張宇星 陳繼貴 劉暢

（武漢市第八醫(yī)院肛腸外科 湖北武漢 430010）

近年來(lái)，結(jié)直腸癌的發(fā)病率在中國(guó)呈逐年上升趨勢(shì)，尤其是在北京、上海、廣州等大中城市已成為消化道第一位的惡性腫瘤。早期結(jié)直腸癌的早期診斷及治療能夠大大提高治愈率和生存年齡。如何早期發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌及癌前病變是國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。

DNA在細(xì)胞核內(nèi)以染色體形式出現(xiàn)，其結(jié)構(gòu)和功能的異常是正常細(xì)胞演變?yōu)槟[瘤細(xì)胞的分子學(xué)基礎(chǔ)。在很多細(xì)胞癌變過(guò)程中，染色體由整倍體演變?yōu)楫惐扼w。染色體異倍體出現(xiàn)是腫瘤細(xì)胞的重要標(biāo)志之一。DNA倍體定量分析儀通過(guò)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)的染色體的倍體，可檢測(cè)出癌變細(xì)胞。其原理與已在臨床廣泛應(yīng)用的流式細(xì)胞儀相同。

本研究以病理組織學(xué)診斷為標(biāo)準(zhǔn)，用全自動(dòng)細(xì)胞DNA倍體分析儀對(duì)60例結(jié)直腸癌標(biāo)本組織、癌旁組織、正常組織進(jìn)行DNA倍體分析，比較臨床診斷與常規(guī)細(xì)胞學(xué)、病理組織學(xué)、DNA細(xì)胞倍體分析相互診斷的吻合率，判斷腫瘤的惡性程度、預(yù)后及DNA倍體變化之間的關(guān)系，并對(duì)該方法用于結(jié)直腸癌診斷、預(yù)后判斷的臨床作用進(jìn)行客觀評(píng)估，并可將之應(yīng)用于腸道脫落細(xì)胞的檢測(cè)，良惡性腫瘤鑒定，以促進(jìn)結(jié)直腸腫瘤的早期診斷與治療。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集武漢市第八醫(yī)院（肛腸醫(yī)院）2012年1月至6月行根治性切除的直腸癌標(biāo)本共60例，所有病例均經(jīng)病理診斷證實(shí)。其中男28例、女32例，年齡34～78歲，平均55歲。每例直腸癌標(biāo)本分別取癌組織，距腫瘤病灶2cm取癌旁組織，距腫瘤組織10cm取正常組織，運(yùn)用武漢蘭丁醫(yī)學(xué)高科技有限公司出品的全自動(dòng)細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞DNA倍體定量分析。

1.2 組織標(biāo)本的收集及處理 在術(shù)中標(biāo)本離體后，立即在結(jié)直腸癌組織、癌旁組織及正常組織中，用細(xì)胞刷子取細(xì)胞或直接印片，每處取玻片兩張，自然干燥后用95%酒精固定10min后進(jìn)行Feulgen-Thionin染色，并在相同部位取組織送病檢。

1.3 DNA倍體測(cè)定 采用細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)對(duì)印片進(jìn)行掃描，檢測(cè)結(jié)直腸癌組織、癌旁組織及正常組織中DNA含量，以分析各部位組織中異倍體的差異性及與病檢結(jié)果的符合率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 利用SPSS軟件分析各部位組織中DNA異倍體含量，并與病檢結(jié)果、臨床病理學(xué)資料、腫瘤大體形態(tài)、浸潤(rùn)深度、Ducks分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理類型進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1 不同部位組織異倍體率 根據(jù)倍體性指標(biāo)將全部患者分為整倍體（包括二倍體和近二倍體）和異倍體兩組。經(jīng)兩兩之間χ2檢驗(yàn)，癌組織中異倍體率（91.67%）明顯高于癌旁組織，癌旁組織異倍體率（46.67%）高于正常組織（0%），見(jiàn)表1。

表1 不同部位組織異倍體率

2.2 異倍體與臨床病理學(xué)之間的關(guān)系 直腸癌中DNA倍體性與大體類型、病理類型無(wú)關(guān)。然而DNA倍體性與直腸癌的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期等病理因素有關(guān)（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 直腸癌中DNA倍體與臨床病理因素的關(guān)系

3 討 論

3.1 直腸癌組織中DNA異倍體率與直腸癌病理學(xué)檢查的符合率 癌細(xì)胞的分裂增生處于一種不正常的狀態(tài)，腫瘤細(xì)胞無(wú)限分裂增殖的實(shí)質(zhì)是DNA不斷復(fù)制的結(jié)果，因此常會(huì)出現(xiàn)DNA倍體性及增殖活性的改變。DNA二倍體含量在每個(gè)正常人類的細(xì)胞中都較穩(wěn)定，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生癌變以及一些具有惡性潛能的癌前病變時(shí)，在其發(fā)展過(guò)程中可伴有細(xì)胞DNA倍體的改變。許多資料表明，結(jié)直腸癌的發(fā)生主要有兩條致癌途徑：（1）染色體不穩(wěn)定（chromosomal instability）途徑，主要特征為腫瘤細(xì)胞的非整倍體DNA含量，人類多數(shù)的散發(fā)性結(jié)直腸癌主要沿此途徑而發(fā)生、發(fā)展［1～3］。（2）DNA 微衛(wèi)星不穩(wěn)定（microsatellite instability）途徑，腫瘤細(xì)胞的DNA多為二倍體或近二倍體，人類絕大多數(shù)的遺傳性非腺瘤性結(jié)直腸癌（HNPCC）和少數(shù)散發(fā)性結(jié)直腸癌的發(fā)展是由這一途徑所驅(qū)使。在此途徑中，80%以上的腫瘤是由于hMSH2或hMLH1這兩個(gè)主要的人類DNA錯(cuò)配修復(fù)（mismatch repair，MMR）基因的突變及其功能蛋白的丟失所致［4、5］。

許多資料表明，DNA異倍體能反映腫瘤的生物學(xué)特性，是惡性腫瘤的特征性改變，DNA倍體含量的變化，可作為診斷癌變有價(jià)值的指標(biāo)，其與腫瘤的惡性程度及預(yù)后直接相關(guān)［6］。我們應(yīng)用細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞DNA含量進(jìn)行研究，本組60例直腸癌組織細(xì)胞異倍體作為判斷指標(biāo)，則診斷符合率為91.67%，但有8.33%的二倍體率，故單以DNA異倍體診斷直腸癌不夠準(zhǔn)確，不能代替病理學(xué)診斷。但其診斷符合率為91.67%，高于除病理學(xué)診斷的任何其它指標(biāo)，所以我們認(rèn)為DNA異倍體（DNA aneuploid）可作為判斷結(jié)直腸癌的重要標(biāo)志（tumor marker），DNA倍體檢測(cè)是對(duì)病理學(xué)診斷的有益補(bǔ)充。

3.2 直腸癌癌組織中異倍體率與臨床病理資料的關(guān)系 本組資料中，60例腫瘤標(biāo)本中55例檢出異倍體，異倍體率（91.67%）顯著高于癌旁組織（46.67%）、正常組織（0%）。本研究結(jié)果顯示癌組織中異倍體率顯著高于癌旁組織（P＜0.01），癌旁組中異倍體率也顯著高于正常組織（P＜0.01）。距癌組織遠(yuǎn)端10cm組織中DNA含量為正常組織，不同于癌組織，可視為安全范圍。距癌遠(yuǎn)端2cm的癌旁組織中DNA含量接近癌組織，不同于正常組織，可視為不安全范圍。與細(xì)胞學(xué)病理檢查一致。

本研究表明，直腸癌細(xì)胞中DNA倍體異常與腫瘤大體形態(tài)無(wú)關(guān)。隆起型、潰瘍型、浸潤(rùn)型直腸癌組織的異倍體率分別為92.86%、92.11%、87.50%，無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。DNA倍體異常與腫瘤浸潤(rùn)深度有關(guān)。浸潤(rùn)到黏膜層、肌層、漿膜層的直腸癌組織異倍體率分別為0%、50.0%、87.5%，差別存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的DNA倍體異常率分別為100%和86.48%，兩組有顯著性差異。說(shuō)明伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的直腸癌組織其異倍體率較高。因此DNA異倍體能反映腫瘤的生物學(xué)特性，對(duì)于評(píng)估直腸癌的目前的狀況和預(yù)后判斷有一定的價(jià)值，值得進(jìn)一步深入研究。

3.3 DNA異倍體能反映腫瘤的生物學(xué)特性，同時(shí)它往往出現(xiàn)在組織病理學(xué)改變之前，可作為診斷細(xì)胞早期癌變的輔助指標(biāo)。細(xì)胞遺傳學(xué)與DNA異倍體相關(guān)性研究表明，DNA異倍體的細(xì)胞往往伴有遺傳學(xué)的異常改變，提示DNA異倍體可能是細(xì)胞染色體發(fā)生了某些不穩(wěn)定性改變（如癌基因突變）的結(jié)果，且這些不穩(wěn)定性改變積累到一定程度，出現(xiàn)優(yōu)勢(shì)細(xì)胞克隆時(shí)，癌的發(fā)生將是不可避免的。因此，在組織學(xué)未見(jiàn)到癌變征象時(shí)，DNA異倍體可作為監(jiān)視細(xì)胞癌變的一個(gè)有益的補(bǔ)充，將能更好的預(yù)示細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，有助于發(fā)現(xiàn)難以確定的“生物學(xué)”早期癌組織。故DNA異倍體能反映腫瘤的生物學(xué)特性，同時(shí)它往往出現(xiàn)在組織病理學(xué)改變之前，可作為診斷細(xì)胞早期癌變的輔助指標(biāo)。DNA異倍體測(cè)定作為一項(xiàng)簡(jiǎn)便易行的，靈敏度相對(duì)較高的直腸癌診斷方法，在直腸癌的篩查過(guò)程中，有可能起到更重要的作用。

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