金 珊

（長(zhǎng)春市人民醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130051）

測(cè)試洛伐他汀膠囊中洛伐他汀含量的方法分析

金 珊

（長(zhǎng)春市人民醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130051）

目的探討高效液相方法測(cè)試洛伐他汀膠囊中洛伐他汀含量的的有效方法，并對(duì)其可靠性及驗(yàn)證性進(jìn)行分析。方法采用TC-C18的色譜柱，使用流動(dòng)相為60∶40的乙腈-0.020 mol/L磷酸二氫鉀溶液，波長(zhǎng)238 cm，外標(biāo)法定量。結(jié)果洛伐他汀含量為2.56～250 mg/L間，其開(kāi)環(huán)酸含量在1.024～0.00 mg/L，二者之間具有良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為0.9998、0.9990（n=6），二者具有良好密度；洛伐他汀加樣回收率高達(dá)99.22%；在室溫環(huán)境下可維持8小時(shí)的穩(wěn)定。結(jié)論高效液相方法測(cè)試洛伐他汀具有較高的準(zhǔn)確性，用時(shí)短且操作方便，能夠?qū)β宸ニ￠_(kāi)環(huán)酸同時(shí)檢測(cè)，在洛伐他汀含量檢測(cè)中具有顯著效果。

洛伐他?。婚_(kāi)環(huán)酸；高效液相方法；含量

洛伐他汀為20世紀(jì)80年代開(kāi)始廣泛使用的新型調(diào)脂藥物，療效獨(dú)特，因此在心血管系統(tǒng)疾病的治療中廣泛使用。作為HMG-CoA還原酶抑制劑，遇水可溶解，形成-羥基酸。藥物能夠?qū)w內(nèi)的膽固醇合成產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用，促進(jìn)低密度脂蛋白受體合成，從而對(duì)冠心病及動(dòng)脈粥樣硬化產(chǎn)生顯著效果[1]。近年來(lái)對(duì)洛伐他汀檢測(cè)方法不斷增加，然而相關(guān)實(shí)驗(yàn)尚不多見(jiàn)，本次實(shí)驗(yàn)通過(guò)高效液相方法對(duì)洛伐他汀膠囊內(nèi)洛伐他汀及其開(kāi)環(huán)酸含量進(jìn)行測(cè)定，具體報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 設(shè)備與儀器：采用儀器為Agflent 1260型髙效液相色譜儀，同時(shí)使用其配套脫氣機(jī)、紫外檢測(cè)器、恒溫箱、液相色譜泵、自動(dòng)進(jìn)樣器及柱溫箱；控制系統(tǒng)為德國(guó)Chemstation化學(xué)工作站系統(tǒng)；使用瑞士梅特勒-托利多集團(tuán)生產(chǎn)的XS205電子天平；上海滬西分析儀器廠生產(chǎn)XW-80AS渦旋混合器；重慶頤洋企業(yè)發(fā)展有限公司承山AHL-2001-P痕量型分析型超純水機(jī)；采用昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn)的KQ2200B超聲波清洗機(jī)。

1.2 材料與試藥：洛伐他汀膠囊（生產(chǎn)公司：江蘇蘇中藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H19990033）使用中國(guó)藥品生物制品檢定研究院提供的洛伐他汀對(duì)照品，批號(hào)為100600-201003；汕頭市西隴化工廠有限公司生產(chǎn)的磷酸二氫鉀，分析純（批號(hào)：090307）；美國(guó)Tedw A司生產(chǎn)的乙腈，色譜純（批號(hào)：1202257）；采用自制去離子超純水，分析純?yōu)橐宜嵋阴?、鹽酸及氫氧化鈉。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件：采用美國(guó)Agilent公司生產(chǎn)的（5μm、4.6×150mm）TC-C18柱；美國(guó)Phenomenex公司生產(chǎn)的（10 μm、4 mm×3 mm）保護(hù)柱；采用流動(dòng)相為60∶40的乙腈-0.020 mol/L磷酸二氫鉀溶液，35 ℃柱溫；1 mL/min流速；波長(zhǎng)238 nm，10 μL進(jìn)樣量。

1.3.2 溶液配制方法：將乙腈5 mL加入洛伐他汀50 mg，之后注入濃度為1 mol/L氫氧化鈉溶液2.5 mL，超聲下放置30min保證溶液內(nèi)物質(zhì)完全反應(yīng)，并將純水150 mL加入，采用鹽酸將pH值調(diào)至3.5，并采用乙酸乙酯150 mL分次獲取，獲取乙酸乙脂層蒸干后得到洛伐他汀開(kāi)環(huán)酸。采用精密稱(chēng)分別取洛伐他汀50 mg、開(kāi)環(huán)酸對(duì)照品20 mg，并放置50 mL容量瓶?jī)?nèi)，注入乙腈進(jìn)行溶解，之后將乙腈進(jìn)行稀釋?zhuān)ＷC與刻度線同一水平線，搖勻得到0.4 g/L洛伐他汀開(kāi)環(huán)酸及1 g/L洛伐他汀儲(chǔ)備溶液。

1.3.3 配制供試品溶液方法：洛伐他汀膠囊10粒，天平精密稱(chēng)定后，均勻混合內(nèi)容物，并取洛伐他汀20 mg放于容量為50 mL的容量瓶?jī)?nèi)，適量乙腈，搖動(dòng)溶解洛伐他汀，之后稀釋乙腈，與刻度線同一水平，搖勻。0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，精密取濾液5 mL放置在50 mL容量瓶?jī)?nèi)，加流動(dòng)相定容至刻度線，充分搖勻后，得到供試品溶液。

取適量陰性對(duì)照液、洛伐他汀對(duì)照品溶液、供試品溶液，進(jìn)樣10 μL，對(duì)三份溶液色譜圖進(jìn)行觀察；取適量洛伐他汀及其開(kāi)環(huán)酸對(duì)照物溶液，1∶1搖勻，得到進(jìn)樣洛伐他汀及其開(kāi)環(huán)酸混合對(duì)照品溶液（含量分別為0.5、0.2 mg/L），進(jìn)樣10 μL，對(duì)不同濃度洛伐他汀及其開(kāi)環(huán)酸峰面積進(jìn)行觀察。備制（洛伐他汀40 μg/mL、其開(kāi)環(huán)酸l0 μg/mL）濃度的對(duì)照品工作溶液，備5份，進(jìn)樣10 μL，對(duì)峰面積進(jìn)行測(cè)定。在室溫下取供試品溶液，分別在0、4、6、8 h后對(duì)色譜峰進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié) 果

洛伐他汀峰的理論塔板數(shù)＞3000，陰性對(duì)照液內(nèi)未出現(xiàn)干擾峰測(cè)定，供試液與對(duì)照液內(nèi)洛伐他汀峰維持時(shí)間相同，周?chē)闯霈F(xiàn)干擾峰；洛伐他汀在2.56～250 mg/L，其開(kāi)環(huán)酸含量在1.024～0.00 mg/L范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系，橫坐標(biāo)為洛伐他汀濃度，縱面積為縱坐標(biāo)，相關(guān)系數(shù)為0.9998（n=6）；橫坐標(biāo)為洛伐他汀開(kāi)環(huán)酸濃度，縱坐標(biāo)為峰面積，相關(guān)系數(shù)0.9990（n=6）；洛伐他汀RSD值為0.19%，其99開(kāi)環(huán)酸RSD為0.44%，具有良好精密度；洛伐他汀的加樣回收率為98.98%；洛伐他汀在室溫下放置8h后，RSD數(shù)值0.49%，洛伐他汀可在室溫環(huán)境下維持8 h穩(wěn)定。

3 討 論

高效液相色譜分析是生化及分析化學(xué)中常用的方法，具有高壓、高效、高敏感度、適應(yīng)范圍廣及分析速度快等優(yōu)勢(shì)，而其色譜柱能夠循環(huán)使用，樣品不會(huì)受到破壞，極易回收，具有廣泛的使用價(jià)值[2-3]。本次試驗(yàn)中，筆者使用填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，流動(dòng)相Ⅰ為甲醇-水-磷酸，結(jié)果顯示標(biāo)準(zhǔn)品、供試品內(nèi)洛伐他汀色譜峰的純度較高，完全符合要求，同時(shí)標(biāo)準(zhǔn)品的峰值能夠與基線分離保持一致。在對(duì)樣品進(jìn)行處理時(shí)，本次試驗(yàn)采用直接處理方法，操作方法比較簡(jiǎn)單，分離效果良好，同時(shí)其基線相對(duì)穩(wěn)定，譜峰突出且尖銳，能夠得到滿(mǎn)意的測(cè)量結(jié)果。洛伐他汀能夠與體內(nèi)膽固醇合成過(guò)程中產(chǎn)生的限速酶羥甲戊二酰輔酶A還原酶產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用[4-5]，從而抑制膽固醇的合成，低密度脂蛋白受體合成明顯增加，主要對(duì)肝臟產(chǎn)生影響，在冠心病及動(dòng)脈粥樣硬化的防治中具有顯著效果[6]。本次試驗(yàn)中在對(duì)洛伐他汀含量進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，同時(shí)對(duì)其開(kāi)環(huán)酸含量進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其含量為99.99%，總之在洛伐他汀的檢測(cè)中，采用高效液相色譜法操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性高，可作為洛伐他汀膠囊質(zhì)量控制的重要手段。

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1671-8194（2014）28-0086-02