陳文麗

（廣東省惠州市惠東縣稔山衛(wèi)生院，廣東 惠州 516347）

地中海貧血產(chǎn)前篩查及基因診斷的研究

陳文麗

（廣東省惠州市惠東縣稔山衛(wèi)生院，廣東 惠州 516347）

目的調(diào)查分析本地區(qū)孕婦地中海貧血發(fā)病率、基因類型，探尋地中海貧血產(chǎn)前可靠的診斷證據(jù)。方法對2009年3月至2013年2月4250例在我院所有進(jìn)行產(chǎn)前檢查的孕婦中開展廣泛的血液學(xué)檢查，對檢測陽性的患者進(jìn)行基因檢查，并對孕婦的配偶進(jìn)行篩查。對夫妻雙方都患有同種類型地中海貧血的進(jìn)行產(chǎn)前診斷，懷疑為β地中海貧血的夫妻進(jìn)行β基因突變測序、比對，探究未知的突變基因。結(jié)果4250例孕婦中確診地中海貧血有248例，發(fā)病率為5.8%，其中α地中海貧血有130例，發(fā)病率3.05%；β地中海貧血患者有118例，發(fā)病率2.73%。產(chǎn)前診斷重型地中海貧血患兒8例。血液學(xué)檢測RBC、Hb、MCV、RDW、HbA2在α、β、α/β和β/β間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論本地區(qū)α地中海貧血發(fā)病率比α地中海貧血高，血液學(xué)指標(biāo)中的紅細(xì)胞參數(shù)以及血紅蛋白定量檢測是篩查本病的重要指標(biāo)。通過對孕婦進(jìn)行地中海貧血的產(chǎn)前篩查，可以確診重癥患兒來及時終止妊娠，避免重癥患兒的出生。

地中海貧血；產(chǎn)前篩查；基因診斷；治療研究

地中海貧血（Thalassemia）是一種嚴(yán)重影響人類健康和患兒出生質(zhì)量的溶血性疾病。其病理基礎(chǔ)為珠蛋白基因缺陷從而造成珠蛋鏈合成受限，使得血紅蛋白四聚體的α-鏈/α-鏈?zhǔn)Ш猓瑥亩鴮?dǎo)致紅細(xì)胞破裂，發(fā)生溶血[1]。全球約有隱形攜帶者18億，每出生100萬/年基因缺陷患兒中，表現(xiàn)為重癥溶血性貧血重癥患兒占20萬以上[2,3]。為提高我院及本地區(qū)新生兒圍生期出生質(zhì)量，探討以預(yù)防主的防治方案，實現(xiàn)優(yōu)生，我們對本院篩查的結(jié)果進(jìn)行了分析總結(jié)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

2009年3月至2013年2月在我院所有進(jìn)行產(chǎn)前檢查的孕婦4250例，紅細(xì)胞指標(biāo)異常并排除缺鐵及其他貧血疾病。對孕婦進(jìn)行血常規(guī)和血紅蛋電泳分析，并對248例地貧表型陽性者進(jìn)基因檢測。

1.2 研究方法用日本System KX-21自動血細(xì)胞分析儀及其配套的稀釋液和溶血素試劑測定，實驗前嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行質(zhì)控，標(biāo)本為枸椽酸鈉靜脈抗凝血1 mL。應(yīng)用美國Helena公司的Spifecombo血紅蛋白電泳儀，使用與儀器配套的Spife ALKAL I NE（pH816）Hb瓊脂凝膠板。掃描儀是Epson公司Quick2scan2000。篩查血紅蛋白（Hb）、平均血紅蛋白（MCH）、紅細(xì)胞數(shù)（RBC）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）、紅細(xì)胞體積分布寬度（RDW），測定血清鐵蛋白、血紅蛋白A2（HbA2）及抗堿血紅蛋白（HbF）的含量。Hb＜110 g/L、MCH＜25 pg、MCV＜80 fl、RBC/MCV＞6、RBC/Hb＞27.7、RDW＞15.0%，血清鐵蛋白正常，示地中海貧血篩查陽性。血紅蛋白電泳HbA2＜2.5%，示A地貧表型陽性；HbA2/3.5%或/和HbF＞2%，示β地貧表型陽性；2.5%＜HbA2＜3.5%。

1.3 基因診斷

采用益生堂生物企業(yè)有限公司提供α、β地貧基因診斷試劑盒，按說明檢測正常α基因和-SEA、-A3.7、-A4.23種常見缺失型α地中海貧血和HbCS、HbQS、HbWS、AvCD30、AvCD31和AvCD596種非缺失型α地貧以及17種β地中海貧血：CD41-42（-TCTT）、IVS-2-654（CyT）、TATAbox-28（AyG）、CD71-72（+A）、CD17（AyT）、CD26（GyA）、CD31（-C）、CD27-28（+C）、IVS-?-1（GyT）、CD43（GyT）、TATAbox-32（CyA）、TATAbox-30（TyC）、CD14-15（+G）、CAP+40～+43（-AACC）、TATAbox-29（AyG）、起始密碼子Int（TyG）、IVS-?-5（GyC）；試劑盒未診斷的篩查指標(biāo)疑似β-地中海貧血的病例，進(jìn)行β基因的突變熱點測序，設(shè)計引物Beg-F1：5c-CAGGTACGGCTGTCATCA-3c；IV654-R1：5c-AGCGAGCTTAGTGATACTTGTG-3c，按96 e 3 miny（96e30s，60e45s，72e2min）@30循環(huán)y72e10min擴(kuò)增β基因的3個外顯子和2個內(nèi)含子共1613 bp，送上海英駿公司進(jìn)行正、反向測序，Accelrys License Pack進(jìn)行核酸序列比對。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié) 果

4250例孕婦中確診地中海貧血有248例，發(fā)病率為5.8%，其中α地中海貧血有130例，發(fā)病率3.05%；β地中海貧血患者有118例，發(fā)病率2.73%。產(chǎn)前診斷重型地中海貧血患兒8例。血液學(xué)檢測RBC、Hb、MCV、RDW、HbA2在α、β、α/β和β/β間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。對248例地中海貧血患者或基因攜帶者進(jìn)行基因診斷，其中α地中海貧血130例β地中海貧血118例，檢出β基因IVS-2nt654（CyT）基因突變50例，CD41-42（-CTTT）基因突變41例，TATAboxnt-28（AyG）突變14例，CD17（AyT）突變13例，CD71-72（+A）突變2例，CD27-28（+C）突變2例，CD43（GyT）突變2例，TATAboxnt-29（AyG）突變1例，IVS-1nt1（GyT）突變1例，BE2例，結(jié)果不明6例。

3 討 論

地中海貧血按受累血紅蛋白鏈的位置分α、β型地中海貧血，篩查指標(biāo)RBC、MCV、RDW、HbA2能反映基因型與表型之間的關(guān)系。MCV＜80f，l80%為缺鐵性貧血與地中海貧血，是篩查首選指標(biāo)[3-5]。

地中海貧血目前尚沒有很好的治療方法，因而避免重癥地中海貧血患兒的出生是控制本病的最佳方法。預(yù)防計劃早已在地中海地區(qū)（意大利、希臘、塞浦路斯和撒丁尼亞島等）取得了較好成績[6]。由于地中海貧血在深圳市發(fā)病率高，開展有關(guān)地中海貧血的宣傳教育和孕婦篩查對指導(dǎo)優(yōu)生。本研究中調(diào)查了地中海貧血有248例，發(fā)病率為5.8%，其中α地中海貧血有130例，發(fā)病率3.05%；β地中海貧血患者有118例，發(fā)病率2.73%。產(chǎn)前診斷重型地中海貧血患兒8例。血液學(xué)檢測RBC、Hb、MCV、RDW、HbA2在α、β、α/β和β/β間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。對指導(dǎo)本地區(qū)地中海貧血篩查及避免重癥患兒出生有重要意義。

[1] Sivestrom E,Bianco I.A highly cost effective method of mass screening for thalassaemia [J].Br Med J,1983,286(6370):1007-1009.

[2] 王永才.血液病確診化驗診斷[M].大連:大連出版社,1994:173.

[3] 鄧家棟,楊崇禮,楊天楹.血液病實驗室診斷[M].天津:天津科技出版社,1985:312.

[4] 張之南.血液病診斷標(biāo)準(zhǔn)及療效標(biāo)準(zhǔn)[M].天津:天津科技出版社,1991:44.

[5] Zhang JZ,Xu XM,Ma WF,et al.Arapid reverse dotblot assay for all 18B-thalassemia in Chinese population[J].J Med Coll PLA,1993, 8(3):213.

[6] 廣東省血液病協(xié)作組.廣東省253267人的血紅蛋白病調(diào)查研究[J].廣東醫(yī)學(xué),1985,6(1):4.

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1671-8194（2014）13-0277-02