[摘要] 目的 運用高效液相色譜法測定頭孢哌酮鈉原料藥中乙二胺四乙酸二鈉的含量。 方法 采用依利特ODS C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以pH 3.4醋酸鹽緩沖液及乙腈為流動相，進行梯度洗脫；流速1.5 mL/min；檢測波長254 nm；柱溫40℃。 結(jié)果 EDTA-2Na的濃度與峰面積在25.23～75.68 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：Y=6.5401X +5.4383，r=0.9999；平均回收率97.7%，RSD為1.0%。 結(jié)論 該方法可行，對頭孢哌酮鈉的質(zhì)量控制有一定的意義。

[關(guān)鍵詞] 高效液相色譜法；梯度洗脫；頭孢哌酮鈉；乙二胺四乙酸二鈉

[中圖分類號] R927 [文獻標(biāo)識碼] B [文章編號] 2095-0616（2013）10-102-02

頭孢哌酮鈉是日本富山化學(xué)工業(yè)公司研制開發(fā)的第三代頭孢菌素，1981年上市，在國外通過輝瑞公司銷售。頭孢哌酮鈉是我國國家基本藥物，與其他第三代頭孢菌素相比具有抗菌譜廣、抗菌作用強、毒性低、療效好、過敏反應(yīng)少等優(yōu)點，所以從上市以來，在臨床上得到廣泛的應(yīng)用。我公司在生產(chǎn)頭孢哌酮鈉過程中，用乙二胺四乙酸二鈉作為絡(luò)合劑，查閱相關(guān)文獻得知，但EDTA-2Na易與鈣螯合，長期大劑量使用或靜脈注射速度過快，乙二胺四乙酸二鈉會與血液及骨骼中的鈣形成水溶液螯合物引起低血鈣癥或骨鈣流失，為確保其臨床用藥安全性，我們對產(chǎn)品中殘留的二乙胺四乙酸二鈉進行定量研究[1-2]。本實驗參照文獻[3-9]采用高效液相梯度洗脫法測定其中乙二胺四乙酸二鈉的含量，操作簡便、快速、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，并不受其他成分的干擾，可用于本產(chǎn)品中乙二胺四乙酸二鈉的含量測定。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

美國安捷倫1200型高效液相色譜儀，Chemistation 色譜工作站；BP211D型萬分之一電子分析天平，德國賽多利斯，科學(xué)儀器（北京）有限公司。頭孢哌酮鈉樣品（由珠海保稅區(qū)麗珠合成制藥有限公司提供，批號為1004001、1004002、1004003）；乙二胺四乙酸二鈉（分析純，天津市福晨化學(xué)試劑廠提供）；水為注射用水；無水醋酸鈉（分析純，天津市廣成化學(xué)試劑有限公司）；冰醋酸（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱為依利特ODS C18柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；柱溫為40℃；流動相A為pH 3.4醋酸鹽緩沖液（取醋酸鈉0.68 g，冰醋酸5.8 g， 加水稀釋成1000 mL，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至3.4），流動相B為乙腈；流速為1.5 mL/min；檢測波長為254 nm；進樣量為20 μL。按表1進行線性梯度洗脫。在此條件下，乙二胺四乙酸二鈉色譜峰與相鄰成分均可達到基線分離，見圖1。

1.2.2 溶液制備 （1） 對照品溶液的配制：精密稱取EDTA對照品50.00 mg，置于100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液；精密量取對照品儲備液5 mL，置50 mL容量瓶中，先加5 mL的1%硫酸銅溶液，再用水稀釋至刻度，搖勻。（2）供試品溶液的制備：精密稱取頭孢哌酮鈉樣品50.00 mg，置50 mL容量瓶中，先加5 mL的1%硫酸銅溶液使溶解，再用水稀釋至刻度，搖勻。

2 結(jié)果

2.1 方法學(xué)考察

2.1.1 線性關(guān)系的考察 取EDTA-2Na對照品適量，加水溶解并定量稀釋制成每1毫升中含100 μg的溶液，作為線性母液。分別取線性母液5.0 mL、8.0 mL、10.0 mL、12.0 mL、15.0 mL置20 mL容量瓶中；加水稀釋至刻度，搖勻，即得線性Ⅰ～Ⅴ溶液。按“1.2.1項”色譜條件精密進樣20 μL注入液相色譜儀，測定峰面積，以EDTA濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，進行線性回歸，回歸方程為：Y =6.5401X + 5.4383，r=0.9999，結(jié)果表明，EDTA-2Na在25.23 μg/mL～ 75.68 μg/mL范圍內(nèi)濃度與峰面積線性關(guān)系良好。

2.1.2 精密度試驗 精密吸取EDTA-2Na對照品溶液，按“1.2.1項”色譜條件進樣，重復(fù)進樣5次，記錄所測量色譜的峰面積，得出EDTA峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值為1.30%，實驗結(jié)果表明，使用高效液相色譜法對乳酸鈉的含量進行檢測具有良好的精密度。

2.1.3 穩(wěn)定性試驗 取對照品溶液在5℃條件下放置，分別于0、2、4、6、8 h進樣，以EDTA峰面積計算，RSD值為1.3%，表明對照品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.4 加樣回收率試驗 精密稱取EDTA對照品50.50 mg，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液；精密稱取已知EDTA-2Na殘留含量的本品（批號1004001，EDTA-2Na殘留未檢出）50.01 mg、50.17 mg、50.28 mg，置50 mL容量瓶中，分別加入上述對照品貯備液4 mL、5 mL、6 mL，再分別加5 mL的1%硫酸銅溶液，最后用水定容至刻度；分別制成高、中、低3個濃度的供試品溶液，按“1.2.1項”色譜條件進樣，每個濃度下測試3次，計算EDTA的平均回收率（n=9）為97.7%，RSD=1.0%， 見表2。

2.1.5 檢測限和定量限 取EDTA對照品溶液，逐步稀釋，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，按S/N=3（噪音高度的3倍）計算檢測限；按S/N=10（噪音高度的10倍）計算定量限。結(jié)果EDTA的檢測限為0.0238 μg/mL；定量限0.0595 μg/mL。

2.2 樣品測定

取不同批次的頭孢哌酮鈉樣品共3批， 按“1.2.2項”方法制備供試品溶液，按“1.2.1項”色譜條件進樣， 測定EDTA-2Na的含量，見表3。

3 討論

乙二胺四乙酸二鈉含量測定多采用薄層分析、滴定法和比色法，由于這些方法專屬性差、選擇性差，故考慮采用專屬性較高的HPLC法。在本實驗中，我們通過較全面的方法學(xué)驗證，建立了一種梯度反相HPLC測定法，在該色譜系統(tǒng)中，色譜峰保留時間適宜，峰形良好，重現(xiàn)性好，該方法用于測定頭孢哌酮鈉原料藥中乙二胺四乙酸二鈉的含量，準(zhǔn)確、可靠。

[參考文獻]

[1] 刁巖忠，韓繼永，陳祥峰.HPLC法測定注射用泮托拉唑鈉中乙二胺四乙酸二鈉的含量[J].藥物分析雜志，2011，31（2）：282-284.

[2] 韓繼永，張秋香，袁玉，等.反相高效液相色譜法測定注射用奧美拉唑鈉中乙二胺四乙酸二鈉含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2010，29（11）：1493-1495.

[3] 耿志旺，劉蔚，劉茜，等.HPLC法測定丙泊酚注射液中乙二胺四乙酸二鈉含量[J].藥物分析雜志，2011，31（3）：586-588.

[4] 屈蓉，錢桂英，陳佳.反相離子對高效液相色譜法測定鹽酸林可霉素注射液中乙二胺四乙酸二鈉的含量[J].藥學(xué)與臨床研究，2012，20（4）：372-374.

[5] 薛琦，楊龍華.反相離子對高效液相色譜法測定混懸滴眼液中乙二胺四乙酸二鈉含量[J].中國藥業(yè)，2012，21（1）：24-25.

[6] 雒麗紅，徐英，高雪軍，等.HPLC法測定病毒性疫苗中EDTA二鈉殘余量[J].微生物學(xué)免疫學(xué)進展，2010，38（1）：55-59.

[7] 鄭睿行，張旭，方芳，等.高效液相色譜法測定醬腌菜制品中EDTA殘留量[J].中國食品添加劑，2011，105（2）：212-219.

[8] 呂曉華，文紅，許紅琴.高效液相色譜法測定板栗罐頭中乙二胺四乙酸二鈉的含量[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2009，19（3）：517-518.

[9] 李增禮，周樂春，趙輝，等.高效液相色譜法測定重組人干擾素α-2b注射液中乙二胺四乙酸二鈉含量[J].生物技術(shù)通訊，2012，23（3）：419-422.

（收稿日期：2013-04-18）