楊永蘭 林 云

云南省中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南 昆明 650021

淺談臨床PCR實(shí)驗(yàn)室的建立和管理

楊永蘭 林 云

云南省中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南 昆明 650021

目的為了PCR實(shí)驗(yàn)室順利建立和開展工作，少走彎路，確保PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，得到簡便有序的工作程序，總結(jié)出一些實(shí)驗(yàn)室建立和管理的經(jīng)驗(yàn)，以便提供參考。

臨床PCR實(shí)驗(yàn)；管理

聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）是由美國Kary Mullis于1983年發(fā)明的［1］。它是一種體外核酸擴(kuò)增技術(shù)，該技術(shù)主要通過高溫變性，低溫退火以及中溫延生等過程把樣本中靶DNA在體外擴(kuò)增數(shù)百萬倍，從而獲得極高的檢測敏感性。隨著PCR技術(shù)不斷發(fā)展完善，它在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用越來越廣泛，越來越受重視，越來越多的醫(yī)療機(jī)構(gòu)陸續(xù)建立起PCR臨床實(shí)驗(yàn)室，即以臨床檢驗(yàn)為目的的基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室，并陸續(xù)開展關(guān)于PCR檢驗(yàn)的新業(yè)務(wù)。筆者所在醫(yī)院PCR相關(guān)業(yè)務(wù)也因需在近幾年得到開展，筆者從實(shí)驗(yàn)室的建立到現(xiàn)在日常運(yùn)行，一直參與其中，對于臨床PCR實(shí)驗(yàn)室的管理和運(yùn)行積累了一些經(jīng)驗(yàn)和看法，現(xiàn)就這些經(jīng)驗(yàn)總結(jié)如下，和廣大同行一起淺談一下臨床PCR實(shí)驗(yàn)室的管理。

1 PCR實(shí)驗(yàn)室的建立

一個(gè)正規(guī)的PCR實(shí)驗(yàn)室要求是很嚴(yán)格的，不管是從實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境要求到儀器設(shè)備和試劑耗材，還是從人員素質(zhì)要求再到質(zhì)量控制管理，每一個(gè)環(huán)節(jié)都是很重要的，國家也對臨床PCR實(shí)驗(yàn)室的建立和運(yùn)行也有著專門的要求，因此要順利開展起實(shí)驗(yàn)室我們必須要有的放矢，理清思路，循序漸進(jìn)的，有條不紊的一步一步來。

1.1 PCR實(shí)驗(yàn)室申辦前準(zhǔn)備

首先了解實(shí)驗(yàn)室必需具備哪些條件，然后針對每一個(gè)條件進(jìn)行完善，最終完全滿足這些條件的要求。

1.1.1 給出標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)方案 設(shè)計(jì)上，建立單流向、一體化的臨床定量PCR實(shí)驗(yàn)室是安全準(zhǔn)確進(jìn)行基因擴(kuò)增檢驗(yàn)和保障生物安全的重要措施［2］。具體的是合理分區(qū)問題（通常分為試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)三個(gè)區(qū)）以及標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)向等環(huán)境條件。

1.1.2 配備專業(yè)技術(shù)人員 挑選業(yè)務(wù)水平較好的有資質(zhì)的人員［3］，均經(jīng)過衛(wèi)生部臨檢中心或區(qū)臨檢中心理論和操作培訓(xùn)并通過考試取得合格證［4］。

1.1.3 儀器設(shè)備以及試劑材料的準(zhǔn)備 根據(jù)開展的項(xiàng)目，調(diào)研已經(jīng)開展良好的實(shí)驗(yàn)室，并認(rèn)真對比市場各類產(chǎn)品，嚴(yán)格的選取所需設(shè)備和試劑。

1.1.4 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的制定以及質(zhì)量管理文件等的編寫。

根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)室開展的具體項(xiàng)目要求，結(jié)合自身使用的設(shè)備試劑進(jìn)行編寫。

1.2 PCR實(shí)驗(yàn)室申辦程序

進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室申辦程序具體如下：首先填寫調(diào)查表，由省臨檢中心審核；然后正式填寫申請表，上報(bào)衛(wèi)生部臨檢中心；評審由衛(wèi)生部、省專家參加，并報(bào)省衛(wèi)生廳備案；最后合格單位名單由衛(wèi)生行政部門在媒體公示［3］。

1.3 持續(xù)性改進(jìn)

針對評審專家指出的不足之處及合理性建議，進(jìn)行持續(xù)性的改進(jìn)。

2 PCR實(shí)驗(yàn)室日常工作的管理

污染問題是PCR實(shí)驗(yàn)室最常遇見的也是最重要的問題，它與我們檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性密切相關(guān)。而污染可以出現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室的任何一個(gè)環(huán)節(jié)，因此日常工作的每一個(gè)環(huán)節(jié)都很重要。

2.1 儀器的管理

主要的儀器是擴(kuò)增儀和離心機(jī)，每天日常工作我們都要對其擦拭清潔，仔細(xì)認(rèn)真檢查儀器工作狀態(tài)是否良好，離心力是否合格，擴(kuò)增儀孔間差是否有問題。

2.2 試劑的管理

試劑管理十分重要，直接影響著檢驗(yàn)結(jié)果，我們盡量選取高質(zhì)量的PCR試劑。排除試劑的選取問題，試劑的分類和儲(chǔ)存也很重要，試劑儲(chǔ)存嚴(yán)格按照儲(chǔ)存條件，存放位置也要科學(xué)合理善于管理，以防止試劑大規(guī)模污染為原則，以先用效期短的試劑后用效期長的為原則，以不浪費(fèi)不使用過期試劑為原則，以不同批號(hào)試劑不混放為原則，以不同項(xiàng)目試劑區(qū)別存放為原則，以新舊試劑不混放為原則。

2.3 環(huán)境的管理

單向氣流，單向物品傳送，生物安全，從這些環(huán)境要求可以看出實(shí)驗(yàn)室環(huán)境問題對于PCR實(shí)驗(yàn)室的重要性，因此確保環(huán)境參數(shù)也是保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確的基礎(chǔ)，我們應(yīng)該每天對工作臺(tái)面進(jìn)行擦拭消毒，工作結(jié)束紫外燈進(jìn)行照射，經(jīng)常檢查換氣扇的工作狀態(tài)是否正常，注意實(shí)驗(yàn)室的通風(fēng)等。

2.4 人員的管理

人員是核心，他掌控著實(shí)驗(yàn)室的一切，一舉一動(dòng)都可能影響著不同的環(huán)節(jié)，因此對人員就有相當(dāng)高的要求，對人員我們不僅要求工作認(rèn)真仔細(xì)，以防止少加漏加等低級錯(cuò)誤造成結(jié)果的錯(cuò)誤，更要求靈活敏銳，善于發(fā)現(xiàn)問題總結(jié)問題，實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)問題時(shí)能最快最好的解決，實(shí)驗(yàn)中要求嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行。

3 PCR實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制管理

3.1 室內(nèi)質(zhì)量控制的管理

室內(nèi)質(zhì)量控制是為了控制實(shí)驗(yàn)室內(nèi)某個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目日常工作中的精密度，保證實(shí)驗(yàn)室工作前后的一致性，進(jìn)而保證檢驗(yàn)結(jié)果的質(zhì)量，PCR實(shí)驗(yàn)過程很多，包括標(biāo)本采集，核酸提取等，每個(gè)環(huán)節(jié)都需要相應(yīng)質(zhì)控措施，因此PCR室內(nèi)質(zhì)量控制就需要我們嚴(yán)格按照室內(nèi)質(zhì)控要求長期堅(jiān)持，并認(rèn)真的做好記錄，便于我們總結(jié)問題。

3.2 室間質(zhì)評的管理

室間質(zhì)評是檢驗(yàn)質(zhì)量體系中重要的環(huán)節(jié)，它確保了我們實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此保證得到可靠的結(jié)果我們不但要堅(jiān)持室內(nèi)質(zhì)量控制，更要積極參加室間質(zhì)評，對我們檢查結(jié)果做到胸中有數(shù)。對于不滿意的結(jié)果及時(shí)分析原因進(jìn)行改進(jìn)，從而不斷提高我們的檢驗(yàn)水平。

4 結(jié)語

PCR技術(shù)的迅猛發(fā)展，PCR技術(shù)的迅猛發(fā)展，與其實(shí)用性密不可分。在不久的將來，PCR技術(shù)將有更高的突破，PCR臨床實(shí)驗(yàn)室在醫(yī)療中也將發(fā)揮更大的作用。因?yàn)镻CR技術(shù)的特殊性，對實(shí)驗(yàn)室各環(huán)節(jié)的高要求，這就要我們必須嚴(yán)格按照PCR實(shí)驗(yàn)室的要求進(jìn)行每一步工作，只要確保對實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的建立、標(biāo)準(zhǔn)的管理，就會(huì)獲得可靠的研究結(jié)果，為臨床提供最有價(jià)值的數(shù)據(jù)。

［1］朱忠勇．實(shí)用醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)［M］．2版．北京：人民軍醫(yī)出版社，1997：1041．

［2］江其生，金濟(jì)民，李峰生，等．單流向一體化臨床定量PCR實(shí)驗(yàn)室的優(yōu)化設(shè)計(jì)與設(shè)備配置［J］．醫(yī)療衛(wèi)生裝備，2006，27（9）：34-36．

［3］宋秀軍， 江其生．淺談臨床定量PCR實(shí)驗(yàn)室管理［J］．醫(yī)療衛(wèi)生裝備，2010，31（2）：84-87．

［4］梁志東．PCR實(shí)驗(yàn)室污染的排除［J］．實(shí)用醫(yī)技雜志，2006，13（7）：1141-1142．

R446.1

A

1674-9316（2014）06-0119-02

10.3969/J.ISSN.1674-9316.2014.06.068

方法筆者根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)的建立到日常的運(yùn)行，歸納總結(jié)出關(guān)于PCR實(shí)驗(yàn)室建立和管理的一些經(jīng)驗(yàn)和看法。

結(jié)論P(yáng)CR技術(shù)迅猛發(fā)展，跟他的實(shí)用性分不開，我們可以預(yù)見不久的將來，PCR技術(shù)將有更高的突破，PCR臨床實(shí)驗(yàn)室在醫(yī)療中也將發(fā)揮更大的作用。我們嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室的要求做好實(shí)驗(yàn)室的建立和管理工作，我們必將少走彎路，少出錯(cuò)誤。得到最為準(zhǔn)確可靠的結(jié)果，從而更好的為臨床服務(wù)。