[摘要] 目的 探討HE4、CA125單獨和聯(lián)合檢測，在卵巢癌診斷及疾病轉(zhuǎn)歸中的價值，探討HE4水平與卵巢癌病理分型的關(guān)系，而且與腫瘤分期的相關(guān)性。方法 應(yīng)用ELISA法檢測血清中HE4水平，應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光法檢測血清CA125水平，其中卵巢癌的婦女40例、卵巢良性腫瘤30例、卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫30例、健康婦女40例，比較各組的水平差異。 結(jié)果 在卵巢癌組血清HE4及CA125水平明顯高于其他各組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。血清HE4在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫組與健康婦女組水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；但CA125在異位囊腫組水平卻明顯升高，與健康婦女組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義；卵巢癌組術(shù)前血清HE4水平與年齡相關(guān)，與病理分級、臨床分期密切相關(guān)；經(jīng)過全面卵巢癌分期手術(shù)患者術(shù)后血清HE4水平明顯低于術(shù)前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；以健康婦女、卵巢良性疾病作參考人群，血清HE4水平在67 pmol/L時，為最佳界值點。HE4診斷卵巢癌的ROC-AUC為0.969，敏感度為92.5%特異度為98%。聯(lián)合HE4及CA125檢測，敏感度最高。結(jié)論 HE4是敏感的卵巢癌腫瘤標(biāo)志物，敏感性較CA125高，聯(lián)合檢測有利于提高卵巢癌的診斷效率，血清HE4可以作為卵巢癌術(shù)后病情監(jiān)測及臨床轉(zhuǎn)歸的敏感血清標(biāo)志物。

[關(guān)鍵詞]人附睪蛋白4；CA125；卵巢癌；早期診斷

[中圖分類號] R737.31 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）10-23-03

卵巢癌起病隱匿，預(yù)后差，死亡率高。隨著腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)及有效化療的使用，其5年存活率有一定提高，但仍維持在30%左右，而早期卵巢癌患者治療后5年存活率高達(dá)90%。因此，早期診斷是改善卵巢癌預(yù)后的關(guān)鍵。目前，最常用于早期診斷卵巢癌的血清指標(biāo)物是CA125，但其在盆腔炎癥、子宮內(nèi)膜異位癥等疾病以及任何刺激到腹膜的損傷均可出現(xiàn)升高[1]，故應(yīng)用CA125診斷卵巢癌假陽性率較高，有時還會導(dǎo)致不必要的手術(shù)。新型腫瘤標(biāo)志物——人附睪蛋白4（human epididymis gene product 4，HE4）被認(rèn)為是一個對卵巢癌的早期診斷和鑒別具有重要價值的血清指標(biāo)，是近年研究熱點，本研究通過監(jiān)測不同病理類型及臨床分期卵巢癌患者術(shù)前、術(shù)后血清HE4及CA125的水平變化。探討HE4、CA125單獨和聯(lián)合檢測，在卵巢癌診斷及疾病轉(zhuǎn)歸中的價值，可以評估HE4在漢族人群中診斷卵巢癌的敏感度和特異度，并與歐美國家數(shù)據(jù)對比。為早期診斷卵巢癌及治療監(jiān)測選擇敏感的腫瘤標(biāo)志物提供理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010年12月～2012年10月在福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科初次住院手術(shù)治療的盆腔腫物患者，所有患者均無明顯影響腫瘤標(biāo)志物的合并癥存在，且術(shù)前未經(jīng)放化療等治療。根據(jù)術(shù)后石蠟病理分為卵巢惡性腫瘤組40例、卵巢良性卵巢瘤30例，卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫30例。卵巢癌組手術(shù)病理分期按照國際國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期11例，Ⅱ期6例，Ⅲ期19例，Ⅳ期4例。高分化6例，中分化11例，低分化23例。包含漿液性卵巢癌21例，黏液性卵巢癌13例，透明細(xì)胞癌2例，卵巢子宮內(nèi)膜腺癌4例。卵巢惡性腫瘤患者年齡11～69歲，（47.57±13.45）歲，非卵巢惡性腫瘤患者年齡16～71歲，平均（40.57±14.45）歲，取材前患者均未接受任何相關(guān)治療。并選擇本院同期體檢的健康婦女40例，抽取肘靜脈血檢測HE4和CA125。以上病例采血時均非月經(jīng)期，無甲狀腺、乳腺疾病及其他腫瘤病史。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本收集 所有血液標(biāo)本取自術(shù)前2、3 d及術(shù)后第7天（其中10例卵巢惡性腫瘤患者經(jīng)全面分期手術(shù)）空腹肘靜脈全血3 mL，置于未加抗凝劑的試管中，標(biāo)本采集后在室溫下靜置1 h，離心機離心后（3000 r/min）取上清，保存在-80℃冰箱待測。健康婦女組標(biāo)本采集同患者組。

1.2.2 實驗方法 血清HE4采用ELISA法測定，其試劑盒購自瑞典Conag公司嚴(yán)格按照說明書操作。酶標(biāo)儀：伯樂550，HE4測定值>150 pmol/L為陽性。血清CAl25采用電化學(xué)發(fā)光方法定量測定儀器：羅氏e601，試劑：羅氏配套試劑，嚴(yán)格按照說明書操作，CAl25測定值>35 U/mL為陽性，

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。HE4和CA125水平以中位數(shù)（M）表示，以病理診斷為標(biāo)準(zhǔn)，繪制ROC曲線，計算靈敏度和特異度。多組間比較采用非參數(shù)Kruskal-Wallis檢驗，兩兩比較采用Mann-Whitney檢驗。檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 各組血清HE4、CA125水平比較

在卵巢癌、卵巢良性腫瘤、卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫及健康婦女血清中，HE4的中位數(shù)分別是103.00（77.85，175.91），24.75（7.56，45.00），36.05（28.75，50.93），44.90（34.25，54.00） pmol/L。CA125的中位數(shù)分別是76.48 （15.48，433.03）、22.73（11.65，30.89）、86.51（48.65，312.38）、21.00（11.50，31.00）U/mL；血清HE4水平在卵巢癌組明顯高于其他各組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=79.792，P<0.01）。其他3組兩兩比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

血清CA125水平在卵巢癌組與良性腫瘤組、正常組有差別（x2=46.891，P<0.01），但與卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫組無差別（P>0.05），異位囊腫組與良性腫瘤組、正常組有差別（P<0.05），良性組與正常組無差別（P>0.05）。

2.2 卵巢惡性腫瘤組術(shù)前血清HE4水平與年齡、病理類型、病理分級、臨床分期之間的關(guān)系

血清HE4與年齡相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（r=0.324，P<0.05），漿液性卵巢癌HE4水平中位數(shù)120.6（71～500）pmol/L，黏液性卵巢癌中位數(shù)75.00（28～157.5）IU/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-2.12，P<0.05），低、中、高分化3者中位數(shù)水平分別126.00（85.04，313.227）、99.50（74.38，132.00）、83.50（72.70，91.70） pmol/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=6.981，P<0.05）。Ⅰ～Ⅱ期HE4水平中位數(shù)80.75（72.45，97.80），Ⅲ～Ⅳ期中位數(shù)121.517（95.75，294.79），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z= -3.534，P<0.01）。HE4水平與分期正相關(guān)關(guān)系，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（r=0.854，P<0.01）；與分化負(fù)相關(guān)關(guān)系，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（r=0.688，P<0.01）。

2.3 經(jīng)過滿意的卵巢癌全面分期手術(shù)患者術(shù)后血清HE4水平

10例經(jīng)過滿意的卵巢癌全面分期手術(shù)患者術(shù)后血清HE4水平32.19（21.67～293.40）pmol/L明顯低于術(shù)前血清水平63.37（29.10～444.80）pmol/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=-2.310，P=0.021）.

2.4 血清HE4的診斷閾值

以健康婦女、卵巢良性腫瘤及卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫作參考人群，血清HE4水平在67 pmol/L時，為最佳界值點。HE4診斷卵巢惡性腫瘤的ROC-AUC為0.969，敏感度為92.5%，特異度98%。見圖1。

在早期（Ⅰ、Ⅱ期）卵巢惡性腫瘤中，HE4的檢出率83.33%，CA125檢出率38.8%，在晚期（Ⅲ、Ⅳ）卵巢惡性腫瘤中HE4的檢出率100%，CA125檢出率72.72%，聯(lián)合HE4及CA125檢測，敏感度95.4%，特異度96.8%。按HE4試劑盒提供的參考值，>150 pmol/L，診斷卵巢惡性腫瘤的敏感度為27.5%，特異度為100%，兩者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

3.1 血清HE4的表達(dá)及意義

HE4基因最早是Kirchoff等[3]在人附睪遠(yuǎn)端上皮細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的，為WFDC2基因的編碼產(chǎn)物，是一酸性和半胱氨酸豐富的多肽為特點的分泌蛋白。HE4基因定位在染色體20q12～q13.1，包括5個外顯子和4個內(nèi)含子，約12 kb長。Wang等[2]研究顯示，HE4在正常的卵巢組織和癌旁組織中不表達(dá)，而在卵巢癌組織中高表達(dá)。近年來有研究者提出[4]，HE4在消化系統(tǒng)、淋巴結(jié)、肌肉組織中不表達(dá)；在近端氣管上皮、男性附睪和女性生殖道中高表達(dá)。以上研究表明HE4是卵巢癌的相關(guān)基因，可以作為一種有效的卵巢腫瘤標(biāo)志物。Moore等[5]提出：特異性為95%前提下，HE4診斷卵巢癌的敏感性最高；尤其對于鑒別良性腫瘤和I期卵巢癌患者方面，聯(lián)合檢測HE4和CA125對卵巢癌的診斷效能最高，進(jìn)一步為HE4早期預(yù)測卵巢癌提供了依據(jù)。

本研究顯示血清HE4水平在卵巢癌組明顯高于其他各組；卵巢良性腫瘤、內(nèi)膜異位囊腫及健康婦女兩兩比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。血清CA125在卵巢癌及卵巢內(nèi)膜異位囊腫患者均會出現(xiàn)升高，對卵巢腫瘤的診斷引起混淆，而血清HE4有更好的鑒別作用，減少誤診，對于患者可以避免不必要的手術(shù)和過度治療。而且CA125 水平僅在約50%的早期卵巢癌患者中升高[6]。本研究顯示不論在早期還是晚期卵巢癌，HE4檢出率均高于CA125，這與劉亞南等[7]研究結(jié)果一致，進(jìn)一步證實HE4在對卵巢良惡性疾病的鑒別及早期診斷方面優(yōu)于CA125。

有研究[8-9]表明血清CA125水平及年齡都是影響卵巢癌患者預(yù)后的因素。本研究顯示卵巢癌組術(shù)前血清HE4水平與年齡相關(guān)，與病理分級、臨床分期密切相關(guān)?？紤]隨著卵巢癌病情進(jìn)展，HE4表達(dá)水平增高，提示HE4蛋白可能參與了腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，HE4可能是卵巢癌預(yù)后不良的標(biāo)記物。Drapkin等[10]通過免疫組化研究發(fā)現(xiàn)，HE4在大多數(shù)非卵巢腫瘤組織中不表達(dá)或低表達(dá)，在卵巢癌組織中的表達(dá)與組織類型相關(guān)，HE4在93%的漿液性卵巢癌和100%的子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)，在透明細(xì)胞癌中僅有50%表達(dá)，黏液性癌中未見表達(dá)。本研究顯示血清HE4在漿液與黏液性卵巢癌水平不同，由于研究病例有限，可能與總體存在差異，提示黏液性卵巢癌與非黏液性卵巢癌在發(fā)生機制、信號傳導(dǎo)途徑及激活、基因表達(dá)等存在差異，這提示HE4的表達(dá)與卵巢癌病理類型相關(guān)。

3.2 血清HE4的診斷閾值

本研究應(yīng)用ROC曲線來尋找HE4診斷卵巢癌的最佳界值點。以健康婦女及卵巢良性疾病為參照，其ROC曲線上最佳界值點為67 pmol/L，HE4診斷卵巢癌的敏感度92.5.%特異度98%，聯(lián)合HE4及CA125檢測，敏感度最高。按HE4試劑盒提供的參考值>150 pmol/L為診斷界值點，診斷卵巢惡性腫瘤的敏感度為27.5%，特異度為100%。由于HE4試劑的研發(fā)在歐美人群，診斷界值點的差別可能是由于所選擇樣本的人種不同，其體質(zhì)及特性有別所致；同時本研究所使用的血清標(biāo)本為凍存標(biāo)本，并非新鮮血清，這可能使血清HE4濃度人為降低。本研究說明應(yīng)在不同人種不同地域進(jìn)行大規(guī)模臨床驗證，確立血清HE4最佳診斷區(qū)間 。

3.3 血清HE4在卵巢癌患者術(shù)后病情監(jiān)測及預(yù)后評估中的作用

Havrilesky等[11]報道，56%患者的血清HE4比CA125提前6～69周出現(xiàn)升高。本研究顯示，經(jīng)過全面卵巢癌分期手術(shù)患者術(shù)后血清HE4水平明顯低于術(shù)前血清水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與上述研究結(jié)果基本一致，提示HE4可以作為監(jiān)測卵巢癌患者病情轉(zhuǎn)歸的敏感腫瘤標(biāo)志物，能較早發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)，但需要進(jìn)一步擴大樣本研究。

綜上，提示HE4與CA125有各自的分布特點，兩者具有互補性，血清HE4和CA125聯(lián)合檢測能減少漏診率及誤診率，提高卵巢癌早期診斷的能力。上述研究提示血清HE4具備作為卵巢腫瘤標(biāo)志物的優(yōu)勢條件。

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（收稿日期：2013-04-22）