滕軍，況磊

(貴陽醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，貴州貴陽550004)

蜂膠中兩種合成降糖藥物及蜂膠質(zhì)量的快速鑒定

滕軍，況磊

(貴陽醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，貴州貴陽550004)

目的建立有效分離蜂膠中的各組分，并同時(shí)測定蜂膠中非法添加吡格列酮和羅格列酮等2種化學(xué)合成降糖藥物的方法。方法采用薄層系統(tǒng)對蜂膠進(jìn)行雙向展開、分離、顯色及刮板，提取后在紫外區(qū)掃描測定其吸收曲線；用薄層色譜法和分光光度法同時(shí)進(jìn)行定性分析。結(jié)果在選定條件下，蜂膠中的黃酮類物質(zhì)被有效分離，2種合成降糖藥物均被檢出，檢出限為2μg/mg，整個(gè)分析時(shí)間不超過2h。結(jié)論本方法操作簡單，快速準(zhǔn)確，可用于檢測添加了上述合成降糖藥物的蜂膠及蜂膠質(zhì)量的快速篩查。

薄層色譜法；紫外分光光度法；蜂膠；噻唑烷二酮；檢測

蜂膠是可以用來調(diào)節(jié)糖尿病患者身體機(jī)能的一種保健食品[1]；蜂膠組成復(fù)雜，含有大量的黃酮類、萜烯類、酚酸類及酯類等二十余類、300多種化合物；目前，對中成藥中添加合成降糖藥物的研究報(bào)道較多而對作為降糖保健食品的蜂膠則研究報(bào)道很少。蜂膠中一些成分尤其是黃酮類與合成降糖藥物性質(zhì)十分相似，不易分離，其前處理方法有浸提法、超聲浸提法和固相萃取法等，這些提取方法要么處理時(shí)間長，要么操作繁瑣，且各組分不易完全分離，對后續(xù)測定的儀器設(shè)備性能和操作人員技術(shù)要求較高；合成降糖藥物的測定方法有薄層色譜法、高效液相色譜法和液相色譜-質(zhì)譜法等[2～4]。

本研究首次將蜂膠成分分離和合成降糖藥物測定融為一體，采用兩種分析測試方法同時(shí)進(jìn)行定性分析，操作簡單，不涉及昂貴的儀器設(shè)備和耗材，提高了測定的準(zhǔn)確性，同時(shí)也縮短了分析測定時(shí)間。

黃酮類化合物被認(rèn)為是產(chǎn)生蜂膠藥效的活性成分之一，所以是判斷蜂膠質(zhì)量的指標(biāo)之一，其測定方法有分光光度法、熒光光度法、高效液相色譜法及毛細(xì)管電泳法等，這些方法或操作復(fù)雜，或運(yùn)行成本高，本實(shí)驗(yàn)方法能快速分離蜂膠中的酮類物質(zhì)并對其有效顯色進(jìn)行初步比較檢測。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 主要儀器UV-160A型紫外-可見分光光度計(jì)(SHIMADZU，日本)，CP124C型電子天平(OHAUS CORPORATION上海)。

1.1.2 試劑與耗材標(biāo)準(zhǔn)品均購自中國食品藥品檢定研究院：鹽酸吡格列酮(100%)，鹽酸羅格列酮(91.3%)，以上標(biāo)準(zhǔn)品使用時(shí)用甲醇配制成2g/L濃度的溶液儲(chǔ)存于4℃冰箱，使用不宜超過2周。羧甲基纖維素鈉、三氯甲烷、乙醚、氨水、無水乙酸(冰乙酸)、硫氰酸銨、氯化鈷等均為分析純，甲醇為高效液相色譜用試劑，硅膠G(青島海洋化工有限公司)，實(shí)驗(yàn)用水為二級水。顯色劑：將3.0g硫氰酸銨與1.0g氯化鈷溶于0.02L水即可。

1.1.3 樣品實(shí)驗(yàn)用的6種蜂膠膠囊和1種苦瓜膠囊中有兩種蜂膠膠囊購自藥店，其余來自網(wǎng)購。

1.2 方法

1.2.1 薄層色譜法取一塊以0.3%羧甲基纖維素鈉水溶液為粘合劑，活化后的硅膠G薄層板(10cm×20cm)如圖1所示，在距薄層板的兩底邊1cm且靠左邊1cm處做兩個(gè)標(biāo)記，一邊點(diǎn)鹽酸吡格列酮與鹽酸羅格列酮混標(biāo)溶液，另一邊直接點(diǎn)蜂膠3～5mg，以三氯甲烷-乙醚-甲醇-氨水-冰乙酸(11.5∶2.7∶1.3∶0.1∶0.06)為展開劑，分別相向展開9cm，揮干溶劑，再以20cm邊為底邊向上展開8.5cm，取出揮干溶劑，噴顯色劑，黃酮類物質(zhì)顯藍(lán)綠色，根據(jù)其斑塊大小可初步判斷蜂膠含量；噻唑烷二酮類藥物顯藍(lán)色斑點(diǎn)，與噻唑烷二酮標(biāo)準(zhǔn)物成鏡像對稱的蜂膠端若有藍(lán)綠色斑點(diǎn)，比較吡格列酮和羅格列酮的比移值(Rf)，即可判斷該蜂膠是否添加了吡格列酮或羅格列酮降糖藥物。

圖1 薄層展開示意圖

1.2.2 分光光度法按1.2.1方法另取一塊薄層板點(diǎn)樣，將混標(biāo)點(diǎn)換成空白蜂膠添加混合標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)樣，展開顯色后分別刮取空白硅膠、標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)和疑似藥品斑點(diǎn)于小燒杯中，加0.003～0.004L甲醇，充分提取后用濾膜(0.5μm)過濾入1cm石英比色皿中，以空白硅膠管為參比，于波長200nm～350nm掃描作吸收曲線，比較標(biāo)準(zhǔn)與疑似藥品吸收曲線即可判斷該蜂膠是否添加了吡格列酮和羅格列酮降糖藥。

2 結(jié)果

2.1 比移值吡格列酮的水平及垂直Rf值分別約為0.63、0.59，羅格列酮的水平及垂直Rf值分別約為0.69、0.66。

2.2 吸收曲線于空白蜂膠中分別加入吡格列酮和羅格列酮標(biāo)準(zhǔn)品，按1.2.2方法進(jìn)行吸收曲線測定(空白硅膠測定用溶劑作參比，藥品測定用空白硅膠作參比)，結(jié)果如圖2

圖2 空白及藥品吸收曲線

2.3 檢出限將噻唑烷二酮標(biāo)準(zhǔn)品分別加入到空白蜂膠中，按1.2.1方法進(jìn)行測定，測得蜂膠中吡格列酮、羅格列酮2種降糖藥的檢出限均為2μg/ mg。

2.4 樣品測定應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)方法對具有降糖保健功能的6個(gè)蜂膠膠囊產(chǎn)品和1個(gè)苦瓜類軟膠囊內(nèi)容物進(jìn)行分析檢測，未檢出吡格列酮和羅格列酮等2種化學(xué)合成降糖藥物；根據(jù)黃酮含量判斷，其中1個(gè)蜂膠膠囊產(chǎn)品含蜂膠微乎其微。

3 討論

蜂膠成分隨產(chǎn)地和采集季節(jié)的不同而不同[5]，其組成與蜜蜂所采集的當(dāng)?shù)貥淠z和其他植物原料有許多相似之處，所以，在分析判斷其質(zhì)量時(shí)應(yīng)采用多指標(biāo)進(jìn)行綜合評價(jià)。

作吸收曲線時(shí)，實(shí)驗(yàn)中使用的標(biāo)準(zhǔn)品的量應(yīng)盡可能與樣品中的疑似藥品含量相當(dāng)。當(dāng)藥品含量較低時(shí)，要注意參比的選用。

由于本實(shí)驗(yàn)檢測的合成降糖藥物性質(zhì)不穩(wěn)定，隨著時(shí)間的延長，各藥品的吸收曲線會(huì)發(fā)生變化(其改變規(guī)律有待進(jìn)一步研究)，因此，藥品顯色提取后應(yīng)及時(shí)與展開顯色取樣的標(biāo)準(zhǔn)品同時(shí)進(jìn)行分析測定比較；此外，隨著pH值不同，各藥品的吸收曲線會(huì)有所不同，所以標(biāo)準(zhǔn)品與樣品pH值應(yīng)保持一致。

蜂膠中有大量難分離且性質(zhì)與合成降糖藥物相似的色素，系統(tǒng)顯色后，目標(biāo)斑點(diǎn)有少量色素覆蓋，但這些色素在紫外區(qū)產(chǎn)生的吸收不干擾測定。

當(dāng)室溫變化較大時(shí)，藥品展開后Rf值略有改變，因此，隨著實(shí)驗(yàn)溫度的改變展開劑中氨水與冰乙酸比例要做微小的調(diào)整，以達(dá)到理想效果(可用標(biāo)準(zhǔn)品做預(yù)試驗(yàn))。

[1]奇峰,周威,尹美珍.蜂膠可吸收成分對胰島細(xì)胞的作用[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2013,33(17):1390-1392.

[2]朱明達(dá),馬微,陳冬東,等.液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定蜂膠保健品中的活性成分和降糖西藥[J].分析化學(xué)研究報(bào)告,2010,38(2):169-170.

[3]潘宇宏,王仕平,晏敏英,等.降糖類藥品與保健食品中鹽酸苯乙雙胍的檢測方法[J].中國藥業(yè),2008,17(16):36.

[4]Li N,Cui M,Lu X,et al.A rapid and reliable UPLC-MS/MS method for the identific ation and quantification of fourteen syntheic antidiabetic drugs in adulterated Chinese proprietary medicines and dietary supplements[J].Biomed Chromatogr,2010,24(11):1255-1261.

[5]王想想,周立東.蜂膠與其膠源植物的化學(xué)成分相關(guān)性研究綜述[J]中藥材.2007,30(4):487-492.

Detection of two synthetic antidiabetic drugs in propolis and quality inspection of propolis

Objective To establish a method which could effectively separate propolis constituents and simultaneously detect two chemical synthetic antidiabetic drugs which were added illegally in propolis,such as pioglitazone and rosiglitazone.Methods Propolis bidirectional expanding,separating,coloring and scraper were performed by thin layer system.Ultraviolet scanning was used to detect the absorption curve of the extractive.Thin layer chromatography and spectrophotometric method were simultaneously used to make a qualitative analysis.Results Under the selected conditions,the flavonoids in propolis were separated effectively.Two synthetic hypoglycemic drugs were detected,and their detection limits were 2μg/mg.The total analysis time was less than 2 hours.Conclusion The method is simple,rapid and accurate.It can be used for rapidly detecting of propolis'quality and the two kinds of synthetic hypoglycemic agents in propolis that mentioned above.

Thin layer chromatography;Uitraviolet spectrophotography;Propolis;ThiazolidInedione;Detection

R151.3

A

1674-1129(2014)04-0372-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.04.003

TENG Jun,KUANG Lei.
School of Public Health,Guiyang Medical University,Guiyang 550004,China.

2014-02-20；

2014-04-03)

為貴州省衛(wèi)生廳科研課題(G2010-18)

滕軍，出生于1964年，本科，高級實(shí)驗(yàn)師，主要研究方向?yàn)槔砘瘷z驗(yàn)。