于首元 于兆安

（河南省南陽市張仲景醫(yī)院 南陽 473000）

脈管康復(fù)片心腦血管作用的實(shí)驗(yàn)研究

于首元 于兆安

（河南省南陽市張仲景醫(yī)院 南陽 473000）

目的：觀察脈管康復(fù)片對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心腦血管的藥理效應(yīng)。方法：應(yīng)用脈管康復(fù)片分別對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，與華佗再造丸相對(duì)照，觀察脈管康復(fù)片對(duì)大鼠心肌壞死的保護(hù)作用、對(duì)麻醉大鼠缺血再灌注心律失常和脂質(zhì)過氧化物的保護(hù)作用、對(duì)絲裂霉素細(xì)胞中毒性心肌損傷的保護(hù)作用、對(duì)大鼠頸動(dòng)脈血栓形成的抑制作用和對(duì)家兔血脂及動(dòng)脈粥樣斑塊形成的影響。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，脈管康復(fù)片具以下作用：（1）明顯增加冠狀動(dòng)脈血流量，能明顯地縮小心肌梗死范圍，保護(hù)異丙腎上腺與所致大鼠心肌壞死的作用。（2）保持心肌細(xì)胞氧化和抗氧化平衡，阻斷脂質(zhì)過氧化連鎖反應(yīng)，降低細(xì)胞內(nèi)Ca2+超負(fù)荷，減少CK-MB酶從心肌細(xì)胞中漏出。（3）對(duì)心肌超微結(jié)構(gòu)損傷，特別是肌原纖維及細(xì)胞質(zhì)損傷有明顯的保護(hù)作用。（4）對(duì)大鼠頸動(dòng)脈血栓有抑制作用，有促進(jìn)表皮細(xì)胞合成并釋放PGI2，而不影響TXA2生物合成的纖溶作用。（5）能明顯抑制家兔血清膽固醇升高作用，對(duì)動(dòng)脈粥樣斑形成有抑制和消除作用，抗高脂血癥，不增加主動(dòng)脈、肝臟及腎上腺組織內(nèi)的脂質(zhì)含量。結(jié)論：脈管康復(fù)片對(duì)心腦血管具有良好的保護(hù)作用，可作為心腦血管疾病治療的一線藥物應(yīng)用。

脈管康復(fù)片；心肌細(xì)胞；脂質(zhì)過氧化；纖溶；動(dòng)脈粥樣硬化；腦心同治

心腦血管疾病系現(xiàn)代難治病，近日有學(xué)者提出當(dāng)屬?gòu)?fù)雜性疾病。動(dòng)脈粥樣硬化是全身性病變，亦為心與腦缺血性病變共同的發(fā)病基礎(chǔ)，其病理機(jī)制無論模式生物與人體實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，皆認(rèn)為與脂質(zhì)代謝障礙、微炎癥、自家免疫及氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)，是由多因素、多變量、多環(huán)節(jié)病理過程而形成。為此，發(fā)掘中醫(yī)藥的防治干預(yù)措施則成為備受世人矚目的課題。我院自2012年6月～2013年3月，以腦心同治為原則，對(duì)脈管康復(fù)片心腦血管作用的藥理作用進(jìn)行了藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，并以華佗再造丸為陽性對(duì)照藥?，F(xiàn)報(bào)告如下：

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物 Wistar大鼠：體重200～300 g，雌雄各半；NIH系小鼠，體重25～30 g，雌雄各半：均購(gòu)自鄭州大學(xué)動(dòng)物場(chǎng)。家兔：體重2.5～3.0 kg，雌雄各半，購(gòu)自當(dāng)?shù)丶彝蔑暳蠌S。

1.2 藥物 脈管康復(fù)片：天津同仁堂股份有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字Z12020023，規(guī)格：0.6 g/片。華佗再造丸：廣州奇星藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字Z44020748，規(guī)格：8 g/袋。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 對(duì)大鼠心肌壞死的保護(hù)作用

2.1.1 實(shí)驗(yàn)方法 取Wistar大鼠18只，隨機(jī)分為脈管康復(fù)片組、華佗再造丸組和對(duì)照組三組，每組6只。每天皮下注射異丙腎上腺素（ISOP）8 mg/kg，連續(xù)給藥2 d。每次注射異丙腎上腺素（ISOP）前30 min分別給予脈管康復(fù)片0.2 g/kg、華佗再造丸1.0 g/kg或等量生理鹽水灌胃。用ISOP前后20 min及以后每隔5 min記錄心電圖Ⅱ?qū)б淮危?8 h后活殺取心肌作病理切片。以48 h內(nèi)ΣST移位程度、新的病理性Q波、T波倒置例數(shù)、病理變化為評(píng)價(jià)藥物療效的依據(jù)。病理切片在第二次皮下注射ISOP后24 h，剖取心臟，10%甲醛固定，然后從心房、冠狀溝、心尖部四部分取樣，石蠟包埋，用HE染色，鏡下觀察。根據(jù)壞死面積、部位程度分為I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V級(jí)。

2.1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)照組ΣST移位程度為27.2 mV，病理性Q波發(fā)生率占56%，T波倒置例數(shù)占81%；脈管康復(fù)片組ΣST段移位程度為6.3 mV，病理性Q波發(fā)生率占12%，T波倒置數(shù)占14%；華佗再造丸組ΣST移位程度為7.8 mV，病理性Q波發(fā)生率為35%，T波倒置例數(shù)占54%。脈管康復(fù)片、華佗再造丸組48 h內(nèi)ΣST移位程度、病理性Q波發(fā)生率、T波倒置例數(shù)均明顯低于對(duì)照組。ISOP能引起大鼠典型心肌壞死性病變，48 h可見到纖維母細(xì)胞增生修復(fù)。脈管康復(fù)片、華佗再造丸組均能減輕心肌病變，表現(xiàn)為病灶減輕，壞死范圍減少，心肌病變減輕，其中脈管康復(fù)片組的壞死程度最輕。脈管康復(fù)片同華佗再造丸比較有明顯增加冠脈流量作用，降壓作用較華佗再造丸組輕，并且有明顯地縮小心肌梗死范圍、保護(hù)異丙腎上腺素所致大鼠心肌壞死的作用。

2.2 對(duì)麻醉大鼠缺血再灌注脂質(zhì)過氧化的保護(hù)作用

2.2.1 實(shí)驗(yàn)一 健康雄性大鼠50只，隨機(jī)分成5組，每組10只。在麻醉下開胸，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈主支，5 min后使冠脈再通；三組于再通前1 min分別給予脈管康復(fù)片（劑量同前）、華佗再造丸（劑量同前）或生理鹽水（NS）灌胃，另兩組為假手術(shù)組和單純結(jié)扎冠狀動(dòng)脈組。觀察心律失常發(fā)生率，并測(cè)定心肌丙二醛含量。結(jié)果在缺血期，約一半大鼠發(fā)生心律失常，但缺血心肌丙二醛含量升高不明顯，假手術(shù)組（2.68±0.93）nmol/mgpr，單純結(jié)扎組（2.84± 0.88）nmol/mgpr，兩組比較，P＞0.05。再灌注后，所有動(dòng)物發(fā)生心律失常，其中絕大部分為再灌后新產(chǎn)生或加重者。與此同時(shí)，再灌注心肌丙二醛含量從（2.84±0.88）（單純?cè)诮M）急劇升至（3.96±0.75）nmol/mgpr（NS組），兩組比較，P＜0.01。脈管康復(fù)片組再灌注心律失常發(fā)生率和再灌心肌丙二醛含量均較NS組顯著降低。SOD也有類似的作用。提示脈管康復(fù)片抗再灌注心律失常作用可能與降低心肌脂質(zhì)過氧化有關(guān)。

2.2.2 實(shí)驗(yàn)二 健康雄性大鼠20只，隨機(jī)分成兩組，每組10只。兩組大鼠于結(jié)扎冠脈左室支30 min后再灌60 min，分別以0.8 mL/min的速度經(jīng)腹靜脈勻速輸入NS或脈管康復(fù)片灌胃0.2 g/（kg·d）。結(jié)果NS組再灌心肌組織中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活力為（35.77±4.38）U/mgProt、（24.64±46.37）U/mgProt；脈管康復(fù)片組為 （69.38±5.81） U/mgProt、（61.83±6.37）U/mgProt：兩組比較，P＜0.01。NS組再灌心肌組織中丙二醛（MDA）及細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量為（4.18±0.46）nmol/mgprot、（8.35±1.83）mg/L；脈管康復(fù)片組為（2.26±0.68）nmol/mgprot、（3.94±1.41）mg/L：兩組比較，P＜0.01。NS組心肌再灌注后血清磷酸肌酸激酶同功酶（CK-MB）含量為（2 634±696.53）U/L，脈管康復(fù)片組為（1 008.54±276.95）U/L：兩組相比，P＜0.01。以上結(jié)果提示：脈管康復(fù)片具有保持心肌細(xì)胞氧化和抗氧化平衡、阻斷脂質(zhì)過氧化的鏈鎖反應(yīng)、降低細(xì)胞內(nèi)Ca2+超負(fù)荷、減少CK-MB酶從心肌細(xì)胞中漏出、保護(hù)心肌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整性等功能，從而有效地防治及減輕心臟再灌注綜合征。

2.3 對(duì)絲裂毒素C（MMC）中毒性心肌損傷的保護(hù)作用

2.3.1 實(shí)驗(yàn)一 小鼠30只，隨機(jī)分為三組，各組10只，即生理鹽水對(duì)照組、MMC組（5 mg/kg×1 d）、脈管康復(fù)片組（MMC 5 mg/kg×1 d）。觀察10 d后將動(dòng)物處死，取心臟制備電子顯微鏡標(biāo)本，JEM-100CX電子顯微鏡觀察。結(jié)果MMC組小鼠10 d內(nèi)死亡3只，脈管康復(fù)片組無死亡。電子顯微鏡觀察結(jié)果顯示，MMC組小鼠心肌超微結(jié)構(gòu)有明顯改變，肌微絲嚴(yán)重?fù)p傷，大量肌原纖維斷裂、溶解、均質(zhì)化，線粒體腫脹，糖原顆粒明顯減少，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，細(xì)胞核皺縮，染色質(zhì)含量減少，周邊聚集。脈管康復(fù)片組肌微絲完整，排列整齊，線粒體有輕度腫脹，細(xì)胞核完整，染色質(zhì)分布均勻。結(jié)果表明：脈管康復(fù)片對(duì)MMC造成小鼠心肌超微結(jié)構(gòu)的改變，特別是肌原纖維及細(xì)胞核的損傷有明顯保護(hù)作用。

2.3.2 實(shí)驗(yàn)二 Wistar乳鼠心肌細(xì)胞接種于試管，共30管，分三組，每組10管，培養(yǎng)2 d后，加藥，作用24 h，用比色法測(cè)定各管心肌細(xì)胞釋放至培養(yǎng)基中的乳酸脫氫酶（LDH）含量。結(jié)果正常對(duì)照組LDH為（33.78±6.7）U/L，MMC組（5 μg/mL）為（57.8± 3.6）U/L，兩組比較有顯著差異，P＜0.05。脈管康復(fù)片可對(duì)抗MMC造成的心肌細(xì)胞損傷，LDH為（38.4± 7.9）U/L，較MMC組有明顯降低（P＜0.05），可維護(hù)細(xì)胞膜的完整性，減輕損傷，減少LDH漏出。表明脈管康復(fù)片對(duì)MMC造成的動(dòng)物及體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞中毒性損傷均有明顯保護(hù)作用。

2.4 對(duì)大鼠頸動(dòng)脈血栓形成的抑制作用 健康大鼠40只，用3%異戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，分離一側(cè)頸動(dòng)脈，分組及給藥情況見表1。均于給藥后15 min以電刺激法（電流1.5 mA，刺激時(shí)間7 min）刺激頸動(dòng)脈，記錄頸動(dòng)脈血流阻塞時(shí)間（occlusiontime，OT）并計(jì)算延長(zhǎng)百分率。OT延長(zhǎng)（%）=（給藥組OT－對(duì)照組OT）/對(duì)照組OT× 100%。結(jié)果表明脈管康復(fù)片組OT明顯延長(zhǎng)（P＜0.05或P＜0.01），延長(zhǎng)百分率與劑量經(jīng)直線回歸呈相關(guān)性（r=0.95）。見表1。試驗(yàn)標(biāo)本進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢查證實(shí)，各組大鼠頸動(dòng)脈被刺激部位血管內(nèi)膜損傷、壞死、脫落，內(nèi)膜下組織腫脹、溶解，動(dòng)脈腔內(nèi)有大小不同的血栓形成。動(dòng)脈血栓形成與動(dòng)脈內(nèi)膜損傷、血小板及凝血系統(tǒng)被激活有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)表明脈管康復(fù)片可明顯延長(zhǎng)由電刺激誘導(dǎo)的大鼠頸動(dòng)脈血栓形成的時(shí)間。血栓的形成與溶解受多種因素尤其是抗凝血系統(tǒng)功能、血小板聚集性、PGI2和TXA2體內(nèi)含量之間關(guān)系等影響，其中PGI2和TXA2之間活性保持平衡對(duì)控制機(jī)體正常的凝血和抗凝機(jī)制及血小板和血管功能是極為重要的。當(dāng)血小板內(nèi)TXA2生成過多時(shí)，促血小板聚集，縮血管，易致血栓形成。當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的PGI2生成過多時(shí)，抑制血小板聚集，擴(kuò)血管，抗血栓形成。試驗(yàn)結(jié)果表明：脈管康復(fù)片促進(jìn)纖溶作用，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞合成并釋放PGI2而不影響TXA2的生物合成，可能是其抗電刺激誘導(dǎo)的大鼠頸動(dòng)脈血栓形成作用機(jī)制之一。

表1 脈管康復(fù)片對(duì)電刺激大鼠頸動(dòng)脈血栓形成的影響 (X±S)min

2.5 對(duì)家兔血脂及動(dòng)脈粥樣斑塊形成的影響 選取健康家兔72只，其中造型組24只，空白對(duì)照組16只，給藥組32只，按不同給藥劑量分組觀察。給藥組及造型組均喂飼豬油及膽固醇，造型5周及9周后給藥，同時(shí)繼續(xù)喂飼脂質(zhì)飼料進(jìn)行觀察，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。

2.5.1 明顯抑制血清膽固醇含量升高作用 給藥0.1 g/kg組：給藥5周血清膽固醇含量上升率為（21.64±0.03）%，而造型組同時(shí)期上升率為（27.00±0.03）%（P＜0.01）。給藥0.2 g/kg組：給藥10周血清膽固醇含量上升率為（52.24±0.05）%，而造型組同時(shí)期上升率為（83.02±0.03）%（P＜0.001）。給藥0.3 g/kg組：給藥6周，血清膽固醇含量上升率為（88.64±0.05）%，而同時(shí)期造型組上升率為（258.37±0.68）%（P＜0.001）。結(jié)果說明隨脈管康復(fù)片劑量的增加，抑制血清膽固醇含量升高作用更明顯。

2.5.2 減少家兔主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成作用測(cè)家兔主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的總面積及家兔主動(dòng)脈內(nèi)膜面積，求出每只家兔斑塊所占面積的百分率。給藥0.1 g/kg組為（12.98±0.79）%，而造型組為（14.81±0.77）%；0.2 g/kg組為（6.8±0.97）%，而造型組為（9.64±0.89）%：說明隨脈管康復(fù)片劑量增加，抑制斑塊出現(xiàn)作用更加顯著。

2.5.3 主動(dòng)脈壁無斑塊區(qū)、肝臟、腎上腺膽固醇含量測(cè)定（組織重）（1）主動(dòng)脈壁無斑塊區(qū)：給藥0.1 g/kg組膽固醇含量均值為3.46 mg/g，造型組為3.85 mg/g；給藥0.2 g/kg組為4.06 mg/g，而造型組為4.50 mg/g；空白組為3.52 mg/g。（2）腎上腺：給藥0.1 g/kg組均值為14.92 ng/g，造型組為19.62 mg/g；給藥0.2 g/kg組為17.54 mg/g，而造型組為18.26 mg/g；空白組為10.47 mg/g。（3）肝臟：給藥0.1 g/kg組均值為6.51 mg/g，造型組為8.61 mg/g；給藥0.2 g/kg組為7.86 mg/g，造型組為9.12 mg/g；空白組為5.74 mg/g。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在主動(dòng)脈無斑塊區(qū)、肝臟、腎上腺組織中給藥組的膽固醇含量低于造型組，尤其對(duì)腎上腺作用較為明顯，表明脈管康復(fù)片具有明顯的抗高脂血癥及抗動(dòng)脈粥樣硬化作用，并在抗高脂血癥的同時(shí)，不增加主動(dòng)脈、肝臟及腎上腺組織內(nèi)脂質(zhì)含量。

3 討論

脈管康復(fù)片是由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院一百多名專家研究而成，由丹參、雞血藤、郁金、乳香、沒藥組成，具有活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)功效，適用于脈管不通引起的脈管炎、硬皮病、動(dòng)脈硬化性下肢血管閉塞癥及腦血栓后遺癥半身不遂、肢體麻木、口眼歪斜、舌強(qiáng)語蹇及胸痹痛、胸悶心悸、氣短等。實(shí)驗(yàn)證明，脈管康復(fù)片對(duì)“血瘀”模型的全血高切、低切黏度、還原黏度、血小板粘附率均有顯著降低作用；可抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集；可明顯抑制血栓形成，有一定的量效關(guān)系；可明顯增加腦血流量、降低腦血管阻力、延長(zhǎng)凝血時(shí)間；可增加犬心肌供血，改善心功能；降低血清LDH和CK活性，縮小心肌梗死范圍：提示脈管康復(fù)片具有抗急性心肌缺血作用。

本研究觀察結(jié)果證明，脈管康復(fù)片有以下作用：（1）能明顯增加冠狀血流量，顯著縮小心肌梗死范圍，有保護(hù)異丙腎上腺素所致大鼠心肌壞死作用。（2）保持心肌細(xì)胞氧化和抗氧化平衡，阻斷脂質(zhì)過氧化連鎖反應(yīng)，降低細(xì)胞內(nèi)Ca2+超負(fù)荷，減少CK-MB酶從心肌細(xì)胞中漏出。（3）對(duì)心肌超微結(jié)構(gòu)損傷，特別是肌原纖維及細(xì)胞質(zhì)損傷有明顯的保護(hù)作用。（4）對(duì)大鼠頸動(dòng)脈血栓有抑制作用，有促進(jìn)表皮細(xì)胞合成并釋放PGI2，而不影響TXA2生物合成的纖溶作用。（5）能明顯抑制家兔血清膽固醇升高作用，對(duì)動(dòng)脈粥樣斑的形成有抑制和消除作用，抗高脂血癥，不增加主動(dòng)脈、肝臟及腎上腺組織內(nèi)的脂質(zhì)含量。可作為心腦血管疾病治療的一線藥物應(yīng)用。

Experimental Study of Maiguan Kangfu Tablets’Effect on Cardiovascular and Cerebrovascular

YU Shou-yuan,YU Zhao-an
(Zhangzhongjing Hospital of Nanyang City,Nanyang,Henan 473000)

Objective:To observe the pharmacological effect of Maiguan Kangfu tablets on experimental animals’cardiovascular and cerebrovascular diseases.Methods:Maiguan Kangfu Tablets were studied on the experimental animal model,in contrast with Huatuo Zaizao pills,to observe the protective effect of the Maiguan Kangfu Tablets on myocardial necrosis in rats,the protective effects of anesthetized rats in ischemia reinfusion arrhythmia and lipid peroxide,protective effects of mitomycin cells induced myocardial injury,the inhibitory effects of rat carotid artery thrombosis and effect of blood lipids and atherogenesis in rabbits.Results:The experimental results show that,Maiguan Kangfu Tablets possess the following functions:(1)Can significantly increase coronary blood flow,obviously reduce the range of myocardial infarction,and protect isoproterenol induced myocardial necrosis in rats.(2)Can maintain the balance between oxidation and anti-oxidation of myocardial cells,block lipid peroxidation chain reaction,decrease the intracellular Ca2+overload,and reduce CK-MB enzyme from myocardial cell leakage.(3)Have the protective effect of the myocardial ultrastructural damage,especially having obvious protective effect of myofibrils and cytoplasmic injury.(4)Have an inhibitory effect on rat model of carotid thrombosis, promoting epidermal cell synthesis and the release of PGI2,without affecting the TXA2biosynthesis of fibrinolysis.(5)Can obviously inhibit the elevation of serum cholesterol in rabbits,restrain and eliminate the formation of atheromatous plaque,fight hyperlipidemia without increasing the lipid content of aorta,liver and stomach gland tissues.Conclusion:Maiguan Kangfu Tablets,with good protective effect on cardiovascular and cerebrovascular,can be used as first-line drugs in the treatment of cardiovascular and cerebrovascular diseases.

Maiguan Kangfu Ttablets;Myocardial cells;Lipid peroxidation;Fibrinolysis;Atherosclerosis;Treating heart and brain simultaneously

R285.5

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2014.02.056

2013-08-28）