金蘭蘭

金銀花中綠原酸和木犀草苷的薄層色譜鑒別方法分析

金蘭蘭

目的探討金銀花中綠原酸和木犀草苷的薄層色譜（TLC）鑒別方法。方法根據(jù)《中國(guó)藥典》TLC法，配置供試品樣品，選擇合適展開(kāi)劑，并分析其顯色方法。結(jié)果用水作溶劑經(jīng)熱回流提取后配置試驗(yàn)樣品，乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（7.0:3.0:1.0:1.2）作展開(kāi)劑，分別噴上5%三氯化鋁乙醇溶液，經(jīng)紫外光燈（365nm）照射鑒別木犀草苷。噴1%三氯化鐵試液與1%鐵氰化鉀試液（1:1）混合溶液的上清液，使其顯色觀察綠原酸。結(jié)論應(yīng)用可行性薄層色譜鑒別法，具有較高重現(xiàn)性好，對(duì)金銀花中綠原酸和木犀草苷予以有效鑒定。

金銀花；木犀草苷；綠原酸；薄層色譜法

金銀花屬于忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或帶初開(kāi)的花，也被稱為銀花、金花、忍冬花、金藤花等。味甘，性寒，能清熱解毒、疏散風(fēng)熱，臨床常在肺炎、急性痢疾、宮頸糜爛等疾病治療中得到應(yīng)用。金銀花含有揮發(fā)油、黃酮類、有機(jī)酸等物質(zhì)，主要活性成分有綠原酸、木犀草苷。臨床中對(duì)綠原酸和木犀草苷進(jìn)行鑒定時(shí)所采用的方法主要為高效液相色譜（HPLC），此方法工作量加大，色譜峰分開(kāi)不明顯，分離度差。本文應(yīng)用薄層色譜法同時(shí)鑒定綠原酸和木犀草苷，效果明顯，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器與方法

1.1 儀器與藥物 應(yīng)用瑞士 Precisa電子天平、超聲波清洗器、ZF-Ⅰ型三用紫外分析儀；金銀花規(guī)格1kg/包，選取合適綠原酸和木犀草苷對(duì)照品；三氯化鐵、鐵氰化鉀、甲苯、乙酸乙酯、甲酸、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿屬于分析純。

1.2 方法 依據(jù)《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB試驗(yàn)TLC法，對(duì)供試品樣品的制備、展開(kāi)劑選擇、顯色方法進(jìn)行觀察。

1.2.1 制備對(duì)照品溶液 精密稱取綠原酸對(duì)照品以甲醇制備1mg/mL對(duì)照品備用溶液。稱取木犀草苷對(duì)照品以70%乙醇制備含木犀草苷40μg/mL的對(duì)照品備用溶液。

1.2.2 供試品配置 應(yīng)用回流法和超聲提取法分別進(jìn)行對(duì)比。

1.2.3 回流法 合理應(yīng)用金銀花藥材，放置于30℃烘箱進(jìn)行2h干燥，經(jīng)粉碎后過(guò)2號(hào)篩。稱量取2.0g粉末分別放入 50mL水、70%乙醇、50%甲醇、乙酸乙酯溶劑進(jìn)行1h加熱回流后提取、過(guò)濾。水提取液需加入鹽酸配置為酸性，濾過(guò)，應(yīng)用乙酸乙酯在振搖后進(jìn)行3次萃取，每次應(yīng)用25mL，混合乙酸乙酯溶液，蒸干，將2mL甲醇加入到殘?jiān)鼉?nèi)，溶解，配置成供試品溶液。其它類型溶劑提取液可將其蒸干，殘?jiān)尤爰状?mL后溶解，成為供試品溶液。依據(jù)《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B試驗(yàn)TLC法，取出綠原酸對(duì)照品、木犀草苷對(duì)照品和供試品溶液2、4、1μL，分別放置于硅膠G薄層板面上。

1.2.4 超聲法[1]選用合適金銀花藥材，將其放置于30℃烘箱內(nèi)持續(xù)干燥2h，將其粉碎通過(guò)2號(hào)篩。稱出2.0g粉末分別置入50mL水、70%乙醇、50%甲醇、乙酸乙酯溶劑超聲提取 40min，其余步驟與回流法相同。

1.2.5 展開(kāi)劑的選擇 根據(jù)臨床應(yīng)用，分別選取乙酸乙酯-丁酮-甲酸（10:7:1）、甲苯（水飽和）-乙酸乙酯-甲酸（5.0:4.5:0.5）、甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（6:3:1:3）上層溶液、乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（7.0:3.0:1.0:1.2）、氯仿-甲醇-甲酸（4.0:1.0:0.5）。

1.2.6 顯色方法選擇 噴上5%三氯化鋁乙醇溶液，經(jīng)紫外光燈（365nm）照射，分析所呈現(xiàn)熒光斑點(diǎn)，噴上l%三氯化鐵試液與1%鐵氰化鉀試液（1:1）混合液上清液，顯色，應(yīng)用數(shù)碼相機(jī)進(jìn)行拍照。

2 結(jié)果

應(yīng)用薄層色譜法對(duì)鑒定金銀花中所含綠原酸和木犀草苷進(jìn)行鑒定，在配置供試品溶液時(shí)將水作溶劑，加熱回流持續(xù)1h、加入鹽酸使之呈現(xiàn)酸性，應(yīng)用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，效果明顯；展開(kāi)劑應(yīng)用乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（7.0:3.0:1.0:1.2）具有較好效果；顯色劑應(yīng)用 5%的三氯化鋁乙醇溶液，在紫外光燈（365nm）下對(duì)木犀草苷予以鑒定。將硅膠板噴以1%三氯化鐵試液和1%鐵氰化鉀試液（1:1）混合溶液上清液，使其顯色，對(duì)綠原酸予以鑒定。供試品溶液色譜中，與對(duì)照品溶液色譜對(duì)應(yīng)處顯現(xiàn)同種顏色斑點(diǎn)。

3 討論

分析忍冬的化學(xué)成分可知，其有效成分主要是木犀草苷，其它種類含此成分的很少，而且大部分主要含有綠原酸，成分具有明顯差異。金銀花與山銀花均有綠原酸成分，但金銀花含有木犀草苷相對(duì)要高，而山銀花較少含有。目前，忍冬基本是金銀花的唯一植物來(lái)源，其余種類通常均被并入山銀花中?！吨袊?guó)藥典》記載，綠原酸和木犀草苷是金銀花的重要標(biāo)志性成分，是否存在木犀草苷成分是正品金銀花和其它山銀花進(jìn)行有效區(qū)分的重要化學(xué)指標(biāo)，而且是否存在木犀草苷成分一般也決定了正品金銀花在治療效果上與山銀花等同科植物具有較大的差異性。所以，尋求一種有效方法能同時(shí)鑒定金銀花中含有綠原酸和木犀草苷成分顯得尤為重要[2]。

經(jīng)本文研究發(fā)現(xiàn)，乙酸乙酯萃取后點(diǎn)樣的提取方法效果最為明顯，超聲法和回流法均可將金銀花中的綠原酸和木犀草苷快速提取，但應(yīng)用70%乙醇、50%甲醇、乙酸乙酯進(jìn)行提取后所配置的樣品具有較多雜質(zhì)，無(wú)法得到準(zhǔn)確的樣品成點(diǎn)性，而經(jīng)乙酸乙酯萃取可明顯排除大量雜質(zhì)，降低雜質(zhì)影響率。

以不同展開(kāi)劑將木犀草苷和綠原酸進(jìn)行分離過(guò)程中，并無(wú)法使分離效果達(dá)到良好狀態(tài)，究其原因一般認(rèn)為是木犀草苷和綠原酸并無(wú)較大極性區(qū)別。所以本文選取兩種專屬性較強(qiáng)的顯色法對(duì)木犀草苷和綠原酸進(jìn)行鑒定，金銀花中綠原酸與木犀草苷含量具有較為明顯的差異性，點(diǎn)樣量大時(shí)，木犀草苷斑點(diǎn)易被綠原酸斑點(diǎn)所掩蓋；點(diǎn)樣量小時(shí)，木犀草苷無(wú)法得到足夠含量，導(dǎo)致斑點(diǎn)不明顯[3]。

總之，應(yīng)用合適的薄層色譜方法能有效鑒別金銀花中綠原酸和木犀草苷，應(yīng)用價(jià)值高。

[1] 陳秋竹,林瑞超,王鋼力,等.金銀花提取物化學(xué)成分研究[J].中藥材,2010,33(6):920-922.

[2] 中華人民共和國(guó)國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:21,152.

[3] 王永慧,孫榮進(jìn),葉方,等.金銀花中綠原酸和木犀草苷的薄層色譜鑒別方法研究[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2012,9(11):136-137.

R282.5

A

1673-5846(2014)02-0022-02

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