姜一婧 任廣菊 楊安博 鄭 鑫 夏麗杰

(吉林省白山市食品藥品檢驗(yàn)所，白山 134300）

HPLC法測(cè)定五味子中五味子乙素的含量

姜一婧 任廣菊 楊安博 鄭 鑫 夏麗杰

(吉林省白山市食品藥品檢驗(yàn)所，白山 134300）

目的 采用高效液相色譜法測(cè)定五味子中五味子乙素的含量。方法 色譜柱：Diamonsil C18 5μm（4.6×250mm），流動(dòng)相：甲醇-水（72∶28），流速：0.8ml·min-1，柱溫：30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：236nm。結(jié)果 五味子在0.1106～1.106μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.9993）；平均加樣回收率為99.78%，RSD為0.16%(n=6)。結(jié)論?該方法簡(jiǎn)便易行，結(jié)果可靠，可有效地控制五味子的質(zhì)量。

五味子；高效液相色譜法；五味子乙素

五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis (Turcz.)Baill.的干燥成熟果實(shí)。習(xí)稱(chēng)“北五味子”。秋季果實(shí)成熟時(shí)采摘，曬干或蒸后曬干，除去果梗及雜質(zhì)。[1]增加五味子乙素的含量測(cè)定，簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，故本文采用高效液相色譜法測(cè)定五味子中五味子乙素的含量，能夠更有效地控制五味子的質(zhì)量。

1 儀器與試藥樣品

島津2010AHT高效液相色譜儀；五味子乙素對(duì)照品（批號(hào)：110765-200710,供含量測(cè)定用）由中國(guó)藥品生物制品檢定研究院提供，五味子樣品為各地抽樣樣品，甲醇為色譜純，水為純化水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18 5μm(250×4.6) mm；流動(dòng)相：甲醇-水（72：28）。檢測(cè)波長(zhǎng)：236nm；流速：0.8ml·min-1；柱溫：30℃。在此條件下，供試品中五味子乙素與其相鄰峰完全達(dá)到基線分離，保留時(shí)間為26min左右，理論板數(shù)按五味子乙素峰計(jì)N=14122。

2.2 對(duì)照品溶液與供試品溶液的制備 對(duì)照品溶液的制備，取五味子乙素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，搖勻，即得。

供試品溶液的制備， 取樣品粉末0.5g，置50ml量瓶中，加甲醇約30ml，超聲提取30分鐘，取出，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 試劑干擾試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、甲醇液各10μl，分別注入液相色譜儀，測(cè)得各液相色譜圖，色譜圖見(jiàn)圖1～3。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上有相應(yīng)的色譜峰，而試劑無(wú)干擾。

圖1 五味子乙素對(duì)照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 甲醇色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察 取五味子乙素對(duì)照品,精密稱(chēng)定,用甲醇配制成濃度為0.00553 mg·ml-1的對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液0.2，0.4，0.8，1，1.4，1.8，2.0 ml分別置10ml量瓶中，各加甲醇稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件分別吸取10μl注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制關(guān)系曲線，回歸方程為：Y＝4236626X+82510 r2＝0.9993。五味子乙素在0.1106～1.106μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。符合外標(biāo)法定量測(cè)定的要求。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

標(biāo)準(zhǔn)曲線曲線圖

2.5 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，依法測(cè)定，峰面積的RSD=0.64%，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，每間隔一定時(shí)間進(jìn)樣1次，依法測(cè)定，峰面積的RSD=1.16%(n=6)，結(jié)果表明供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批樣品,依法獨(dú)立提取測(cè)定6次，結(jié)果測(cè)得樣品中五味子乙素含量的RSD=1.01%(n=6)。

2.8 回收率試驗(yàn) 取已測(cè)知含量的同批樣品（含量為0.635 %，即6.35mg/g）0.25g,取6份，精密稱(chēng)定，取其中兩份分別精密加入五味子乙素對(duì)照品0.4685mg (五味子乙素： 0.0937mg/ml，精密加入5ml)，再取兩份分別精密加入五味子乙素對(duì)照品0.937mg (五味子乙素：0.0937mg/ml，精密加入10ml)，最后兩份分別精密加入五味子乙素對(duì)照品1.4055mg (五味子乙素：0.0937mg/ ml，精密加入15ml)，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1，平均回收率為99.78%，RSD=0.16%。

計(jì)算公式：

表2 ?回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測(cè)定 依法測(cè)定十批樣品，結(jié)果見(jiàn)表2。

表3 ?十批樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 樣品前處理方法曾試驗(yàn)用乙醇提取測(cè)定，結(jié)果與甲醇比較，甲醇提取含量大，故選用甲醇作為提取溶劑。

3.2 從供試品液相色譜圖看，在五味子乙素峰的前后密集小峰，筆者曾試圖通過(guò)D101大孔吸附樹(shù)脂柱或氧化鋁柱、氧化鋁加活性炭柱進(jìn)行分離，結(jié)果未見(jiàn)改善且含量降低。還曾試驗(yàn)用不同成分、不同比例的流動(dòng)相進(jìn)行分離，結(jié)果以所選系統(tǒng)為最佳，雖然相鄰峰較近，但已達(dá)到基線分離，分離度為1.8、1.5。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：61

10.3969/j.issn.1672-2779.2014.12.073

1672-2779（2014）-12-0111-02

杰 本文校對(duì)：劉 麗

2013-11-27)