有其概念但沒有有效的檢測系統(tǒng)，往往很難掌握醫(yī)院感染的發(fā)生。因此，建立MRSA鑒定的快速方法顯得尤為重要。

目前來說，MRSA的鑒定方法大致包括：紙片擴(kuò)散法(初篩方法)、瓊脂稀釋法(MIC法)、選擇性培養(yǎng)基法、E-test法、自動化儀器檢測法、DNA探針雜交法、PCR法等[9]，本研究發(fā)現(xiàn)，通過選用集分離、培養(yǎng)及鑒定MRSA于一體的選擇性顯色培養(yǎng)基的快速檢測方法與先通過紙片擴(kuò)散法進(jìn)行初篩，再用全自動微生物鑒定儀進(jìn)行MRSA菌種鑒定的傳統(tǒng)檢測方法相比，檢測出的MRSA菌株及MSSA菌株結(jié)果均無顯著性差異，并且通過本研究實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)MRSA選擇性顯色培養(yǎng)基對于抑制葡萄球菌屬以外的細(xì)菌有很好的特異性，由于此快速檢測方法結(jié)果容易判定，不需要特殊儀器，大大節(jié)省了時(shí)間上和經(jīng)濟(jì)上的成本，適合我國目前大多數(shù)臨床實(shí)驗(yàn)室手工操作的實(shí)際情況，更有利于MRSA的大規(guī)模醫(yī)院內(nèi)感染性篩查工作的開展，為做好醫(yī)院內(nèi)感染性控制工作打下良好的基礎(chǔ)。

綜上所述，MRSA快速檢測方法的廣泛開展對于建立醫(yī)院內(nèi)感染的實(shí)時(shí)監(jiān)控體系，做好醫(yī)院內(nèi)MRSA感染的控制有著十分重要的意義。

[1]Gould FK,Brindle R,Chadwick PR,et al.Guidelines(2008)for the prophylaxis and treatment of methicillin-resistant Staphylococcus aureus(MRSA)infections in the United Kingdom[J].J Antimicrob hemother,2009,(63):849-861.

[2]FuruyaEY,LowyFD.Antimicrobial-resistant bacteria in the community setting[J].Nat Rev Microbiol,2006,4(1):36-45.

[3]魏全珍,劉麗華,張慧珍,等.醫(yī)護(hù)人員患者及陪護(hù)、環(huán)境MRSA帶菌狀況調(diào)查研究[J].中國實(shí)用醫(yī)藥,2008,3(9):15－16.

[4]Tarzi S,Kennedy P,Stone S,et al.Methicillin-resistant Staphylococcus aures:psychological impact of hospitalization and isolation in an older adult population[J].J Hosp Infect,2001,49:250-254.

[5]黃小群.ICU醫(yī)護(hù)人員MRSA帶菌狀況調(diào)查研究[J].中國醫(yī)療前沿,2008,3(23):109－110.

[6]吉維民.耐甲氧西林葡萄球菌對抗菌藥物聯(lián)用體外抗菌活性的檢測[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2013,31(2):196－197.

[7]吳文娟,湯一葦.醫(yī)院感染控制中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌篩查現(xiàn)狀[J].傳染病信息,2009,22(1):54－57.

[8]潘麗娟.加強(qiáng)臨床微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量改進(jìn)[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué), 2013,31(4):351.

[9]徐曉宏,張春惠,王偉娟.耐甲氧西林金黃色葡萄菌(MRSA)的兩種檢測方法的比較[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用2010,4(3):102.

Evaluation of MRSA selective medium in detection of methicillin-resistant staphylococcus aureus from hands and nasal vestibular of the medical staffs.

Objective To analysis the detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus(MRSA)from the hands and nasal vestibular of doctors,nurses and attendants,and compare the detection effect for MRSA of two kinds of test methods.Methods A total of 678 hand specimens and 179 nasopharyngeal vestibular specimens of medical staffs were treated with two kinds of test methods for identification of MRSA.Firstly,we collected specimens with blood agar plates and then identified the strains by automatic microorganism instrument after screening.At the same time,the drug sensitivity tests with cefoxitin(30μg/)and oxacillin (1μg/)were performed by K-B disk diffusion method for identification of MRSA;meanwhile,all the specimens were directly inoculated on MRSA selective chromogenic medium to identify MRSA.At last,the effects of two test methods for identification of MRSA were compared.Results A total of 5 strains of MRSA and 44 strains of methicillin sensitive Staphylococcus aureus(MSSA) were detected in the hand specimens,also 3 strains of MRSA and 22 strains of MSSA were detected in the nasopharyngeal vestibular specimens by using the traditional method;6 strains of MRSA and 43 strains of MSSA were detected in the hand specimens,3 strains of MRSA and 22 strains of MSSA were detected in the nasopharyngeal vestibular specimens by using the rapid method. Conclusion Comparing with the traditional detection method,the total coincidence rate of the rapid method for MRSA identification was 95.9%in the hand specimens and 100%in the nasopharyngeal vestibular specimens.The detection results of two test methods for MRSA and MSSA showed no significant difference(P＞0.05).Because of the simple operation and high specificity of the rapid method,it is suitable for popularization in clinical laboratory for identification of MRSA.

Methicillin-resistant Staphylococcus aureus;Cefoxitin;Oxacillin

R446.5，Q9399.92，R378.1+1

A

1674-1129(2014)04-0392-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.04.009

CAI Huilin,SITU Ruiru.
The First People's Hospital of Haizhu District,Guangzhou 510220,China.

2014-04-15；

2014-05-20)

廣州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技立項(xiàng)項(xiàng)目(編號20131A011177)

蔡慧琳，女，34歲，醫(yī)學(xué)學(xué)士，副主任檢驗(yàn)師，主攻免疫、微生物、生化方向。