[摘要] 目的 以雙氯芬酸鈉為模型藥物，研究廣藿香揮發(fā)油對(duì)藥物透皮吸收的促進(jìn)作用。 方法 采用氮酮、廣藿香揮發(fā)油預(yù)處理皮膚的方法，通過離體大鼠皮膚滲透釋藥試驗(yàn)，在不同時(shí)間點(diǎn)取樣，測(cè)定接受液中雙氯芬酸鈉的濃度，計(jì)算累積透過量、穩(wěn)態(tài)流量、滲透系數(shù)和滯后時(shí)間等指標(biāo)。 結(jié)果 廣藿香揮發(fā)油對(duì)雙氯芬酸鈉有促透作用，廣藿香揮發(fā)油組和氮酮組的促滲作用差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但比氮酮的弱；揮發(fā)油組可延長(zhǎng)雙氯芬酸鈉的時(shí)滯，而氮酮組縮短雙氯芬酸鈉的時(shí)滯；透皮實(shí)驗(yàn)中，二者并未減弱雙氯芬酸鈉的貯庫效應(yīng)；去角質(zhì)層實(shí)驗(yàn)中，二者均減弱了雙氯芬酸鈉的貯庫效應(yīng)。 結(jié)論 廣藿香揮發(fā)油對(duì)雙氯芬酸鈉有一定的透皮吸收促進(jìn)作用。

[關(guān)鍵詞] 廣藿香；揮發(fā)油；雙氯芬酸鈉；透皮吸收；貯庫效應(yīng)

[中圖分類號(hào)] R94 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2013）10-33-03

藥物經(jīng)皮吸收的主要障礙為皮膚的角質(zhì)層，透皮吸收促進(jìn)劑可有效地克服此障礙。許多中藥揮發(fā)性成分具有促透作用，且有起效快、效果好、副作用小、無污染的特點(diǎn)。因此，從中藥揮發(fā)性成分中尋找新的促滲劑已成為近年研究熱點(diǎn)[1-2]。為此，作者探討了廣藿香揮發(fā)油對(duì)模型藥物雙氯芬酸鈉經(jīng)皮吸收的影響。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試藥與動(dòng)物

THZ-82型數(shù)顯水浴恒溫振蕩器（江蘇金壇市宏華儀器廠）；UV-1800分光光度計(jì)（北京瑞利儀器廠）；透皮吸收擴(kuò)散裝置（自制）。氮酮（AZ，中原化工廠）；雙氯芬酸鈉（廣東省藥品檢驗(yàn)所），廣藿香揮發(fā)油（自提），所用試劑為分析純。

1.2 方法與結(jié)果

1.2.1 離體鼠皮的制備 剪短大鼠背部的毛，用脫毛劑脫毛，24 h后處死，直接取背部皮膚，仔細(xì)剝離皮下脂肪組織，用生理鹽水反復(fù)沖洗，至不渾濁，部分皮膚用膠帶，反復(fù)撕貼20次，即得去角質(zhì)層皮膚。取完整皮膚和去角質(zhì)層皮膚，置4℃冰箱中保存，1周內(nèi)用完。取鼠皮，在常溫下解凍，用紗布覆蓋角質(zhì)層表面，根據(jù)組別分別滴加0.5 mL廣藿香揮發(fā)油及0.5 mL的氮酮，使之濕潤(rùn)至整個(gè)皮膚外表面，充分接觸12 h后，除去紗布，用生理鹽水反復(fù)沖洗干凈，再用吸水紙吸干皮膚表面的液體，立即使用。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 精密稱取50.00 mg雙氯芬酸鈉，置50 mL量瓶中，用生理鹽水溶解、定容，制成1 mg/mL的貯備液，精密量取貯備液，用生理鹽水稀釋成50.00、40.00、35.00、30.00、25.00、20.00、15.00、12.50、10.00、6.25、3.12 μg/mL的系列溶液，分別在276 nm處測(cè)定其吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)，求得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=2.33×10-2 x+6.86×10-2（r=0.9986），線性范圍為3.12～50.00 μg/mL。

1.2.3 回收率和精密度試驗(yàn) 取已知準(zhǔn)確含量的雙氯芬酸鈉，溶于100 mL生理鹽水中，制得不同濃度的供試溶液，測(cè)定其吸光度，計(jì)算回收率與精密度（表1）。

1.2.4 透皮試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組（A組）、氮酮組（B組）、廣藿香揮發(fā)油組（C組）。將處理好的皮膚固定于雙室透皮擴(kuò)散裝置上進(jìn)行體外透皮吸收試驗(yàn)。供給液為0.1 mL的10 mg/mL雙氯芬酸鈉的生理鹽水溶液，接受液為5.0 mL生理鹽水，實(shí)驗(yàn)溫度為（37.0±1.0）℃，振速為120次/min，擴(kuò)散面積為0.502 cm2，在2、4、8、12、24 h時(shí)分別取4.0 mL，同時(shí)補(bǔ)加等量的接收液，測(cè)定吸光度，代入回歸方程，計(jì)算藥物濃度。連續(xù)透皮24 h后，除去供給液，用生理鹽水反復(fù)清洗，并用濾紙條吸干，取5.0 mL接收液加入干凈的接收瓶中，按上述條件進(jìn)行藥物貯庫效應(yīng)的研究。根據(jù)參考文獻(xiàn)[3-4]中所列公式計(jì)算累計(jì)滲透量、滲透系數(shù)、時(shí)滯、增滲倍數(shù)等。

1.2.5 雙氯芬酸鈉的滲透曲線 將不同時(shí)間的累積透過量對(duì)時(shí)間作圖，可得雙氯芬酸鈉的透皮吸收滲透曲線（圖1、2），反映了藥物在完整皮膚和去角質(zhì)層皮膚的滲透特征，經(jīng)線性回歸得回歸方程如表2、3，由相關(guān)系數(shù)r可知，方程線性良好，可見雙氯芬酸鈉的體外滲透近似呈零級(jí)動(dòng)力學(xué)方式，透皮速率近似恒定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

記錄每組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，根據(jù)參考文獻(xiàn)中計(jì)算公式，計(jì)算累計(jì)滲透量、滲透系數(shù)、時(shí)滯、增滲倍數(shù)等。所有數(shù)據(jù)采用醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SAS8.2進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料均采用（）表示，采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 回收率與精密度試驗(yàn)

由表1可知，紫外分光光度法測(cè)定雙氯芬酸納的方法可靠、準(zhǔn)確、重復(fù)性好。

2.2 廣藿香揮發(fā)油對(duì)雙氯芬酸鈉體外透皮速率的影響

由表2可知，從穩(wěn)態(tài)流量和滲透系數(shù)來看（完整皮膚），廣藿香揮發(fā)油和氮酮對(duì)雙氯芬酸鈉均有顯著的促滲作用（P<0.05）；從對(duì)時(shí)滯的影響可以看出，氮酮可明顯縮短雙氯芬酸鈉的透皮吸收時(shí)滯（P<0.05），而廣藿香揮發(fā)油卻延長(zhǎng)了其透皮吸收時(shí)滯；從增滲比ER可以看出氮酮對(duì)滲透系數(shù)提高倍數(shù)大。

由表3可知，從穩(wěn)態(tài)流量和滲透系數(shù)來看（去角質(zhì)層皮膚），兩種促滲劑在去除角質(zhì)層后的促滲作用和增滲倍數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；從時(shí)滯來看，去除角質(zhì)層后，氮酮可縮短雙氯芬酸鈉的透皮吸收時(shí)滯，而廣藿香揮發(fā)油則明顯延長(zhǎng)了其透皮吸收時(shí)滯（P<0.05）。

經(jīng)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，去角質(zhì)層的皮膚與完整皮膚比較，空白對(duì)照組A的穩(wěn)態(tài)流量和滲透系數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；氮酮組與廣藿香揮發(fā)油組均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。提示角質(zhì)層是藥物通過皮膚的主要障礙。

2.3 廣藿香揮發(fā)油對(duì)雙氯芬酸鈉體外透皮貯庫效應(yīng)的影響

由表4可知，氮酮組和廣藿香揮發(fā)油組并未減弱雙氯芬酸鈉的貯庫效應(yīng)，氮酮組和空白組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而廣藿香揮發(fā)油組和空白組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；從時(shí)滯上可以看出，氮酮縮短了雙氯芬酸鈉的透皮吸收時(shí)滯，但廣藿香卻明顯延長(zhǎng)了雙氯芬酸鈉的透皮吸收時(shí)滯（P<0.05）。從增滲比ER可以看出氮酮的滲透倍數(shù)較廣藿香揮發(fā)油的大。

由表5可知，從穩(wěn)態(tài)流量和滲透系數(shù)來看，氮酮組和廣藿香揮發(fā)油組均減弱了雙氯芬酸鈉的貯庫效應(yīng)，而二者的促滲作用差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；增滲倍數(shù)也無顯著性差異，但二者均縮短了雙氯芬酸鈉的透皮吸收時(shí)滯。

經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，去角質(zhì)層的皮膚與完整皮膚比較，去除釋放液后，氮酮組中雙氯芬酸鈉的穩(wěn)態(tài)流量和滲透系數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；廣藿香揮發(fā)油組中則無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但兩者比較，廣藿香揮發(fā)油組雙氯芬酸鈉的穩(wěn)態(tài)流量和滲透系數(shù)均減少，提示角質(zhì)層具有貯庫作用。

3 討論

實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)廣藿香揮發(fā)油和氮酮均具有促滲作用，廣藿香揮發(fā)油的促滲作用較氮酮弱，統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)二者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。但在貯庫效應(yīng)的研究中，氮酮并沒有減弱雙氯芬酸鈉的貯庫作用，廣藿香揮發(fā)油卻減弱了雙氯芬酸鈉的貯庫效應(yīng)，可見二者在促滲方面各具有特點(diǎn)。

在整個(gè)皮膚結(jié)構(gòu)中，角質(zhì)層作為藥物透皮吸收的限速層，使一些藥物的透皮吸收發(fā)生困難。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在去除角質(zhì)層后，雙氯芬酸鈉的透皮作用明顯增加，提示角質(zhì)層是雙氯芬酸鈉透皮吸收的主要障礙。角質(zhì)層中含有與藥物結(jié)合的角蛋白，使藥物停留在角質(zhì)層中形成貯庫，故去除釋放液后，仍有藥物釋放，且可維持一定的時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)在去除角質(zhì)層的貯庫效應(yīng)研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)去除釋放液后，仍有藥物釋放，可見藥物在皮膚中形成貯庫，并不是僅僅與角質(zhì)層中的角蛋白結(jié)合，還可能與皮膚中的其他成分結(jié)合而停留在皮膚中。故而當(dāng)去除釋放液后，仍有藥物釋放。

研究發(fā)現(xiàn)許多萜類化合物具有一定的促透作用且化合物毒性小[5-6]，廣藿香揮發(fā)油含有廣藿香醇、刺蕊草烯等萜類化合物[7]，可能是其發(fā)揮促透作用的有效成分。本研究是采用廣藿香總揮發(fā)油進(jìn)行試驗(yàn)，具體是其中的哪種成分或幾種成分在起作用，將是以后研究的一個(gè)方面。

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（收稿日期：2013-03-15）