[摘要] 目的 研究瞬時(shí)受體電位M8（TRPM8）在口腔白斑和口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況，并分析其與口腔鱗癌臨床病理特征的關(guān)系。 方法 采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)20例正?？谇唤M織、20例口腔白斑、45例口腔鱗癌組織標(biāo)本中TRPM8的表達(dá)。 結(jié)果 TRPM8的染色陽(yáng)性率在正?？谇火つそM、白斑組、鱗癌組分別為5.0%、30.0%、66.7%。正常黏膜組、白斑組、鱗癌組染色陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。TRPM8的表達(dá)水平與腫瘤病理分級(jí)關(guān)系密切（P=0.01），而與是否有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.639）、腫瘤的T分期（P=0.320）、患者的年齡（P=1.00）、性別（P=0.815）無(wú)明顯相關(guān)性。 結(jié)論 TRPM8在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的高表達(dá)表明離子通道蛋白可能在腫瘤的發(fā)生和增殖的過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。

[關(guān)鍵詞] TRPM8；口腔白斑；口腔鱗狀細(xì)胞癌；免疫組化

[中圖分類號(hào)] R739.8 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2013）10-28-03

鱗狀細(xì)胞癌是最常見的發(fā)生于口腔黏膜的惡性腫瘤，占該部位惡性腫瘤的90%以上，嚴(yán)重危害人類健康[1]?？谇击[癌的發(fā)生是多因素作用的結(jié)果，研究表明細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平與腫瘤有密切的關(guān)系，當(dāng)腫瘤細(xì)胞迅速增殖時(shí)，胞內(nèi)鈣離子濃度也隨之提高，但對(duì)于鈣離子如何從細(xì)胞外進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)目前尚不清楚。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)一種鈣離子通道蛋白——瞬時(shí)受體電位（transient receptor potential，TRP）可能介導(dǎo)鈣離子（Ca2+ ）內(nèi)流，從而對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展起促進(jìn)作用[2-3]。目前已發(fā)現(xiàn)多種TRP通道，尤其是TRPM亞家族，會(huì)參與到細(xì)胞的生存、增殖和死亡等基本生命活動(dòng)中。本研究檢測(cè)TRPM8蛋白在口腔正常黏膜、口腔黏膜白斑及口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況，并分析其與口腔鱗癌臨床病理特征的關(guān)系，從而探索其在口腔疾病中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

病例來(lái)源于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院口腔黏膜科及口腔頜面外科2010年5月～2012年5月活檢或術(shù)后標(biāo)本。其中，口腔正常黏膜10例，白斑20例，扁平苔蘚20例，鱗癌45例，共計(jì)95例。口腔鱗狀細(xì)胞癌病例按照下列標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行選擇：組織病理學(xué)診斷明確，首次接受手術(shù)治療，術(shù)前無(wú)放化療史，無(wú)其他口腔惡性腫瘤病史。其中男33例，女12例；年齡43～75歲；T分級(jí)：T1 17例，T2 13例，T3 9例，T4 6例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例；病理學(xué)分級(jí)：高分化20例，中、低分化25例?？谇话装呓?jīng)臨床檢查和病理診斷后確診納入。正常對(duì)照組取自非腫瘤性活檢標(biāo)本中正常口腔黏膜上皮。

1.2 試劑與方法

兔抗人TRPM8抗體購(gòu)自Abcam公司（英國(guó)），免疫組織化學(xué)染色試劑盒購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)有限公司。所有標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片。采用免疫組織化學(xué)SP法，PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定

TRPM8主要表達(dá)于細(xì)胞漿，偶爾表達(dá)于細(xì)胞膜，陽(yáng)性染色者呈棕黃色。高倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野， 每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，染色判定標(biāo)準(zhǔn)采用半定量分析法[3]。按細(xì)胞染色有無(wú)及染色深淺評(píng)分：無(wú)染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。按陽(yáng)性細(xì)胞百分率評(píng)分：陽(yáng)性細(xì)胞百分率<5%為0分，5%～25% 為1分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，75%～100%為4分。結(jié)果取2項(xiàng)評(píng)分之積，≤4分為陰性，>4分為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16.0軟件行x2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TRPM8在各組中的表達(dá)

TRPM8在口腔鱗癌組中66.7%呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，在口腔白斑組中30.0%呈陽(yáng)性表達(dá)，而在口腔正常組織中只有5.0%呈弱陽(yáng)性表達(dá)。TRPM8的在3組中陽(yáng)性表達(dá)率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），x2值分別為4.33、21.11、7.53，見表1，見圖1～5。

2.2 TRPM8在口腔鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)水平與臨床病理資料的關(guān)系

TRPM8的表達(dá)水平與腫瘤病理分級(jí)關(guān)系密切（x2=5.98，P=0.012），在低分化的口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)明顯高于高、中分化的口腔鱗狀細(xì)胞癌。與患者的年齡（x2=0.00，P=1.00）、性別（x2=0.17，P=0.734）方面無(wú)明顯相關(guān)性。同時(shí)與腫瘤所處于的T分期（x2=0.14，P=0.902）及是否有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（x2=0.23，P=0.419）也無(wú)明顯的相關(guān)性，見表2。

3 討論

腫瘤的發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，已有研究表明膜離子通道參與腫瘤的形成過(guò)程，TRP作為一種跨膜離子通道蛋白，廣泛表達(dá)于哺乳動(dòng)物的多種組織中，參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡等功能，在腫瘤的發(fā)生中起著重要的作用[4-6]。實(shí)驗(yàn)表明

Ca2+與腫瘤關(guān)系密切， 直接參與調(diào)控腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移和分化，而TRP被激活后可以非選擇性通透包括Ca2+在內(nèi)的陽(yáng)離子[5，7]。TRP基因超家族分為7個(gè)不同的亞家族：TRPC、TRPM、TRPV、TRPA、TRPP、TRPML及TRPN；TRP蛋白有龐大的功能分類，對(duì)各種疾病的發(fā)生有著深遠(yuǎn)的影響[6-10]。

2001年Tsavaler[11]鑒別出一個(gè)新型的前列腺特異性基因TRPM8，之后的研究發(fā)現(xiàn)TRPM8分布廣泛，功能眾多，不僅參與冷感覺、疼痛感覺調(diào)控，血管的收縮和擴(kuò)張，還參與細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控[12]，在多種原發(fā)性腫瘤中都有表達(dá)，實(shí)驗(yàn)證實(shí)TRPM家族成員的蛋白表達(dá)水平與某些上皮惡性腫瘤的出現(xiàn)和發(fā)展關(guān)系密切[13-14]。實(shí)驗(yàn)證明TRPM與口腔頜面部惡性腫瘤存在關(guān)聯(lián)，潘嫻等[15]發(fā)現(xiàn)TRPM8在舌鱗狀細(xì)胞癌中比癌旁正常組織中的表達(dá)顯著，李中連等[16]也發(fā)現(xiàn)TRPM亞家族在唾液腺腺樣囊性癌中表達(dá)增高。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示TRPM8在口腔正常組織中只有5.0%呈弱陽(yáng)性表達(dá)，在口腔白斑組中30.0%呈陽(yáng)性表達(dá)，而在口腔鱗癌組中66.7%呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，并且與病理分級(jí)密切相關(guān)，在低分化的口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)明顯高于高、中分化的口腔鱗狀細(xì)胞癌。本實(shí)驗(yàn)證明TRPM8在口腔鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮的作用，并提示其可以作為檢測(cè)癌前病變向癌癥發(fā)生轉(zhuǎn)變的重要指標(biāo)。由于TRPM8有明確的激動(dòng)劑和拮抗劑，因此為口腔鱗癌的治療提供了新的思路及手段。目前TRPM8在口腔癌中的研究報(bào)道較少，今后仍需深入探索。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Lee JJ，Hung HC，Cheng SJ，et al.Carcinoma and dysplasia in oral leukoplakias in Taiwan：prevalence and risk factors [J].Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod，2006，101（4）：472-480.

[2] Clapham DE.TRP channels as cellular sensors[J].Nature，2003，426 （6966）：517-524.

[3] Hanano T，Hara Y，Shi J，et al.Involvement of TRPM7 in cell growth as a spontaneously activated Ca2+ entry pathway in human retinoblastoma cells[J].J Pharmacol Sci，2004，95（4）：403-419.

[4] Kunzelmann KIon. Channels and cancer[J].J Membr Biol，2005，205（3）：159-173.

[5] Bodding M.TRP proteins and cancer[J].Cell Signal，2007，19（3）：617-624.

[6] Voets T，Owsianik G，Nilius B，et al.TRPM 8[J].Handb Exp Pharm acol，2007（179）：32-44.

[7] Prevarskaya N，Zhang L，Barritt G.TRP channels in cancer[J].Biochim Biophys Acta，2007，1772（8）：937-946.

[8] Montell C.The TRP superfamily of cation channels[J].Sci STKE，2005（272）：re3.

[9] Nilius B，Owsianik G，Voets T，et al.Transient receptor potential cation channels in disease[J]. Physiol Rev，2007，87（1）：165-217.

[10] Montell C，Birnbaumer L，F(xiàn)lockerzi V，et al.A unified nom enclature for the super family of TRP cation channels [J].Mol Cell，2002，9（2）：229-231.

[11] Tsavaler L，Shapero MH，Morkowski S，et al.Trp-p8，a novel prostate-specific gene，is up-regulated in prostate cancer and other malignancies and shares high homology with transient receptor potential calcium channel proteins[J].Cancer Res，2001，61（9）：3760-3769.

[12] 劉杰鋒.TRPM8的研究進(jìn)展[J].國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志，2010，30（3）：269-272.

[13] Thebault S，F(xiàn)lourakis M，Vanoverberghe K，et al.Differential role of transient receptor potential channels in Ca2+ entry and proliferation of prostate cancer epithelial cells[J].Cancer Res，2006，66（4）：2038-2047.

[14] Duncan LM，Deeds J，Hunter J，et al.Down- regulation of the novel gene melastat in correlates with potential form elanoma metastasis[J].Cancer Res，1998，58（7）：1515-1520.

[15] 潘嫻，吳煜農(nóng)，傅振，等.TRPM8在舌癌組織及Tca8113中的表達(dá)及其意義[J].口腔生物醫(yī)學(xué)，2010，1（3）：120-122.

[16] 李中連，江宏兵，葉金海，等.唾液腺腺樣囊性癌中TRPM 的表達(dá)及意義[J].口腔醫(yī)學(xué)，2008，28（12）：617-619.

（收稿日期：2013-04-16）