王成林 張 恒

1 安徽省渦陽縣人民醫(yī)院檢驗科 233600； 2 蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院呼吸科實驗室

肺癌是目前世界上惡性腫瘤死亡的主要原因之一，發(fā)病率和死亡率呈逐年上升趨勢［1～3］。因此早期診斷肺癌就顯得尤其重要。目前臨床診斷肺癌常用的方法有痰和支氣管鏡刷片脫落細胞學檢查。痰液脫落細胞學檢查是診斷肺癌最便捷、最經(jīng)濟的方法，在臨床應用由來已久。以前一直用傳統(tǒng)常規(guī)涂片方法，但該技術(shù)存在約20%～60%的假陰性率一直未得到有效解決［4，5］。近年來，隨著醫(yī)學科學技術(shù)的不斷發(fā)展，許多新的檢查方法應運而生，如液基薄層細胞學檢查技術(shù)（LCT）是由美國FDA認證的一項國際領(lǐng)先的細胞學檢測新技術(shù)。LCT的細胞采集，涂片的制備方法是細胞病理學檢查技術(shù)的重大革命，已廣泛應用于宮頸癌的診斷［6］。LCT應用于肺癌患者痰脫落細胞學檢查中具有陽性率高、無創(chuàng)傷、簡便、安全等優(yōu)點。通過研究認為，把LCT技術(shù)應用于肺癌患者痰液脫落細胞學制片并與傳統(tǒng)涂片方法進行比較，探討其在肺癌診斷中的應用價值。認為LCT可以作為肺癌高危人群篩查及高度懷疑肺癌人群早期診斷的一項新技術(shù)。

1 材料與方法

1.1 一般材料 收集我院呼吸內(nèi)科2011年1月－2012年12月，被臨床證實為肺癌的480例患者資料，年齡40～67歲，平均年齡56.5歲。其中男300例，女180例。同時進行痰液基細胞學（LCT）制片和常規(guī)涂片（CS）。臨床診斷肺癌是指X線、CT顯示肺部有明顯腫塊，并通過支氣管鏡檢查或手術(shù)被病理證實；有的患者伴有骨轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，后被臨床治療所證實。

1.2 標本留取 向患者解釋清楚咳痰對實驗診斷的重要性，囑患者清晨漱口，深咳，留取新鮮痰液。并及時送檢。當痰量很少或無法自然排痰者，可采用霧化和護理指導方法，促進排痰，并分別進行液基細胞學（LCT）制片和常規(guī)涂片（CS）對兩者陽性率進行分析。

1.3 LCT制片方法 漱口后留取痰標本，加入到痰細胞保存液專用瓶，然后加入黏液稀釋液5ml，標本振蕩30min～1h。將溶解后的痰液加入50ml離心管中。按1 800r／min離心10min，離心后去掉上清液，加入緩沖液至7.5ml重新振蕩混勻。按上述標準再離心5min去掉上清液，加入緩沖液1ml混勻，移入染色制片倉中，沉降10min，最后 H－E染色，封片。

1.4 染色 （1）加入固定液1min后傾倒出，靜止10s緩沖液沖洗2次。（2）蘇木素染色3min后傾倒出，緩沖液沖洗2次。（3）伊紅染色30s后傾倒出。（4）酒精脫水，再用二甲苯（TOP）透明，封片，鏡檢。

1.5 觀察與腫瘤細胞診斷 （1）每張涂片經(jīng)過2位資深醫(yī)師復閱全部液基細胞學涂片和常規(guī)涂片。采用3級分類法將細胞診斷結(jié)果報告為陰性，可疑，陽性。陽性者作如下分型：鱗癌、腺癌、小細胞癌及未定型癌。（2）查閱本組全部患者的病例，收集其臨床病理資料，臨床診斷肺癌指胸部X線或CT顯示有明顯肺部病變或伴有明確的轉(zhuǎn)移灶（包括肺內(nèi)、縱隔、腦、肝及骨髓）。病理診斷癌癥指有活檢或手術(shù)切除病理診斷。

1.6 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，兩種制片方法的百分率比較用卡方χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 液基細胞學（LCT）制片與常規(guī)涂片（CS）方法比較見表1。

表1 液基細胞學（LCT）制片與常規(guī)涂片（CS）方法的比較

LCT制片結(jié)果，筆者將480例痰標本的LCT制片與CS涂片的腫瘤細胞陽性率進行比較。結(jié)果：LCT檢查出惡性腫瘤102例。其中鱗癌68例，腺癌25例，小細胞癌9例，其余均為良性，陽性率為21.25%。CS涂片法檢查出惡性腫瘤72例。其中鱗癌40例，腺癌22例，小細胞癌10例，其余均為良性，陽性率為15.00%。

2.2 液基細胞學（LCT）制片與常規(guī)涂片（CS）中鱗癌、腺癌及小細胞癌細胞的形態(tài)比較。LCT技術(shù)制片，是通過震蕩，離心攪拌，過濾操作，鱗癌由密集成團變成三五成群，核更深染，核／質(zhì)比例增大；腺癌細胞多呈單個，腺樣聚集，細胞成片排列被打碎，核圓形或橢圓形，核仁明顯；小細胞型癌細胞多散在、裸核，偶有排列成小團塊，退變壞死成分被去除，細胞呈小圓型、瓜子仁型、較易辨認。CS涂片鱗癌細胞混雜于細胞碎屑中，不易診斷。腺癌細胞的核漿結(jié)構(gòu)不清楚，周圍黏液雜質(zhì)較多，不易被診斷。小細胞癌細胞多呈條索狀或葡萄狀排列，細胞有明顯重疊，互相擠壓，形成鑲嵌狀排列，大多細胞為裸核，退變較多。

3 討論

薄層液基細胞學檢查技術(shù)于90年代被美國FDA批準于改進傳統(tǒng)手工巴氏涂片。目前應用臨床的有兩種：模式液基薄層細胞技術(shù)（TCT）和離心沉降式液基薄層細胞技術(shù)（LCT）。TCT率先應用于婦科篩查宮頸癌的研究，已取得公認的效果［7～9］。我國近年來用TCT婦科應用也取得很大的進展。但在非婦科領(lǐng)域應用較少，尤其應用在肺癌患者痰脫落細胞檢查方面。痰脫落細胞學檢查是一種簡單、方便、無創(chuàng)的診斷呼吸系統(tǒng)腫瘤的方法。但是常規(guī)痰涂片系統(tǒng)在其診斷的陽性率上不盡如人意，假陰性率問題嚴重，因此降低假陰性率成為當前痰細胞病理學診斷的重要課題之一。近年來，我院引進LCT技術(shù)，逐步擴展到非婦科領(lǐng)域，特別是應用于肺癌患者痰脫落細胞檢查中，得到有效應用，并取得良好效果。從根本上改變了傳統(tǒng)常規(guī)涂片的制作方法。

薄層液基細胞技術(shù)（LCT）在制片和閱片上有著自身的優(yōu)勢，能有效提高痰脫落細胞檢查的陽性率，值得基層推廣。LCT的突出優(yōu)點表現(xiàn)為：（1）收集痰液時，即存即取、最大限度保持痰液的新鮮度。（2）標本利用率高，這符合不丟棄任何所用材料的原則［10］。（3）利用黏液松解劑消化痰液中的大量壞死物質(zhì)，保持玻片背景清楚。（4）LCT涂片面積為10～20mm2，涂片面積比常規(guī)涂片面積小，鏡檢時可省時省力，工作效率明顯提高。（5）LCT還可以根據(jù)需要多次涂片，以備做免疫組化檢查。這是因為標本被處理的同時還保全了細胞抗原生物特性，對細胞免疫化學染色無任何影響，因而將有利于腫瘤細胞的鑒別診斷。

鑒于薄層液基細胞學技術(shù)（LCT）的自身優(yōu)點，它不僅應用于臨床痰液、支氣管鏡刷片、胸腹水、心包積液細胞學檢查。也可以應用免疫組化檢查及熒光原位雜交（FISH）檢測表皮生長因子受體（EGFR）和人表皮生長因子受體2（HER－2）基因檢查。為腫瘤靶向治療提供參考。

綜上所述，薄層液基細胞檢查技術(shù)（LCT）肺癌患者痰脫落細胞檢查中，具有較高的敏感性、特異性及分型診斷符合率。LCT作為一種改良的細胞制片技術(shù)，有效克服了傳統(tǒng)涂片法的缺點，提高了肺癌診斷的陽性率。但是它也不能完全代替?zhèn)鹘y(tǒng)涂片。應該把LCT和CS聯(lián)合診斷，再結(jié)合病理，可提高肺癌患者的早期診斷，以便肺癌患者盡早得到診斷。

［1］黃勛福，韓福蘭，等.LBP液基細胞學沉降式制片技術(shù)在痰脫落細胞診斷中的應用〔J〕.現(xiàn)代醫(yī)藥，2009，7（9）：22－23.

［2］李艷，陳建萍，何蓉.薄層液基細胞學技術(shù)在痰脫落細胞中的臨床應用〔J〕.江西醫(yī)藥，2013，48（2）：164－165.

［3］孫燕.肺癌治療學與預防〔J〕.中國肺癌雜志，2000，3（6）：404.

［4］董正偉，王彥麗，武春燕，等.液基細胞學檢查系統(tǒng)在肺癌診斷中的臨床價值〔J〕.癌變、畸變、突變，2011，3：232.

［5］蔡霖，陳麗珠，陳群，等.液基細胞學檢查系統(tǒng)在肺癌患者痰液檢查中的應用價值〔J〕.中華病理學雜志，2009，38（12）：834－845.

［6］劉建彬，邱森靈，鐘偉嬌，等.液基細胞學檢測在宮頸癌篩查中的應用〔J〕.實驗與檢驗醫(yī)學，2009，27（6）：617－618.

［7］賈偉，黃禮年.液基薄層細胞學在肺癌診斷中的進展〔J〕.中華全科醫(yī)學，2012，10（7）：1138.

［8］梁偉強，喻延，吳澤龍.支氣管鏡檢薄層液基細胞學檢查在肺癌診斷中的應用價值〔J〕.現(xiàn)代診斷與治療，2012，23（8）：1127－1128.

［9］侯春江，羅彪.穿刺液基細胞學在肺癌早期診斷中的應用價值〔J〕.臨床與實驗醫(yī)學雜志，2011，10（24）：1944－1945.

［10］余碧蕓，吳宏成，沈世茉.支氣管鏡刷檢標本液基細胞學檢測在肺癌診斷中的應用〔J〕.浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，23（2）：92－93.