[摘要] 目的 探討定期CT掃描篩查發(fā)現(xiàn)的非小細(xì)胞肺癌患者的腫瘤內(nèi)分泌情況。 方法 回顧性研究非小細(xì)胞肺癌患者的臨床資料，分為觀察組（通過定期接受CT掃描篩查發(fā)現(xiàn)病變）和對照組（未定期接受CT掃描），檢測患者腫瘤組織中VEGFA、VEGFB及其受體VEGFR1的mRNA和蛋白水平，并通過單因素回歸分析腫瘤內(nèi)分泌指標(biāo)與腫瘤TNM分期的相關(guān)性。 結(jié)果 觀察組患者腫瘤組織中VEGFA、VEGFB、VEGFR1的蛋白和mRNA含量明顯低于對照組，且VEGFA、VEGFB、VEGFR1的水平與TNM分期呈正相關(guān)。 結(jié)論 多層螺旋CT早期診斷的非小細(xì)胞肺癌患者體內(nèi) VEGFA、VEGFB、VEGFR1的含量較低，TNM分期較好，對于疾病的早期診斷和治療具有積極意義。

[關(guān)鍵詞] 非小細(xì)胞肺癌；CT掃描；腫瘤內(nèi)分泌

[中圖分類號] R734.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）10-53-03

肺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，但是由于在疾病發(fā)生和發(fā)展的早期難以發(fā)現(xiàn)腫瘤的侵潤性生長，因此也給疾病的早期診斷和治療帶來了極大難度。在下列研究中，我們通過比較定期接受CT掃描篩查和未定期接受CT掃描篩查兩組患者的腫瘤內(nèi)分泌指標(biāo)和TNM分期，旨在為臨床探尋能夠早期發(fā)現(xiàn)非小細(xì)胞（non-small cell lung cacer，NSCLC）肺癌浸潤性生長的輔助檢查方式提供更多的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2009年6月～2012年5月在我院確診的非小細(xì)胞肺癌患者作為本次回顧性研究的對象，入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）咳嗽、咳痰、咯血等臨床癥狀；（2）X線和CT掃描發(fā)現(xiàn)肺部占位性病變；（3）肺組織活檢和病理檢查確診為非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cacer，NSCLC）；（4）取得患者及家屬知情同意，簽訂知情同意書。共入組150例患者，根據(jù)診治過程中是否定期接受多層螺旋CT檢查分為觀察組和對照組。觀察組78例患者定期接受CT掃描檢查進(jìn)行篩查，對照組72例患者在診治過程中未定期接受CT掃描檢查，因出現(xiàn)咳嗽咳痰、咯血、呼吸困難至醫(yī)院就診。兩組患者一般情況的差異無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），觀察指標(biāo)能夠進(jìn)行統(tǒng)計分析。

1.2 檢查指標(biāo)

1.2.1 兩組患者的TNM分期情況 觀察兩組患者的TNM分期，根據(jù)原發(fā)腫瘤（T）、區(qū)域淋巴結(jié)（N）和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（M）三方面的情況參照下列標(biāo)準(zhǔn)綜合判斷：TNMⅠ期包括T1N0M0，Ⅱ期包括T0N1M0、T1N1M0、T2N0M0、T2N1M0、T3N0M0，Ⅲ期包括T0N2M0、T1N2M0、T2N2M0、T3N1M0、T3N2M0、T4N0M0、T4N1M0、T4N2M0，Ⅳ期包括TnNnM1。

1.2.2 兩組患者腫瘤組中VEGFA、VEGFB、VEGFR1的mRNA水平檢測 Realtime-PCR：取肺癌組織60 mg，采用天根生物公司的mRNA柱式提取+反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA第一鏈。PCR擴(kuò)增采用預(yù)混sybgreen的mastermix反應(yīng)液（Takara

公司）進(jìn)行，擴(kuò)增體系：cDNA 2μL、mastermix 10μL、上下游引物各0.4 μL、去離子水7.2 μL。擴(kuò)增條件：95℃、15 s，特異性退火溫度、30 s，72℃、30 s，40個循環(huán)。分別擴(kuò)增同一樣本的目的基因和看家基因，利用ΔΔCt計算目的基因的mRNA相對含量。

1.2.3 兩組患者腫瘤組中VEGFA、VEGFB、VEGFR1的蛋白水平檢測 取腫瘤組織100 μg加入蛋白裂解液RIPA后研磨，取研磨液離心，收集上清16μL加入Loading buffer 4μL、DTT 2μL制成上樣液。配置4%的上層膠和10%的下層膠，點樣后進(jìn)行垂直電泳：100 V、20 min，120 V、90 min。電泳后取出凝膠后進(jìn)行90 min的電轉(zhuǎn)膜，取出NC膜放入5%脫脂奶粉、在4℃封閉過夜后TBST洗5 min×3遍，加入兔來源的VEGFA、VEGFB、VEGFR1第一抗體（Abcam公司）和小鼠來源的antin第一抗體（Sigma公司）、在4℃孵育過夜。第2天取出NC膜，TBST洗3遍后加HRP標(biāo)記的種屬特異性第二抗體、室溫孵育2 h，最后進(jìn)行顯影。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS18.0軟件對上述數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料采用（）表示、用兩獨立樣本t檢驗分析；相關(guān)性分析采用以TNM分期為自變量的單因素回歸分析，檢驗標(biāo)準(zhǔn)P<0.05。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者腫瘤組織中VEGFA、VEGFB、VEGFR1的表達(dá)情況

觀察組患者腫瘤組織中VEGFA、VEGFB、VEGFR1的蛋白和mRNA含量明顯低于對照組（P<0.05）。見表1。

2.2 兩組患者的腫瘤內(nèi)分泌指標(biāo)與TNM分期的相關(guān)性

以肺癌的TNM分期做為應(yīng)變量，對患者腫瘤內(nèi)分泌指標(biāo)進(jìn)行單因素回歸分析可知，VEGFA、VEGFB、VEGFR1的表達(dá)與TNM分期呈正相關(guān)（P<0.05）。見表2。

3 討論

肺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其中非小細(xì)胞肺癌又是肺癌中最常見的類型。目前的研究認(rèn)為，浸潤性生長和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤重要的生物學(xué)標(biāo)志[1]。但是由于在疾病發(fā)生和發(fā)展的早期難以發(fā)現(xiàn)腫瘤的侵潤性生長，因此也給疾病的早期診斷和治療帶來了極大難度，這也直接導(dǎo)致該疾病手術(shù)治療后的5年生存率仍十分不理想[2]。

目前，患者多在出現(xiàn)咳嗽、咳痰、咯血和呼吸困難等癥狀后，至醫(yī)院通過支氣管鏡及病理活檢確診，疾病多已經(jīng)發(fā)展至進(jìn)展期，腫瘤已向周圍組織侵潤并發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，影響了手術(shù)切除的療效[3]。

因此，近年來的臨床試驗和基礎(chǔ)研究多集中于探尋能夠早期發(fā)現(xiàn)非小細(xì)胞肺癌浸潤性生長的輔助檢查方式[4]。其中，影像學(xué)檢查就是一個重要的組成部分。多層螺旋CT作為新發(fā)展起來的影像學(xué)檢查方式，一方面能夠取得肺部更為詳實的影像學(xué)資料，另一方面不會像纖維支氣管鏡檢查一樣給患者帶來創(chuàng)傷和不適感，因此對于疾病的篩查具有更為積極的臨床價值[5]。

在上述研究中，觀察組患者是罹患肺癌的高危人群，并在診療過程中定期接受CT掃描進(jìn)行篩查；對照組患者則是在出現(xiàn)了典型的臨床癥狀后才通過病理活檢確診。通過比較兩組患者的腫瘤內(nèi)分泌指標(biāo)，我們旨在為臨床探尋能夠早期發(fā)現(xiàn)非小細(xì)胞肺癌浸潤性生長的輔助檢查方式提供更多的理論依據(jù)。

肺癌的浸潤和轉(zhuǎn)移過程需要依賴新生血管和淋巴管的形成，在這一過程中有諸多促進(jìn)血管和淋巴管生成的細(xì)胞因子參與[6]。其中VEGFA、VEGFB是血管生長因子VEGF非常重要的亞型，它通過與細(xì)胞膜上的VEGFR1結(jié)合可以激活PI3K、ERK、AKT等信號通路來促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移并形成新生血管的過程[7]。

因此，檢測VEGFA、VEGFB及VEGFR1的mRNA和蛋白水平的改變能夠反映腫瘤的侵襲情況。有結(jié)果可以看出，觀察組患者腫瘤組織中VEGFA、VEGFB、VEGFR1的蛋白和mRNA含量明顯低于對照組。這就說明觀察組患者腫瘤的侵襲程度較弱。

為了進(jìn)一步證明VEGFA、VEGFB、VEGFR1的表達(dá)與腫瘤侵襲程度的關(guān)系，我們以TNM分期為自變量對腫瘤內(nèi)分泌指標(biāo)進(jìn)行了單因素回歸分析。結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，VEGFA、VEGFB、VEGFR1的表達(dá)與TNM分期呈正相關(guān)。這就可以確切的說明腫瘤組織中VEGFA、VEGFB、VEGFR1的表達(dá)的確與腫瘤的侵襲程度密切相關(guān)，其含量越高、腫瘤的侵襲程度越高。

綜上所述，多層螺旋CT早期診斷的非小細(xì)胞肺癌患者體內(nèi)VEGFA、VEGFB、VEGFR1的含量較低，TNM分期較好，對于疾病的早期診斷和治療具有積極意義。

[參考文獻(xiàn)]

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（收稿日期：2013-04-22）