徐 潔， 劉俊許， 康雪玲， 蔣 麗， 周忠偉， 陳思鋒， 孟 丹

多能干細(xì)胞是具有自我更新能力和能向體內(nèi)多種細(xì)胞分化的一類細(xì)胞群體?；钚匝?reactive oxygen species，ROS)是反應(yīng)活性極強(qiáng)的代謝分子。雖然過多的ROS會對干細(xì)胞產(chǎn)生毒性，引起干細(xì)胞的衰老和凋亡，但是ROS的調(diào)節(jié)在維持干細(xì)胞的干性和分化中起重要作用。ROS在不同的干細(xì)胞中發(fā)揮的作用也不盡相同。深入了解ROS如何調(diào)控干細(xì)胞的功能將有助于加強(qiáng)干細(xì)胞在轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用。本文將以胚胎干細(xì)胞和誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞為主，對近年來ROS調(diào)節(jié)多能干細(xì)胞功能的研究進(jìn)行簡要綜述。

1 多能干細(xì)胞

干細(xì)胞是具有自我更新能力和能向體內(nèi)多種細(xì)胞分化的一類細(xì)胞群體。根據(jù)干細(xì)胞增殖能力和分化潛能的不同，可以把干細(xì)胞分為具有無限增殖、分化潛能的多能干細(xì)胞 (pluripotent stem cells)和增殖、分化能力有限的成體干細(xì)胞(adult stem cells)。多能干細(xì)胞主要包括胚胎干細(xì)胞 (embryonic stem cells，ESCs)和誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cells，iPSCs)等。這些細(xì)胞具有在體外特定的培養(yǎng)條件下無限增殖和分化為機(jī)體內(nèi)任何種類細(xì)胞的潛能。因此，多能干細(xì)胞在再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有巨大的應(yīng)用潛力和優(yōu)勢［1］。ESCs是動物早期發(fā)育囊胚期內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞在體外特定培養(yǎng)條件下獲得的永生細(xì)胞［2］。iPSCs最初是 2006 年由 Takahashi等［3］研究小組把4種與維持胚胎干細(xì)胞全能性相關(guān)的基因(Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4)通過逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)入小鼠的成纖維細(xì)胞，使其重編程而獲得。隨后，人的iPSCs也從多種體細(xì)胞獲得［4］。iPSCs表現(xiàn)出許多與ESCs相同的特點(diǎn):包括形態(tài)，基因表達(dá)標(biāo)志物以及在體內(nèi)的全能性［5］。iPSCs可用于建立疾病細(xì)胞模型，研究疾病的發(fā)生機(jī)制和進(jìn)行藥物篩選［6］。目前，干細(xì)胞治療已經(jīng)用于臨床治療相關(guān)疾病，因此iPSCs在干細(xì)胞治療方面有著非常廣闊的應(yīng)用前景。

2 活性氧

ROS是反應(yīng)活性極強(qiáng)的代謝分子，主要包括超氧陰離子(O－·2)、過氧化氫(H2O2)和羥自由基(·OH)。生理情況下，細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生主要來源于線粒體。線粒體氧化磷酸化過程中產(chǎn)生較低水平的超氧陰離子，隨后其很快被超氧化物歧化酶轉(zhuǎn)化成過氧化氫。過氧化氫相對于超氧陰離子而言比較穩(wěn)定，可被谷胱甘肽過氧化物酶或過氧化氫酶水解。此外過氧化氫也可通過Fenton反應(yīng)轉(zhuǎn)化成化學(xué)性質(zhì)更活潑的羥自由基。過多的ROS會對細(xì)胞產(chǎn)生毒性，引起細(xì)胞的衰老和凋亡，許多疾病如動脈粥樣硬化、心衰、高血壓、糖尿病、帕金森病和衰老等，都與ROS產(chǎn)生過多有關(guān)［7-8］。但是低水平的ROS可作為許多刺激因子的第2信使，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的遷移、增殖、黏附、分化等多種生理功能。NADPH氧化酶是干細(xì)胞產(chǎn)生ROS的主要來源之一。NADPH氧化酶主要由跨膜結(jié)構(gòu)(Nox和p22phox)和胞漿成分(p47phox、p67phox、p40phox及 Rac1)組成［9］。近年來研究發(fā)現(xiàn)，NADPH氧化酶來源的ROS參與調(diào)控干細(xì)胞(或祖細(xì)胞)的多種功能，包括干細(xì)胞的增殖、遷移、干性維持、分化以及基因表達(dá)［7-8，10-15］。因此，深入了解ROS如何調(diào)控干細(xì)胞的功能將有助于加強(qiáng)干細(xì)胞在轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用。

3 ROS在多能干細(xì)胞中的作用

近年來，科學(xué)家們對ROS在多能干細(xì)胞中的作用進(jìn)行了廣泛的研究。盡管ROS在不同的干細(xì)胞中發(fā)揮的作用不盡相同，但是科學(xué)家們基本得出一個共識:ROS水平的變化參與調(diào)控干細(xì)胞的功能和命運(yùn)。干細(xì)胞氧化還原調(diào)節(jié)的改變在疾病的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。

3.1 ROS對ESCs和iPSCs黏附、增殖、衰老和凋亡的影響 生理情況下，低水平的ROS在維持多能干細(xì)胞的正常功能中起重要作用。但是過高水平的ROS可造成多能干細(xì)胞的損傷和自我更新、黏附、增殖、遷移等功能失常，加速細(xì)胞衰老與凋亡［5，7，16-22］。例如:血紅素加氧酶1(heme oxygenase-1，HO-1)能夠保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激導(dǎo)致的細(xì)胞損傷，而HO-1基因缺陷型的iPSCs內(nèi)ROS水平增高，對氧化應(yīng)激引起的細(xì)胞凋亡更敏感［5］。我們最近的研究發(fā)現(xiàn)，H2O2通過減少黏附相關(guān)基因如integrin alpha 7、cadherin 1、cadherin 5和VCAM-1等基因的表達(dá)，抑制iPSCs的黏附，黏附的功能缺失影響了iPSCs遷移的能力;同時H2O2的暴露抑制了iPSCs的增殖功能，誘導(dǎo)細(xì)胞的衰老和凋亡［14］。以往的研究也證實(shí)，H2O2抑制ESCs的黏附和細(xì)胞周期蛋白cyclin D1的表達(dá)，引起細(xì)胞周期阻滯并誘導(dǎo)凋亡［23］。ROS影響細(xì)胞黏附的機(jī)制可能與抑制整合素依賴的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑有關(guān)［14，24］。

同時，很多研究證實(shí):減少或抑制干細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生，能阻斷ROS誘導(dǎo)的多能干細(xì)胞功能的失常。白藜蘆醇能夠顯著增加小鼠iPSCs內(nèi)錳超氧化物歧化酶(MnSOD)的表達(dá)和細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽的水平，因此減少氧化應(yīng)激導(dǎo)致的 iPSCs損傷［22］。飛燕草素(delphinidin)，一種具有抗氧化特性的植物色素，可以通過減少小鼠ESCs內(nèi) ROS介導(dǎo)的JNK和NF-κB的激活，抑制低氧誘導(dǎo)的 ESCs凋亡［25］。N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine，NAC)，一種自由基清除劑，也能通過抑制ROS產(chǎn)生，抑制在iPSCs向血細(xì)胞分化過程中細(xì)胞的衰老和凋亡［20］。

3.2 ESCs和 iPSCs自身的抗氧化性 針對過量ROS對干細(xì)胞生理和功能的毒害現(xiàn)象，一些研究表明:多能干細(xì)胞相對于成體細(xì)胞而言，具有更強(qiáng)的抗氧化能力。人ESCs和iPSCs主要是通過增加ROS的清除能力和減少ROS產(chǎn)生來維持干細(xì)胞基因組的完整性［7，16］。在人的 iPSCs產(chǎn)生過程中，線粒體基因組的拷貝數(shù)明顯減少，從而使得ROS產(chǎn)生減少，并且iPSCs的抗氧化基因表達(dá)增高，這與ESCs的情況極為相似［16］。研究證實(shí):ESCs通過增加端粒酶活性、增強(qiáng)自身的DNA修復(fù)能力以及抗氧化能力，從而維持干細(xì)胞的干性［26］。最近的一項(xiàng)研究也證實(shí)，小鼠的ESCs對于短暫的H2O2誘導(dǎo)的衰老是有抗性的［23］。

然而，我們新近的研究發(fā)現(xiàn)iPSCs對氧化應(yīng)激引起的細(xì)胞毒性較敏感，H2O2濃度大于25 mmol/L時就可以引起小鼠iPSCs阻滯在G2/M期，并誘導(dǎo)細(xì)胞的衰老和凋亡;而相比之下成體成纖維細(xì)胞在H2O2大于150 μmol/L才明顯加速衰老、凋亡，至H2O2濃度為400 μmol/L 時出現(xiàn)快速的死亡［14］。Guo 等［23］也報道與成纖維細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞比較，ESCs對H2O2引起的細(xì)胞毒性更敏感。另有研究證實(shí)，短暫的非毒性劑量的H2O2暴露就可以引起干細(xì)胞胰島素抵抗信號通路的轉(zhuǎn)化，以及糖尿病和腫瘤發(fā)生途經(jīng)的誘導(dǎo)激活［27］?？梢?，不同類型的細(xì)胞對H2O2引起的氧化應(yīng)激有不同的反應(yīng)和耐受。這些研究結(jié)果的不一致可能與細(xì)胞密度和種類、H2O2干預(yù)的濃度和時間等實(shí)驗(yàn)條件的不同有關(guān)。另一方面，盡管通常干細(xì)胞比成體細(xì)胞有更強(qiáng)的抗氧化性，但在創(chuàng)傷應(yīng)激或ROS調(diào)節(jié)基因缺陷的情況下，ROS耐受閾值較低的iPSCs和ESCs可能更傾向于積累超過其耐受量的ROS，從而對ROS的細(xì)胞毒性更加敏感。當(dāng)氧化應(yīng)激超過了多能干細(xì)胞耐受的能力時，干細(xì)胞通過衰老或凋亡途徑清除損傷的細(xì)胞以保證基因組的完整性。

3.3 ROS對 ESCs和 iPSCs分化的影響 ROS在ESCs和iPSCs的分化中也起著重要的作用。低水平的ROS是維持人和小鼠干細(xì)胞自我更新所必須的，增高的ROS水平則會促進(jìn)干細(xì)胞的分化［7，28］。在多能干細(xì)胞向不同種類細(xì)胞分化的過程中，ROS所起的作用也有所不同，甚至截然相反。一些研究表明，ROS 促進(jìn) ESCs和 iPSCs 的分化［5，29-30］。在對ESCs向心肌細(xì)胞分化的研究中發(fā)現(xiàn)，高糖環(huán)境(25 mmol/L)通過增加Nox4表達(dá)促進(jìn)ROS生成，進(jìn)而激活p38絲裂原激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase，p38 MAPK)，促進(jìn) ESCs向心肌細(xì)胞分化;而在生理水平糖濃度(5 μmol/L)的培養(yǎng)基中，ESCs無法被誘導(dǎo)分化成心肌細(xì)胞［30］。其中，Nox4是NADPH氧化酶的一個重要亞基，Nox4蛋白表達(dá)的增加可直接激活NADPH氧化酶，促進(jìn)細(xì)胞ROS產(chǎn)生。Nox4產(chǎn)生的ROS在ESCs向血管平滑肌細(xì)胞分化的過程中也起重要作用。轉(zhuǎn)化生長因子 β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)可激活 Nox4，促進(jìn)Nox4轉(zhuǎn)移到ESCs核內(nèi)產(chǎn)生ROS，進(jìn)而促進(jìn)血清反應(yīng)因子(serum response factor，SRF)與心肌蛋白(myocardin)形成復(fù)合體，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的分化［29］。此外，在 HO-1 基因缺陷型的 iPSCs，由于ROS水平的增高，其比正常的iPSCs更易失去多能性，更易發(fā)生自發(fā)性分化［5］。類似地，ROS也促進(jìn)iPSCs分化成神經(jīng)細(xì)胞，其與ROS激活ERK1/2信號通路有關(guān)［15］。

但在另一些情況下，ROS會阻礙ESCs和iPSCs的分化，ESCs和iPSCs分化成骨細(xì)胞和造血細(xì)胞的過程揭示了ROS在干細(xì)胞分化中的阻礙作用。白藜蘆醇通過降低ROS的水平能夠在1～2周內(nèi)顯著上調(diào)鼠iPSCs類成骨分化時的成骨標(biāo)志物Runx2、osteopontin等，顯示了多余的ROS可能阻礙 iPSCs分化成骨細(xì)胞［22］。在另一個研究中，iPSCs用NAC處理后，CD34、CD43、CD45等血細(xì)胞標(biāo)志物陽性的細(xì)胞數(shù)量大大上升，提示抑制ROS水平能夠促進(jìn)iPSCs向造血細(xì)胞的分化，揭示了ROS本身對iPSCs血細(xì)胞細(xì)胞分化的抑制作用［20］。

目前，在ROS的調(diào)控下，ESCs和iPSC可誘導(dǎo)分化成心肌細(xì)胞、血管細(xì)胞、神經(jīng)樣細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、造血細(xì)胞和骨樣細(xì)胞等等［22］。ROS水平的變動在某些情況為多能干細(xì)胞的分化提供了條件，而在另外一些情況下卻促進(jìn)了去分化，這些具體的調(diào)控機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。

4 ROS相關(guān)的干細(xì)胞疾病模型

ROS相關(guān)的基因缺陷的ESCs可以導(dǎo)致疾病的發(fā)生。而對于iPSCs來說，從病人身上提取的細(xì)胞可以被誘導(dǎo)成iPSCs，從而提供較好的研究疾病發(fā)生機(jī)制和藥物篩選的模型。這里我們介紹一些利用iPSCs建造的疾病模型。

ROS相關(guān)基因缺陷的先天疾病的iPSCs模型能夠給疾病的發(fā)病機(jī)制和治療帶來新的思考。如:科凱恩綜合征(Cockayne syndrome，CS)是一種以提早老化和DNA修復(fù)功能缺陷為特點(diǎn)的人類基因疾病。為了更深入地了解該疾病的發(fā)病機(jī)制，科學(xué)家們用病人的成纖維細(xì)胞制成了iPSCs。來源于CS的iPSCs表現(xiàn)出了高于正常情況的細(xì)胞死亡率、高水平的ROS產(chǎn)生、硫氧還蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein，TXNIP)的上調(diào)和p53在轉(zhuǎn)錄水平的上調(diào)［18］。另一個先天疾病的例子是X染色體連鎖的慢性肉芽腫性疾病(X-linked chronic granulomatous disease，CGD)，這類病人的中性粒細(xì)胞是NADPH氧化酶缺陷型的，因此這些細(xì)胞不能有效消化被胞吞和胞飲的內(nèi)容物，逐漸形成了肉芽腫［31-33］，目前造血干細(xì)胞移植術(shù)是針對該病的唯一一種有效治療手段［33］。通過將病人的成纖維細(xì)胞重編程成 iPSCs，可以建立CGD的疾病模型。研究表明，由這些iPSCs分化而成的巨噬細(xì)胞內(nèi)盡管缺乏ROS，它們具有正常的吞噬能力，提示了巨噬細(xì)胞內(nèi)可能存在相關(guān)補(bǔ)償機(jī)制，這些發(fā)現(xiàn)為該病的治療提供了一些新的思路［31］。另一方面，某些iPSCs疾病模型提供了一些證明發(fā)病可能與ROS調(diào)控相關(guān)的證據(jù)。例如在帕金森綜合癥中，從該病病人身上分離的細(xì)胞誘導(dǎo)成的iPSCs，其抵抗氧化應(yīng)激的能力是下降的。此外，暴露于ROS中的ESCs和iPSCs傾向于獲得胰島素抗性，這可能會成為糖尿病的模型［7］。除了建立和研究疾病模型，運(yùn)用到iPSCs的治療方法方興未艾，目前在鐮狀紅細(xì)胞貧血癥、血友病A、肝病、帕金森氏病、急性心肌梗死、糖尿病等疾病的治療中都有成功的案例［34］。如白藜蘆醇在iPSCs骨向分化中的作用為骨整形手術(shù)的干細(xì)胞治療法提供了思路［22］。通過有效地調(diào)節(jié)ROS，由H9c2細(xì)胞重編程獲得的iPSCs能夠抑制細(xì)胞凋亡、被誘導(dǎo)分化成心肌細(xì)胞，并且在心肌梗死的心臟經(jīng)歷iPSCs手術(shù)后顯著增多了血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞［35］。一個最近的研究邁出了令人振奮的一步——iPSCs能夠被誘導(dǎo)分化成心血管主要細(xì)胞成員中的每一種細(xì)胞，包括平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、血管壁細(xì)胞和心肌細(xì)胞等，使iPSCs在心血管再生醫(yī)學(xué)方面具有更廣闊的應(yīng)用前景［21，35］。

5 結(jié)語

本文回顧了近年來ROS在ESCs和iPSCs中的作用，調(diào)控機(jī)制以及與ROS相關(guān)的疾病模型。這些研究提示ROS的調(diào)節(jié)在維持干細(xì)胞的干性、增殖、凋亡和分化中起重要作用。根據(jù)目前研究我們認(rèn)為，ROS相關(guān)的基因缺陷的iPSCs或ESCs可能比成體細(xì)胞的抗氧化性更低。ROS在這2種細(xì)胞分化中的水平變化可能取決于它們的分化方向，同時因?yàn)榧?xì)胞分化是一個動態(tài)連續(xù)的過程，ROS的水平在分化過程中可能是一個動態(tài)的變化過程。由于干細(xì)胞類型，ROS檢測時間和方法，以及實(shí)驗(yàn)條件的差異，可能導(dǎo)致研究結(jié)果的不同。目前仍然有一些問題有待于解決:ESCs和iPSCs是否比普通成體細(xì)胞更耐受氧化應(yīng)激反應(yīng)?是否存在這樣一個ROS水平的范圍，低于或高于這個范圍都對干細(xì)胞有害?在分化過程中ROS如何影響干細(xì)胞向不同的細(xì)胞分化?如何調(diào)控ROS使其輔助iPSCs定向分化為治療所需的特定細(xì)胞?因此利用ROS調(diào)控干細(xì)胞的功能將有助于加強(qiáng)干細(xì)胞在轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用。

［1］ Edmundson M，Thanh NT，Song B.Nanoparticles based stem cell tracking in regenerative medicine［J］.Theranostics，2013，3(8):573-582.

［2］ Yousefi M，Hajihoseini V，Jung W，et al.Embryonic stem cell interactomics:the beginning of a long road to biological function［J］.Stem Cell Rev，2012，8(4):1138-1154.

［3］ Takahashi K，Yamanaka S.Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors［J］.Cell，2006，126(4):663-676.

［4］ Choi SM，Liu H，Chaudhari P，et al.Reprogramming of EBV-immortalized B-lymphocyte cell lines into induced pluripotent stem cells［J］.Blood，2011，118(7):1801-1805.

［5］ Lin CY，Peng CY，Huang TT，et al.Exacerbation of oxidative stress-induced cell death and differentiation in induced pluripotent stem cells lacking heme oxygenase-1［J］.Stem Cells Dev，2012，21(10):1675-1687.

［6］ 孟 丹，吳 儀，王 榮，等.活性氧在誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞移植中的作用及機(jī)制研究［J］.中國病理生理雜志，2012，28(11):2085.

［7］ Chuikov S，Levi BP，Smith ML，et al.Prdm16 promotes stem cell maintenance in multiple tissues，partly by regulating oxidative stress［J］.Nat Cell Biol，2010，12(10):999-1006.

［8］ Ushio-Fukai M，Urao N.Novel role of NADPH oxidase in angiogenesis and stem/progenitor cell function［J］.Antioxid Redox Signal，2009，11(10):2517-2533.

［9］ Kleniewska P，Piechota A，Skibska B，et al.The NADPH oxidase family and its inhibitors［J］.Arch Immunol Ther Exp(Warsz)，2012，60(4):277-294.

［10］ Urao N，Ushio-Fukai M.Redox regulation of stem/progenitor cells and bone marrow niche［J］.Free Radic Biol Med，2013，54:26-39.

［11］Miao W，Xufeng R，Park MR，et al.Hematopoietic stem cell regeneration enhanced by ectopic expression of ROS-detoxifying enzymes in transplant mice［J］.Mol Ther，2013，21(2):423-432.

［12］曾慧蘭，卜欠欠，陳慧中，等.尼古丁對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和遷移的影響［J］.中國病理生理雜志，2013，29(5):778-783.

［13］ Song H，Cha MJ，Song BW，et al.Reactive oxygen species inhibit adhesion of mesenchymal stem cells implanted into ischemic myocardium via interference of focal adhesion complex［J］.Stem Cells，2010，28(3):555-563.

［14］Wu Y，Zhang X，Kang X，et al.Oxidative stress inhibits adhesion and transendothelial migration，and induces apoptosis and senescence of induced pluripotent stem cells［J］.Clin Exp Pharmacol Physiol，2013，40(9):626-634.

［15］Vieira HL，Alves PM，Vercelli A.Modulation of neuronal stem cell differentiation by hypoxia and reactive oxygen species［J］.Prog Neurobiol，2011，93(3):444-455.

［16］ Armstrong L，Tilgner K，Saretzki G，et al.Human induced pluripotent stem cell lines show stress defense mechanisms and mitochondrial regulation similar to those of human embryonic stem cells［J］.Stem Cells，2010，28(4):661-673.

［17］盧碧燕，童秀珍，鄧宇斌，等.丹酚酸B抑制氧化應(yīng)激引起骨髓間質(zhì)干細(xì)胞凋亡的研究［J］.中國病理生理雜志，2011，27(3):475-480.

［18］ Andrade LN，Nathanson JL，Yeo GW，et al.Evidence for premature aging due to oxidative stress in iPSCs from Cockayne syndrome［J］.Hum Mol Genet，2012，21(17):3825-3834.

［19］ Zhang XZ.Modulation of embryonic stem cell fate and somatic cell reprogramming by small molecules［J］.Reprod Biomed Online，2010，21(1):26-36.

［20］ Berniakovich I，Laricchia-Robbio L，Izpisua BJ.N-acetylcysteine protects induced pluripotent stem cells from in vitro stress:impact on differentiation outcome［J］.Int J Dev Biol，2012，56(9):729-735.

［21］ Kane NM，Xiao Q，Baker AH，et al.Pluripotent stem cell differentiation into vascular cells:a novel technology with promises for vascular regeneration［J］.Pharmacol Ther，2011，129(1):29-49.

［22］ Kao CL，Tai LK，Chiou SH，et al.Resveratrol promotes osteogenic differentiation and protects against dexamethasone damage in murine induced pluripotent stem cells［J］.Stem Cells Dev，2010，19(2):247-258.

［23］ Guo YL，Chakraborty S，Rajan SS，et al.Effects of oxidative stress on mouse embryonic stem cell proliferation，apoptosis，senescence，and self-renewal［J］.Stem Cells Dev，2010，19(9):1321-1331.

［24］ Lu Q，Rounds S.Focal adhesion kinase and endothelial cell apoptosis［J］.Microvasc Res，2012，83(1):56-63.

［25］ Seo BN，Ryu JM，Yun SP，et al.Delphinidin prevents hypoxia-induced mouse embryonic stem cell apoptosis through reduction of intracellular reactive oxygen speciesmediated activation of JNK and NF-κB，and Akt inhibition［J］.Apoptosis，2013，18(7):811-824.

［26］ Liu Z，Wan P，Duan H，et al.ES micro-environment enhances stemness and inhibits apoptosis in human limbal stem cells via the maintenance of telomerase activity［J］.PLoS One，2013，8(1):e53576.

［27］ Mouzannar R，McCafferty J，Benedetto G，et al.Transcriptional and phospho-proteomic screens reveal stem cell activation of insulin-resistance and transformation pathways following a single minimally toxic episode of ROS［J］.Int J Genomics Proteomics，2011，2(1):34-49.

［28］ Jang YY，Sharkis SJ.A low level of reactive oxygen species selects for primitive hematopoietic stem cells that may reside in the low-oxygenic niche［J］.Blood，2007，110(8):3056-3063.

［29］ Xiao Q，Luo Z，Pepe AE，et al.Embryonic stem cell differentiation into smooth muscle cells is mediated by Nox4-produced H2O2［J］.Am J Physiol Cell Physiol，2009，296(4):C711-C723.

［30］ Crespo FL，Sobrado VR，Gomez L，et al.Mitochondrial reactive oxygen species mediate cardiomyocyte formation from embryonic stem cells in high glucose［J］.Stem Cells，2010，28(7):1132-1142.

［31］Jiang Y，Cowley SA，Siler U，et al.Derivation and functional analysis of patient-specific induced pluripotent stem cells as an in vitro model of chronic granulomatous disease［J］.Stem Cells，2012，30(4):599-611.

［32］ Zou J，Sweeney CL，Chou BK，et al.Oxidase-deficient neutrophils from X-linked chronic granulomatous disease iPS cells:functional correction by zinc finger nucleasemediated safe harbor targeting［J］.Blood，2011，117(21):5561-5572.

［33］ Seger RA.Hematopoietic stem cell transplantation for chronic granulomatous disease［J］.Immunol Allergy Clin North Am，2010，30(2):195-208.

［34］ Nelson TJ，Martinez-Fernandez A，Yamada S，et al.Repair of acute myocardial infarction by human stemness factors induced pluripotent stem cells［J］.Circulation，2009，120(5):408-416.

［35］ Yan B，Abdelli LS，Singla DK.Transplanted induced pluripotent stem cells improve cardiac function and induce neovascularization in the infarcted hearts of db/db mice［J］.Mol Pharm，2011，8(5):1602-1610.