朱金鳳 吳 萍

（青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院，西寧，810010）

酸脂清膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型IL-10和IL-1Ra的影響

朱金鳳 吳 萍

（青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院，西寧，810010）

目的：通過(guò)觀察酸脂清膠囊的不同提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型IL-10和IL-1Ra的影響，研究酸脂清膠囊的抗炎機(jī)制和對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎軟骨破壞的影響，進(jìn)一步指導(dǎo)臨床用藥。方法：酸脂清膠囊不同提取物（水提物，醇提物）給大鼠灌胃7d后，以尿酸鈉晶體造成大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型，分別在造模后9 h和12 h隨機(jī)抽取8只大鼠測(cè)量踝關(guān)節(jié)直徑，下腔靜脈取血Elisa檢測(cè)IL-10和IL-1Ra的量。結(jié)果：三個(gè)藥物組的IL-10和IL-1Ra較模型組均有不同程度的升高，但水提組升高最為明顯（P＜0.05）。結(jié)論：酸脂清膠囊通過(guò)提高IL-10和IL-1Ra的水平，達(dá)到抗炎、保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨的作用，尤以水提組為優(yōu)。

酸脂清膠囊；急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎；IL-10；IL-1Ra

急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是一種嚴(yán)重危害人類健康的代謝性疾病，急性發(fā)作主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)劇烈紅腫疼痛，病情多持久遷延，嚴(yán)重的滑膜炎癥伴隨痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎反復(fù)發(fā)作會(huì)導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨破壞。酸脂清膠囊是青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院文紹敦教授開(kāi)發(fā)的中藥膠囊制劑，臨床研究表明酸脂清膠囊對(duì)痛風(fēng)及痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎有良好的治療作用。大量炎癥因子參與疾病的發(fā)展導(dǎo)致嚴(yán)重的關(guān)節(jié)炎癥和軟骨破壞，但也有一部分炎癥因子有拮抗炎癥的作用，其中炎癥因子IL-10和IL-1Ra有明顯的抗炎及關(guān)節(jié)保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)酸脂清膠囊對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠IL-10和IL-1Ra的影響，研究其抗炎及關(guān)節(jié)保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 二級(jí)Wistar大鼠（200±20）g，雄性，蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.2 試驗(yàn)藥物 酸脂清提取物的制備：按大黃100 g，姜黃33 g，土茯苓27 g的比例入藥，采用清水煎煮和95%乙醇索氏提取、濃縮后，稀釋成0.7 g/mL（生藥折合量）的溶液。羧甲基纖維素鈉（蒸餾水配制，2%）溶液中加入研細(xì)的秋水仙堿片制成5 mg/L的混懸劑。

1.1.3 主要試劑 尿酸鈉（批號(hào)：20120827，上海江萊生物科技有限公司提供），秋水仙堿片（批號(hào)：120401，通化盛和藥業(yè)股份有限公司提供），羧甲基纖維素鈉（批號(hào)：20120915，天津市百世化工有限公司提供），磷酸緩沖鹽溶液（緩沖液，Phosphate Buffersaline，PBS）為自行配制，高溫高壓滅菌備用。

1.1.4 主要設(shè)備 索氏提取器，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-3000（上海亞榮生化儀器廠），恒溫水浴鍋，低溫冰箱（-80℃），TG16-WS高速離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司），恒溫箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司），酶標(biāo)定量測(cè)定儀（深圳雷杜生命科學(xué)有限公司），游標(biāo)卡尺（桂林可立德量器有限公司）。

1.1.5 Elisa試劑盒（48T） IL-10（批號(hào)：JFCX2876）、IL-1Ra（批號(hào)：JFCX1321）北京久峰潤(rùn)達(dá)生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組及給藥 按組間均衡原則，將80只大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組（秋水仙堿組）、水提酸脂清組、醇提酸脂清組，每組16只。空白組和模型組分別給予生理鹽水灌胃、三個(gè)藥物組分別給予秋水仙堿和酸脂清膠囊的水提物和醇提物10 mL/kg，2次/d，共7 d。

1.2.2 尿酸鈉晶體（尿酸鈉，Monosodium Urate，MSU）局部注射誘導(dǎo)大鼠急性關(guān)節(jié)炎模型 模型組及各藥物組于灌胃第7天最后一次灌胃0.5 h后大鼠抓握固定后測(cè)量右踝關(guān)節(jié)直徑，并選定踝關(guān)節(jié)外側(cè)后方為穿刺點(diǎn)向關(guān)節(jié)腔注入20 mg/mL MSU溶液100μL，誘導(dǎo)急性關(guān)節(jié)炎模型，空白組注射等體積的PBS。

1.2.3 樣本采集 造模9 h后各組隨機(jī)抽取實(shí)驗(yàn)大鼠8只，以20%烏拉坦0.4 mL/100g腹腔麻醉，測(cè)量踝關(guān)節(jié)直徑，開(kāi)腹下腔靜脈取血，存于普通真空采血管中，靜置0.5 h后3000 r/min離心10 min，取血清分裝于1.5 mL離心管中，-20℃保存。12 h后對(duì)剩余大鼠同樣進(jìn)行麻醉后測(cè)量關(guān)節(jié)直徑、取血。

1.2.4 指標(biāo)檢測(cè) IL-10、IL-1Ra均按照實(shí)試劑盒說(shuō)明書操作進(jìn)行濃度檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 各檢測(cè)指標(biāo)組間采用單因素方差分析，各指標(biāo)9 h和12 h之間的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 一般情況 除空白組外，造模后大鼠右踝關(guān)節(jié)均不同程度的紅腫、活動(dòng)受限，部分出現(xiàn)三足行走現(xiàn)象。大鼠造模前后關(guān)節(jié)直徑變化見(jiàn)表1。

表1 造模前后大鼠關(guān)節(jié)直徑變化（mm，±s）

表1 造模前后大鼠關(guān)節(jié)直徑變化（mm，±s）

注：與空白組比較，△P＜0.05；與模型組比較，▲P＜0.05，與水提組比較，□P＜0.05，與醇提組比較，■P＜0.05。

時(shí)間空白組模型組水提組醇提組秋水仙堿組9 h 0.08±0.05 0.85±0.25△0.5±0.26△▲0.62±0.18△▲0.67±0.2△▲□12 h 0.07±0.05 0.91±0.17△0.71±0.25△▲0.75±0.25△▲1.02±0.35△□■t 0.114 4.386-0.303-0.627-0.350 P 0.916 0.012 0.313 0.548 0.548

2.2 酸脂清膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠痛風(fēng)關(guān)節(jié)炎模型IL-10和IL-1Ra的影響 造模9 h、12 h后，各組的IL-10和IL-1Ra均有不同程度的改變（見(jiàn)表2），模型組因炎癥反應(yīng)抗炎因子濃度下降，各藥物組IL-10和IL-1Ra有不同程度的升高，部分藥物組IL-10和IL-1Ra濃度可以超過(guò)空白組（P＜0.05），其中以水提組IL-10和IL-1Ra濃度最高。

表2 IL-10和IL-1Ra檢測(cè)結(jié)果（ng·L-1，±s）

表2 IL-10和IL-1Ra檢測(cè)結(jié)果（ng·L-1，±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05；與水提組比較，▲P＜0.05，與醇提組比較，□P＜0.05。

組別IL-10 9 h 12 h P IL-1Ra 9 h 12 h P 00 59.395±3.654 0.987模型組44.376±4.837 45.167±4.987 0.704 52.618±8.896 51.065±6.343 0.805水提組64.791±9.175*△66.503±13.929*△0.824 71.276±10.21*△71.680±6.176*△0.942醇提組48.781±9.767▲50.154±9.475▲0.827 69.000±5.488△65.839±6.131△0.415秋水仙堿組61.379±8.561*△□51.355±8.424▲0.099 71.721±7.687*△64.290±10.598△空白組51.111±3.600 51.351±3.633 0.938 59.238±3.7 0.240

3 討論

3.1 酸脂清膠囊對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)炎癥的影響體外實(shí)驗(yàn)表明細(xì)胞因子如IL-4、IL-10可抑制促炎癥性細(xì)胞因子的活性[1]?；そM織培育實(shí)驗(yàn)表明IL -10可抑制IL-1β和TNF-α的生成，影響促炎性細(xì)胞因子mRNA的穩(wěn)定性，使其水平下降[2]，還可增加由脂多糖刺激的單核細(xì)胞IL-1Ra的生成。IL-1Ra為滑膜細(xì)胞分泌的IL-1受體的天然拮抗劑，是一種IL-1與IL-1R相互結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)性抑制物，可抑制IL-1β的信號(hào)傳遞，是IL-1有效的拮抗劑[3-4]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示酸脂清膠囊提取物可明顯升高模型大鼠血IL-1Ra和IL-10的濃度，表明酸脂清膠囊可通過(guò)升高血IL-1Ra和IL-10濃度發(fā)揮良好的抗炎作用，其中水提物效果較好。

3.2 酸脂清膠囊對(duì)關(guān)節(jié)軟骨破壞的影響 多種細(xì)胞因子可多方向調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞功能，IL-10是一種抑制或阻止軟骨細(xì)胞分解的細(xì)胞因子[5-7]，除可抑制直接破壞軟骨的IL-1[8]和TNF等炎性細(xì)胞因子的合成，還可抑制軟骨細(xì)胞NOS和MMPs的表達(dá)[9]，抑制滑膜組織中的組織蛋白酶K、骨性蛋白配體等[10]，從而阻止軟骨和關(guān)節(jié)破壞，同時(shí)它還提高I型膠原蛋白的合成水平，對(duì)關(guān)節(jié)軟骨有保護(hù)和修復(fù)作用[11-12]。IL-1Ra能特異性地抑制T細(xì)胞表面IL-1R與IL-1結(jié)合[13]，可抑制關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡[14]，在關(guān)節(jié)炎中起重要的關(guān)節(jié)保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示痛風(fēng)模型組IL -1Ra和IL-10濃度較其余各組顯著降低，說(shuō)明痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)作時(shí)軟骨保護(hù)機(jī)制降低。酸脂清膠囊提取物可顯著升高血IL-1Ra和IL-10的濃度，Zhang等[15]使用基因轉(zhuǎn)染的手段把IL-1Ra基因注射到兔膝關(guān)節(jié)，使IL-1Ra的表達(dá)量增多，結(jié)果觀察到了關(guān)節(jié)軟骨損傷的減輕，故說(shuō)明酸脂清膠囊有良好的關(guān)節(jié)軟骨保護(hù)作用，其中水提物作用較為明顯。

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（2013-05-22收稿 責(zé)任編輯：徐暉）

The influence of Suanzhiqing Capsules on IL-10 and IL-1Ra in Rats M odel w ith Acu te Gouty Arthritis

Zhu Jinfeng，Wu Ping
（Qinghai University，Qinghai810010，China）

Objective：To observe the effects of differentextractions of Suanzhiqing capsules on ratswith acute gouty arthritis.To study on the anti-inflammation mechanism and effect on cartilage damages in acute gouty arthritis rats.Methods：Water extractions and ethanol extractions of Chinesemedicines Suanzhiqing capsules were administrated intragastrically to the model rats.Seven days later，the ratswere given uric acid sodium to cause acute gouty arthritis.And after 9 hours and 12 hours，eight ratswere randomly selected each time in each group tomeasure the diameter of the ankle joint，and the contents of IL-1and IL-1Ra through Elisa method on the blood taken from inferior vena cava.Results：The level of IL-10 and IL-1Ra in themedicine groups were increased to some extent compared with the control group.Themost significant increase was observed in the water extraction group.Conclusion：Suanzhiqing capsules can raise the level of IL-10 and IL-1 to cure inflammation and protect articular cartilage，especially with itswater extraction group.

Suanzhiqing capsules；Acute gouty arthritis；IL-10；IL-1Ra

R243；R684.3

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.01.028

2012年度青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院中青年教師科研基金團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（編號(hào)：2012-KYT-01）

朱金鳳，E-mail：814043555＠qq.com