王明慧

（吉林省白城中心醫(yī)院檢驗科，吉林 白城 137000）

EDTA依賴性假性血小板減少癥的臨床分析

王明慧

（吉林省白城中心醫(yī)院檢驗科，吉林 白城 137000）

目的探討乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝血時導(dǎo)致血小板計數(shù)假性減少現(xiàn)象及避免措施。方法對采用全自動血球計數(shù)儀檢測血小板計數(shù)值異常偏低的1例標(biāo)本，進行再次血涂片，觀察血小板分布情況，對其中發(fā)現(xiàn)的涂片與計數(shù)明顯不符，進行復(fù)檢。其血細(xì)胞計數(shù)方法為手工細(xì)胞計數(shù)、末梢血涂片觀察血小板分布情況、抽取枸櫞酸鈉抗凝血。結(jié)果上述1例標(biāo)本在后三種方法復(fù)檢時血小板計數(shù)在正常范圍，與初次EDTA-K2抗凝血血細(xì)胞分析儀所測血小板計數(shù)結(jié)果明顯不符。結(jié)論EDTA抗凝劑偶爾可導(dǎo)致血小板發(fā)生聚集，引起EDTA依賴性假性血小板減少癥，產(chǎn)生的假性血小板計數(shù)減少、白細(xì)胞增多會導(dǎo)致患者臨床輔助檢查增多，嚴(yán)重時易導(dǎo)致臨床誤診、誤治。因此，PTCP應(yīng)該在臨床檢驗工作中得到廣泛重視。

血小板聚集；乙二胺四乙酸鹽（EDTA）；依賴性假性血小板減少癥

在臨床檢驗實際工作中，經(jīng)全自動血細(xì)胞分析儀進行血細(xì)胞計數(shù)時，極少數(shù)患者出現(xiàn)血小板檢測值異常偏低，臨床表現(xiàn)與檢測結(jié)果嚴(yán)重不符，采用其他方法復(fù)檢血小板數(shù)正常。為探討其發(fā)生原因，筆者對白城中心醫(yī)院血常規(guī)檢驗中遇到的1例EDTA依賴性假性血小板減少癥（EDTA-PTCP，EDTA-dependent pseudo throm-bocytopenia）患者報告分析如下，引起臨床檢驗者的注意，并準(zhǔn)確的血小板和白細(xì)胞化驗結(jié)果指導(dǎo)臨床實踐。

1 資料與方法

1.1 病例來源

患者女性，58歲，2012年11月因腦外傷來白城中心醫(yī)院神經(jīng)外科住院治療。

1.2 儀器和試劑

血細(xì)胞分析儀：日本光電MEK-8222K五分類血細(xì)胞分析儀，儀器經(jīng)全血校準(zhǔn)物校正各項指標(biāo)均正常，室內(nèi)質(zhì)控在控，雙目顯微鏡，血細(xì)胞計數(shù)板。

溶血劑、稀釋液、清洗液均為儀器配套進口試劑；1%草酸銨血小板稀釋液及白細(xì)胞稀釋液（科室自配）；EDTA-K2真空抗凝管與枸櫞酸鈉真空抗凝管；瑞氏染液。

1.3 方法

儀器法：①全血模式測定分別用EDTA-K2抗凝管和枸櫞酸鈉抗凝管抽取靜脈血并混勻，按儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程在全自動血細(xì)胞分析儀全血模式進行測定，記錄PLT與WBC值。②稀釋血液模式測定嚴(yán)格操作規(guī)程，準(zhǔn)確吸取患者無名指末梢血10 μL，加入儀器設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)量稀釋液中，混勻靜置5 min后進行稀釋模式下測定，記錄PLT與WBC值。

手工法：按第三版《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[1]，準(zhǔn)確吸取手指末梢血20 μL加入到0.38 mL草酸銨血小板稀釋液中充分混勻，待完全溶血后再次混勻，取血小板懸液1滴沖入計數(shù)池內(nèi)，靜置10～15 min后，高倍鏡計數(shù)血小板數(shù)，同樣的方法手工計數(shù)白細(xì)胞數(shù)。

血涂片瑞氏染色觀察：分別取EDTA-K2抗凝血與手指末梢血制作血涂片，經(jīng)瑞氏染色，在油鏡下觀察血小板形態(tài)。

2 結(jié) 果

此患者入院初次采集EDTA-K2抗凝血查血常規(guī)，結(jié)果PLT低于正常值，與臨床醫(yī)師溝通了解到患者無皮膚黏膜出血點、紫癜等明顯出血征象、肝脾淋巴結(jié)不大，隨后對此患者分別用不同抗凝劑重新采集全血、稀釋血上機復(fù)查及手工計數(shù)，同時檢測凝血功能、紅細(xì)胞沉降率、肝腎功能等項目，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在血球計數(shù)儀分析時再用EDTA抗凝血時血小板檢測值仍然明顯偏低，用非EDTA抗凝血方法復(fù)檢血小板計數(shù)卻正常，其他的檢測項目也未見明顯異常結(jié)果。采用血涂片法直接檢測末梢血表明血小板數(shù)量和分布未見異常，而血涂片直接檢測EDTA抗凝血可見血小板明顯聚集成簇，甚至成片，單獨存在的血小板極少見。由此可見，血小板計數(shù)假性減少的原因為大量血小板聚集在一所致，并非機體功能異常所致疾病引起。

三種方法對該患者的檢測結(jié)果為：EDTA抗凝之血液標(biāo)本采用血細(xì)胞分析儀檢測WBC總數(shù)為25.4×109/L，血小板為44×109/L；顯微鏡下直接檢查枸櫞酸鈉抗凝之血液標(biāo)本檢測WBC總數(shù)為19.4×109/L，血小板為230×109/L；枸櫞酸鈉抗凝之血液標(biāo)本采用血細(xì)胞分析儀檢測WBC總數(shù)為18.3×109/L，血小板為182×109/L。

3 討 論

通常情況下，EDTA并不影響血液中血細(xì)胞的形態(tài)和血小板聚集性，國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會（ICSH）將EDTA作為應(yīng)用血細(xì)胞分析儀檢測血細(xì)胞數(shù)量的常用抗凝劑，并被臨床檢驗工作廣泛推廣應(yīng)用。但對于個案個體來說，EDTA可增加其血小板的聚集性，由此出現(xiàn)血小板數(shù)量降低的假象。1969年，Gowland首次報道了由于使用EDTA抗凝所致血小板聚集后血小板假性減少的病例，臨床檢驗者關(guān)注這一現(xiàn)象，并對異常者采用他法進行血小板計數(shù)檢測。

EDTA-K2抗凝血涂片可見血小板聚集現(xiàn)象或與單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞有相互粘連及被吞噬現(xiàn)象，也可見血小板圍繞淋巴細(xì)胞呈現(xiàn)衛(wèi)星現(xiàn)象。EDTA作為血細(xì)胞分析的常用抗凝劑有很大的優(yōu)點，但對有些患者或者健康人血液的血小板有一定的聚集作用，造成假性血小板減少，分析原因有以下兩點：①EDTA-K2可使血產(chǎn)生免疫介導(dǎo)，出現(xiàn)冷抗血小板抗體，血小板因出現(xiàn)抗原抗體反應(yīng)而發(fā)生凝集現(xiàn)象；與血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa直接作用的自身抗Fc端結(jié)合于淋巴細(xì)胞或單核細(xì)胞膜上Fc受體，造成衛(wèi)星現(xiàn)象的出現(xiàn)[2-3]。②EDTA-K2能促使血小板活化并改變其形態(tài)，這改變了血小板膜表面某種隱匿性抗原的表位構(gòu)象，改變后的血小板與血漿中的自身抗體結(jié)合后，細(xì)胞膜中能活化血小板纖維蛋白原受體的某些物質(zhì)被激活，導(dǎo)致血小板與纖維蛋白原聚集成團[4-5]，這兩種原因在表象上都表現(xiàn)為血小板的體積增大。目前，血液分析儀多采用電阻抗法為原理進行血細(xì)胞分類和計數(shù)，血細(xì)胞為相對非導(dǎo)電性質(zhì)，懸浮在電解質(zhì)溶液中的顆粒在通過計數(shù)小孔時可引起電阻的變化，從而對血細(xì)胞進行計數(shù)和體積測定。由于EDTA-K2可引起血小板的聚集或發(fā)生衛(wèi)星現(xiàn)象，分析儀不能識別凝集的血小板，導(dǎo)致血小板計數(shù)偏低，當(dāng)血小板聚集成堆與白細(xì)胞體積接近時，可被分析儀當(dāng)作白細(xì)胞進行計數(shù)，這就造成了血小板假性減少和和白細(xì)胞假性增多。

為確保血小板計數(shù)的準(zhǔn)確性，應(yīng)采用不同的方法復(fù)查對結(jié)果有疑問的血樣：①經(jīng)瑞氏染色后的血涂片在顯微鏡下直接觀察EDTA抗凝血標(biāo)本的血小板分布情況，如大量聚集或分布并不減少者，應(yīng)作為可疑病例進一步復(fù)查。②換用枸櫞酸類等非EDTA抗凝劑復(fù)查血小板計數(shù)，如果所得結(jié)果明顯差異于與手工結(jié)果，不能向臨床發(fā)放檢驗報告書，應(yīng)進一步確認(rèn)。但EDTA致血小板聚集原因基本可以排除，對診斷EDTA-PTCP有一定的幫助。

目前，手工法用于評價血小板計數(shù)準(zhǔn)確性的“參考方法”，但其精密度較差，血小板與某些非特異性顆粒在鏡下往往難以辨清，準(zhǔn)確性相對不夠高。盡管如此，該方法仍不失為一種方便有效的血小板異常結(jié)果復(fù)檢的方法。

EDTA-PTCP可見于正常人，但多伴有癌癥、肝病、肺心病、自身免疫性疾病和原因不明的疾病。其發(fā)生率極低（在0.07%～1.00%），住院患者的發(fā)生率為0.1%～2.0%，且在人健康或患病時均可能出現(xiàn)[6]。但一旦發(fā)生，會導(dǎo)致臨床進行大量的進一步檢查。所以對無出血癥狀但血小板減少者，一定要用不同方法進行復(fù)查，以防誤診誤治，應(yīng)該受到臨床醫(yī)務(wù)工作者廣泛重視。要告知EDTA-PTAP的確診患者，以后血常規(guī)檢查時抗凝劑不得使用EDTA鹽，以免造成不必要的檢查和治療。

[1] 葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版.南京:東南大學(xué)出板社,2006.

[2] Nicola MD,Maurizia BD.EDTA-dependent Pseudo thrombocytopenia association with Antiplateletand Antiphospholipid Antibodies [J].Am J Clin Pathol,2002,103(1):10.

[3] 宓慶梅,施巍宇.EDTA依賴性假性血小板減少癥1例[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2004,27(10):719.

[4] Yamaguchi M,Mayumi M,Kasuya T.A Patient with EDTA～dependent pseudo thrombocytopenia who underwent clipping surgery for a ruptured aneurysm.Excerpta Med Section 25[J].Hematol, 1998,68(2):93.

[5] 高瓊.EDTA鹽依賴性血小板減少癥1例分析[J].中國誤診學(xué)雜志,2012,12(3):584.

[6] Bragnani G,Bianconcini G,Brogna R,et al.Pseudo thrombocytopenia.Clinical Comment on 37 Cases[J].Minerva Med,2001,92(1): 13-17.

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1671-8194（2014）13-0317-02