段娟娟 孫建寧 方 芳 何愛(ài)先 裴文慧

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院中藥藥理系，北京，100102）

紅元顆?？寡祖?zhèn)痛作用的研究

段娟娟 孫建寧 方 芳 何愛(ài)先 裴文慧

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院中藥藥理系，北京，100102）

目的：研究紅元顆粒的抗炎鎮(zhèn)痛作用。方法：觀察其對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹、冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高、角叉菜膠致大鼠足跖腫脹、棉球誘導(dǎo)大鼠肉芽腫、冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)及小鼠熱板實(shí)驗(yàn)的抑制作用。結(jié)果：紅元顆?？梢悦黠@抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹（P＜0.05），降低冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加（P＜0.05），減輕角叉菜膠致大鼠足跖腫脹（P＜0.05），抑制棉球肉芽腫增生（P＜0.01或P＜0.05），顯著減輕熱刺激引起的小鼠疼痛（P＜0.05）；減少小鼠扭體次數(shù)（P＜0.01）。結(jié)論：紅元顆粒具有顯著的抗炎鎮(zhèn)痛作用。

紅元顆粒；抗炎；鎮(zhèn)痛

紅元顆粒是治療慢性盆腔炎的臨床經(jīng)驗(yàn)方，由紅藤、延胡索等中藥配伍組方而成，具有清熱利濕，活血化瘀，理氣止痛的功效，主要用于治療濕熱瘀結(jié)型慢性盆腔炎。慢性盆腔炎是常見(jiàn)的女性?xún)?nèi)生殖器及其周?chē)Y(jié)締組織和盆腔腹膜發(fā)生的炎性反應(yīng)，可引起不孕不育、異位妊娠和盆腔疼痛[1]。但目前未見(jiàn)紅元顆粒抗炎鎮(zhèn)痛作用的報(bào)道。本研究觀察紅元顆粒的抗炎鎮(zhèn)痛作用，為其治療慢性盆腔炎的臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物 紅元顆粒由北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥制藥系提供，每克相當(dāng)于8.93 g生藥，臨床人日用量（按生藥量）為34 g/d（批號(hào)：20121130）。婦科千金片（株洲千金藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：201203010）；醋酸地塞米松片（天津力生制藥股份有限公司，批號(hào)：1112025）；羅通定片（山西云鵬制藥有限公司，批號(hào)：A130101）；布洛芬緩釋膠囊（中美天津史克制藥有限公司，批號(hào)：12100010）。

1.2 動(dòng)物 SD雌性大鼠，體重200～220 g；ICR雌性小鼠，體重18～22 g；昆明種雌性小鼠，體重18～22 g。均為SPF級(jí)，由北京市維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證編號(hào)SCXK（京）2012-0001。

1.3 試劑 二甲苯（北京化工廠，批號(hào)：20101015）；伊文斯蘭（sigma公司）；冰醋酸（北京化工廠，批號(hào)：20110531）；角叉菜膠（sigma公司，批號(hào)：15750）；注射用青霉素鈉（華北制藥股份有限公司，批號(hào)：Y1206306）。

1.4 儀器 角膜環(huán)鉆（蘇州六六視覺(jué)科技股份有限公司）；電子分析天平（美國(guó)Ohaus公司）；UNICO2000型分光光度計(jì)（上海尤尼柯儀器有限公司）；Labofuge 400R低溫離心機(jī)（德國(guó)Heraeus公司）；YLS-7B足跖容積測(cè)量?jī)x（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站）；101FAB-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海樹(shù)立儀表有限公司）；YLS-6B智能熱板儀（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站）。

2 方法

2.1 二甲苯致小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn) 將72只ICR雌性小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為6個(gè)組：對(duì)照組，地塞米松組（2 mg/kg），婦科千金片組（1.05 g/kg），紅元顆粒大、中、小劑量組（11.33 g/kg、5.67 g/kg、2.83 g/kg）。各組ig給藥，1次/d，連續(xù)7 d。于末次給藥1 h后，右耳涂以二甲苯0.05 mL/只，左耳作對(duì)照，30 min后處死動(dòng)物，沿耳廓基線(xiàn)剪下雙耳，用直徑7 mm角膜鉆環(huán)將雙耳同部位等面積切下，稱(chēng)切下耳片質(zhì)量，計(jì)算鼠耳腫脹率。鼠耳腫脹率＝（右耳片質(zhì)量-左耳片質(zhì)量）/左耳片質(zhì)量×100%。

2.2 小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn) 將ICR雌性小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為7個(gè)組：對(duì)照組，模型組，地塞米松組（2 mg/kg），婦科千金片組（1.05 g/kg），紅元顆粒大、中、小劑量組（11.33 g/kg、5.67 g/kg、2.83 g/kg）。各組ig給藥，1次/d，連續(xù)7 d。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食12 h，末次給藥1 h后各組小鼠ip 0.6%的冰醋酸0.1 mL/10 g，空白對(duì)照組ip生理鹽水。30 min后，尾iv 1%的伊文斯蘭生理鹽水溶液0.1 mL/10 g。20 min后，小鼠脫頸椎處死，剪開(kāi)腹腔，用6 mL生理鹽水分?jǐn)?shù)次沖洗腹腔，收集沖洗液定容至10 mL。將腹腔沖洗液按3 000 r/min，離心10 min，取上清，在590 nm處測(cè)吸光度，計(jì)算毛細(xì)血管通透性的抑制率。毛細(xì)血管通透性抑制率＝（模型組腹腔沖洗液吸光度-給藥組腹腔沖洗液吸光度）/模型組腹腔沖洗液吸光度×100%。

2.3 角叉菜膠致大鼠足跖腫脹實(shí)驗(yàn) 將60只SD雌性大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為6個(gè)組：對(duì)照組，地塞米松組（1.4 mg/kg），婦科千金片組（0.735 g/kg），紅元顆粒大、中、小劑量組（7.93 g/kg、3.97 g/kg、1.98 g/kg）。各組ig給藥，1次/d，連續(xù)7 d。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食12 h，末次給藥后，測(cè)量每只大鼠右下肢足跖容積的基礎(chǔ)值，給藥1 h后，按無(wú)菌操作法從大鼠右后足掌心向踝關(guān)節(jié)方向進(jìn)針，ih 1%角叉菜膠0.1 m L/只致炎。測(cè)定致炎后30 min、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h內(nèi)的足跖容積變化。計(jì)算足跖腫脹百分率。足跖腫脹百分率＝（致炎后足跖容積-致炎前足跖容積）/致炎前足跖容積×100%。

2.4 大鼠棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn) 將60只SD雌性大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為6個(gè)組：對(duì)照組，地塞米松組（0.7 mg/kg），婦科千金片組（0.735 g/kg），紅元顆粒大、中、小劑量組（7.93 g/kg、3.97 g/kg、1.98 g/kg）。腹部脫毛，無(wú)菌操作下每只大鼠沿下腹中線(xiàn)切開(kāi)腹壁，將2粒滅菌棉球（每粒50±1 mg）分別植入兩側(cè)腹股溝皮下，縫合皮膚切口。次日開(kāi)始各組ig給藥，1次/d，連續(xù)14 d。末次給藥1 h后取出大鼠兩側(cè)腹股溝皮下棉球稱(chēng)重，于80℃烘箱中干燥24 h再次稱(chēng)重，分別記錄棉球干、濕重，減去棉球重量，即為肉芽的干、濕重，計(jì)算肉芽腫形成抑制率。抑制率＝（對(duì)照組肉芽腫重量-給藥組肉芽腫重量）/對(duì)照組肉芽腫重量×100%。

2.5 小鼠熱板實(shí)驗(yàn) 將雌性ICR小鼠置于熱板上（55℃±0.5℃），記錄自放入熱板至小鼠舔后足所需要的時(shí)間，為該鼠痛閾值，篩選痛閾為5～30 s的小鼠。按照痛閾值均等的原則分為6個(gè)組：對(duì)照組，羅通定組（60 mg/kg），婦科千金片組（1.05 g/kg），紅元顆粒大、中、小劑量組（11.33 g/kg、5.67 g/kg、2.83 g/kg）。各組ig給藥，1次/d，連續(xù)7 d。于末次給藥后30 min、1 h、2 h、3 h、4 h分別測(cè)量小鼠的痛閾值，若小鼠在60 s內(nèi)仍無(wú)痛覺(jué)反應(yīng)，取出，按60 s計(jì)算，觀察藥物的鎮(zhèn)痛作用。

2.6 小鼠冰醋酸扭體實(shí)驗(yàn) 將90只昆明種雌性小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為6個(gè)組：對(duì)照組，布洛芬組（0.1 g/kg），婦科千金片組（1.05 g/kg），紅元顆粒大、中、小劑量組（11.33 g/kg、5.67 g/kg、2.83 g/kg）。各組ig給藥，1次/d，連續(xù)7 d。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食12 h，末次給藥1 h后各組小鼠ip 0.6%的冰醋酸0.1 mL/10 g，誘導(dǎo)小鼠扭體反應(yīng)。記錄注射致痛劑后出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間和20 min內(nèi)各鼠扭體次數(shù)，觀察藥物鎮(zhèn)痛作用。

2.7 統(tǒng)計(jì)方法 運(yùn)用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)使用（±s）進(jìn)行記錄。組間比較采用Oneway-ANOVA進(jìn)行檢測(cè)。方差齊者用LSD檢驗(yàn)，不齊者用Dunnett's T3檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 紅元顆粒對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

3 結(jié)果

3.1 紅元顆粒對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 對(duì)照組小鼠在給予二甲苯致炎后，右耳明顯腫脹，腫脹率達(dá)到104.63%。與對(duì)照組相比，陽(yáng)性藥地塞米松、婦科千金片對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹均具有顯著的抑制作用（P＜0.01或P＜0.05），腫脹抑制率分別為45.30%、30.25%；紅元顆粒大、中、小劑量均可顯著抑制二甲苯引起的小鼠耳腫脹（P＜0.05），抑制率分別為34.49%、33.71%、28.44%。結(jié)果見(jiàn)表1。

表2 紅元顆粒對(duì)冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響

3.2 紅元顆粒對(duì)冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響 與對(duì)照組相比，模型組小鼠在腹腔注射冰醋酸后毛細(xì)血管通透性明顯增加，表現(xiàn)為腹腔炎性滲出液的吸光度顯著增加（P＜0.01）。與模型組相比，陽(yáng)性藥地塞米松和婦科千金片可明顯抑制冰醋酸誘導(dǎo)的毛細(xì)血管通透性增加（P＜0.01或P＜0.05），抑制率分別為32.29%、28.70%；紅元顆粒的大、中、小劑量均可降低腹腔毛細(xì)血管通透性（P＜0.05），抑制率分別為28.70%、25.56%、28.70%。結(jié)果見(jiàn)表2。

3.3 紅元顆粒對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響大鼠足跖皮下注射角叉菜膠后，鼠爪呈紅、腫、熱、痛等早期急性炎性反應(yīng)反應(yīng)，注射后3～5 h為腫脹高峰期。與對(duì)照組相比，陽(yáng)性藥地塞米松對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖炎性腫脹全程均具有顯著地抑制作用，表現(xiàn)為足跖腫脹率顯著降低（P＜0.01或P＜0.05）；陽(yáng)性藥婦科千金片在給藥后1 h、2 h、4 h、5 h、6 h可顯著抑制炎性腫脹（P＜0.01或P＜0.05）；紅元顆粒大、中劑量組給藥后均可顯著減輕致炎后2 h、4 h、6 h的炎性反應(yīng)反應(yīng)（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 紅元顆粒對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響

表4 紅元顆粒對(duì)棉球致大鼠肉芽腫形成的影響

3.4 紅元顆粒對(duì)棉球致大鼠肉芽腫形成的影響 滅菌棉球在植入大鼠兩側(cè)腹股溝皮下14 d后產(chǎn)生肉芽增生現(xiàn)象。與模型組相比，陽(yáng)性藥地塞米松和婦科千金片均可顯著抑制棉球肉芽腫形成，表現(xiàn)為肉芽的濕重、干重顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），對(duì)濕肉芽腫的抑制率分別為26.27%、11.40%，對(duì)干肉芽腫的抑制率分別為43.68%、15.26%；紅元顆粒的大、中、小劑量均可顯著抑制棉球肉芽腫的形成（P＜0.05或P＜0.01），對(duì)肉芽濕重的抑制率分別為12.61%、 11.80%、10.26%，對(duì)肉芽干重的抑制率分別為17.50%、17.11%、16.18%。結(jié)果見(jiàn)表4。

3.5 紅元顆粒對(duì)小鼠熱板法痛閾值的影響 與對(duì)照組相比，陽(yáng)性藥羅通定可以顯著提高熱致痛小鼠的痛閾值（P＜0.05），藥效可維持4 h；陽(yáng)性藥婦科千金片可緩解熱刺激導(dǎo)致的疼痛，但未出現(xiàn)顯著的抑制作用；紅元顆粒的3個(gè)劑量組均可不同程度緩解熱刺激帶來(lái)的疼痛，其中大劑量組在給藥3 h后，表現(xiàn)出顯著的鎮(zhèn)痛作用（P＜0.05），藥效達(dá)到最高峰。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 紅元顆粒對(duì)小鼠熱板法痛閾值的影響

3.6 紅元顆粒對(duì)冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 同對(duì)照組相比，陽(yáng)性藥布洛芬可顯著延長(zhǎng)冰醋酸致小鼠內(nèi)臟疼痛的痛反應(yīng)潛伏時(shí)間（P＜0.05），并減少小鼠在10 min內(nèi)及10～20 min內(nèi)的扭體次數(shù)（P＜0.01）；陽(yáng)性藥婦科千金片可顯著減少小鼠在10 min內(nèi)的扭體次數(shù)（P＜0.05）及10～20 min內(nèi)的扭體次數(shù)（P＜0.01）；紅元顆粒各個(gè)劑量組均可延長(zhǎng)潛伏時(shí)間，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，紅元顆粒的大劑量能顯著減少10 min內(nèi)及10～20 min內(nèi)的扭體次數(shù)（P＜0.01），中劑量能顯著減少小鼠在10～20 min的扭體次數(shù)（P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 紅元顆粒對(duì)冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響

4 討論

炎性反應(yīng)是具有血管系統(tǒng)的活體組織對(duì)局部損傷的防御反應(yīng)，可將其病理過(guò)程概括分為早、中、晚3期，早期主要表現(xiàn)為毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性增強(qiáng)、滲出和水腫；中期主要是白細(xì)胞向炎灶聚集；晚期以炎灶屏障形成和組織增生為特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)采用各種急、慢性炎性反應(yīng)模型觀察紅元顆粒的抗炎作用。二甲苯涂于小鼠耳廓，引起局部組織損傷，炎性遞質(zhì)釋放，如組胺、緩激肽和纖維蛋白溶解酶等，使得局部毛細(xì)血管通透性增加，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，造成耳部急性滲出性炎性水腫。尾靜脈注射的染料伊文斯蘭可與血漿蛋白結(jié)合，當(dāng)腹腔注射冰醋酸誘導(dǎo)毛細(xì)血管通透性增高時(shí)，在一定范圍內(nèi)，染料的滲出量可反映毛細(xì)血管滲出的血漿蛋白量，從而指示毛細(xì)血管的通透性。大鼠足跖注射角叉菜膠，造成致炎局部白細(xì)胞浸潤(rùn)，引發(fā)PGE2合成增加以及補(bǔ)體系統(tǒng)的激活，可模擬炎性反應(yīng)腫脹的病理變化。棉球埋入大鼠局部皮下后，病灶處主要有T與B淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，并釋放多種炎性反應(yīng)遞質(zhì)，同時(shí)毛細(xì)血管、淋巴管以及成纖維細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞增殖，可產(chǎn)生與臨床某些炎性反應(yīng)后期病理變化相似的肉芽增生，屬于慢性炎性反應(yīng)模型[2]。

本研究結(jié)果顯示，紅元顆粒可以明顯抑制急性期毛細(xì)血管擴(kuò)張及滲出、炎性反應(yīng)和中期炎性水腫、慢性肉芽腫，表明其具有明顯的抗炎作用。研究表明，方中紅藤具有很強(qiáng)的抗炎、免疫、抑菌、活血等生物活性[3]，臨床上用于治療慢性盆腔炎，取得很好的療效[4-5]。根據(jù)各種模型的作用機(jī)制，推測(cè)其抗炎作用機(jī)制可能與抑制組胺、緩激肽、纖維蛋白溶解酶、PGE2合成與釋放，抑制白細(xì)胞游走，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能有關(guān)，也可能依賴(lài)于垂體-腎上腺系統(tǒng)，還有待進(jìn)一步研究。

熱板法是將小鼠放置于一定溫度熱板上，通過(guò)足部溫度感受器感受熱刺激，疼痛信息經(jīng)軀體神經(jīng)傳入，在高位中樞參與下完成軀體縮爪反應(yīng)的中樞疼痛模型[6]。扭體法將刺激性化學(xué)物質(zhì)冰醋酸注入小鼠腹腔內(nèi)，刺激臟層和壁層腹膜，產(chǎn)生大量的炎性因子，如5-HT、組胺、緩激肽、PGE等，刺激與非甾體抗炎藥敏感的痛覺(jué)神經(jīng)，是一種非選擇性外周疼痛模型[7]。紅元顆粒可以明顯減輕小鼠熱刺激引起的疼痛，顯示其可能有中樞鎮(zhèn)痛的作用。紅元顆粒組方中所含延胡索具有活血化瘀，行氣止痛的功效。有文獻(xiàn)證實(shí)延胡索中的延胡索乙素為中樞多巴胺受體阻滯劑，可通過(guò)抑制中腦網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和下丘腦的誘發(fā)電位，減少交感神經(jīng)節(jié)后末梢釋放應(yīng)激性物質(zhì)，產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用[8-9]，據(jù)此，紅元顆粒的中樞鎮(zhèn)痛作用可能與此有關(guān)。此外，紅元顆?？娠@著減少醋酸引起的扭體次數(shù)，提示其具有外周鎮(zhèn)痛作用，在抗炎實(shí)驗(yàn)中，紅元顆粒對(duì)冰醋酸引起的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加有顯著的抑制作用，表明其外周鎮(zhèn)痛作用可能與降低毛細(xì)血管通透性，減少炎性反應(yīng)遞質(zhì)釋放有關(guān)。

綜上所述，紅元顆粒具有良好的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，與婦科千金片的抗炎、鎮(zhèn)痛作用差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但其確切的作用機(jī)制還需深入研究。

[1]曹澤毅.婦產(chǎn)科學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：249-252.

[2]金河奎，朱海波，蔡英姬，等.復(fù)方樟丹制劑抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2002，9（1）：9-10.

[3]馬瑞麗，于小鳳，徐秀泉，等.大血藤的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)野生植物資源，2012，31（6）：1-5.

[4]徐文崢，江偉華.紅藤湯中藥配方顆粒治療慢性盆腔炎的臨床觀察[J].中國(guó)中藥雜志，2011，36（10）：1386-1387.

[5]史楊，曹陽(yáng)，趙莉，等.紅藤在婦科疾病中的應(yīng)用[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2012，40（2）：109-111.

[6]許蓬娟，花春艷，艾洪濱，等.石榴皮水提物的鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)研究[J].生物醫(yī)學(xué)工程研究，2009，28（4）：263-266.

[7]張文娟，李茂星，張泉龍，等.梔子苷的快速提取分離及其鎮(zhèn)痛抗炎作用研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（21）：170-174.

[8]Hu JY，Jin GZ.SuPrasPinal D2 recePtor involved in an-tinocice Ption induced by 1-tetrahydro Palmatine[J].Acta Pharmacol Sin，1999，20（8）：715.

[9]李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006：241-247，764-770.

（2014-09-22收稿 責(zé)任編輯：曹柏）

Study on Anti-inflammatory and Analgesic Effects of Hongyuan Granule

Duan Juanjuan，Sun Jianning，F(xiàn)ang Fang，He Aixian，PeiWenhui
（Department of Traditional Chinese Medicine Pharmacology，School of Chinese Pharmacy，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China）

Objective：To study anti-inflammatory and analgesic effects of Hongyuan granule.Methods：The inhibitory effects were studied by observing xylene-induced swelling ear inm ice，acetic acid-induced increase of abdominal capillary permeability inmice，carrageenin-induced paw edema and cotton ball-induced proliferation of granuloma in rats，hot-induced pain and acetic acid-induced writhing inmice.Results：Hongyuan granule significantly reduced swelling ear inmice（P＜0.05），decreased abdominal capillary permeability inmice（P＜0.05），evidently relieved paw edema in rats（P＜0.05），and remarkably inhibited proliferation of granuloma in rats（P＜0.01 or P＜0.05），notably alleviated pain induced by hot plate（P＜0.05），as well as obviously reduced the writhing times in mice（P＜0.05）.Conclusion：Hongyuan granule has obvious anti-inflammatory and analgesic effects.

Hongyuan granule；Anti-inflammatory；Analgesic

R285.6

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.04.024

北京中醫(yī)藥大學(xué)科研創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)資助項(xiàng)目（編號(hào)：2011-CXTD-12）

方芳，副教授，從事中藥藥理研究，E-mail：fangf1166＠126.com