[摘要] 目的 探討I期非小細(xì)胞肺癌（Non-Small Cell Lung Carcinoma，NSCLC）的術(shù)后個(gè)體化化療，以提高肺癌的遠(yuǎn)期療效。方法 對(duì)該院2009年6月—2012年12月收治的78例Ⅰ期NSCLC且有微轉(zhuǎn)移患者的石蠟包埋腫瘤標(biāo)本進(jìn)行肺癌組織ERRC1（excision repair cross-complementation group 1）及細(xì)胞角蛋白（Cytokeratin，CK）免疫組化檢測(cè)，并進(jìn)行術(shù)后個(gè)體化化療，分析上述指標(biāo)表達(dá)對(duì)患者化療反應(yīng)率及生存率的關(guān)系，探討其對(duì)指導(dǎo)術(shù)后化療的意義。結(jié)果 全部患者CK檢測(cè)均為陽(yáng)性，陽(yáng)性率100.0%；ERRC1陰性表達(dá)者42例（53.8%），ERRC2陽(yáng)性表達(dá)者36例（46.2%）；2009年6月-2012年12月，共有235例Ⅰ期NSCLC患者在該院就診，經(jīng)治療及CK檢測(cè)陽(yáng)性確定微轉(zhuǎn)移患者共78例，轉(zhuǎn)移率33.2%；陽(yáng)性組3年復(fù)發(fā)18例，轉(zhuǎn)移30例，生存率61.1%，陰性組復(fù)發(fā)20例，轉(zhuǎn)移34例，生存率69.0%，兩組患者復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、生存率比較均無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論 ERCC1和CK檢測(cè)有助于客觀(guān)評(píng)價(jià)患者預(yù)后，合理應(yīng)用多學(xué)科綜合治療，避免不必要的醫(yī)療資源的浪費(fèi)，具有巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益，值得廣泛推廣。

[關(guān)鍵詞] ERRC1；細(xì)胞角蛋白；I期非小細(xì)胞肺癌；表達(dá)；化療；指導(dǎo)

[中圖分類(lèi)號(hào)] R734 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2013）05（b）-0055-02

目前臨床對(duì)于I期非小細(xì)胞肺癌術(shù)后是否化療仍存在較大爭(zhēng)議，多數(shù)學(xué)者均認(rèn)為[1]，微轉(zhuǎn)移是一個(gè)影響預(yù)后的獨(dú)立因素[1]，而目前臨床TNM分期仍未將微轉(zhuǎn)移作為一個(gè)分期的指標(biāo)，因此，為探討微轉(zhuǎn)移患者個(gè)體化化療效果，該院對(duì)2009年6月-2012年12月收治的78例Ⅰ期NSCLC且有微轉(zhuǎn)移患者的石蠟包埋腫瘤標(biāo)本進(jìn)行肺癌組織ERRC1及CK免疫組化檢測(cè)，并進(jìn)行術(shù)后個(gè)體化化療以期改善這部分患者的預(yù)后，現(xiàn)將研究過(guò)程與結(jié)論報(bào)道如下。

1 臨床資料

選取該院收治的經(jīng)胸外科根治手術(shù)（肺葉或全肺切除、系統(tǒng)性淋巴結(jié)清掃術(shù)）且經(jīng)常規(guī)病理檢查存在微轉(zhuǎn)移的I期NSCLC患者[2]，共78例，男性48例，占61.5%，女性30例，占38.5%，年齡39～71歲，平均年齡（55.8±13.6）歲。病理分型：鱗癌38例（48.7%），腺癌29例（37.2%），腺鱗癌11例（14.1%）；吸煙史：無(wú)吸煙史42例（53.8%），3年以下19例（24.4%），3年及以上17例（21.8%）。

2 研究方法

2.1 CK檢測(cè)

2.1.1 標(biāo)本準(zhǔn)備 將石蠟包埋組織標(biāo)本置于-4℃冰箱內(nèi)，冷凍后取出，制成2張組織薄片，厚度均為5 μm，將其置于多聚賴(lài)氨酸處理過(guò)的載玻片上，經(jīng)攤片、烤片后進(jìn)行CK免疫組織化學(xué)染色。

2.1.2 免疫組織化學(xué)染色步驟 ①采用常規(guī)脫蠟法將石蠟切片水化；②將30% H2O21份與蒸餾水10份混合，室溫放置5～10 min以滅活內(nèi)源性酶，滅活后使用蒸餾水清洗3次；③將切片浸入0.01 mol枸櫞性酸鹽緩沖液中，微波爐加熱至沸騰后停止，每隔10 min重復(fù)一次，共計(jì)2次。待切片冷卻后，使用磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌2次；④滴加5%雙（三甲基硅基）乙酰胺（BSA）封閉液，室溫靜置20 min后甩去多余液體，無(wú)需洗滌；⑤滴加稀釋的一抗，37℃靜置1 h后，使用PBS洗滌3次，每次2 min；⑥滴加生物素化二抗，于室溫下靜置20 min后使用PBS洗滌3次，每次2 min；⑦滴加試劑SABC，20～37℃靜置20 min后使用PBS洗滌4次，每次5 min；⑧DAB顯色：取1 mL蒸餾水，分別添加加試劑盒中A，B，C試劑各1滴，混勻后加至切片，室溫顯色，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間在20 min左右，反應(yīng)完畢后使用蒸餾水洗滌；⑨蘇木素輕度復(fù)染[3]；脫水，透明，封片，待檢。

2.1.3 染色結(jié)果評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) 陽(yáng)性結(jié)果為細(xì)胞膜及細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顯色，且切片中出現(xiàn)1例CK染色陽(yáng)性的細(xì)胞，則認(rèn)為結(jié)果呈陽(yáng)性，即淋巴結(jié)中有微轉(zhuǎn)移灶的存在。

2.2 CK檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本再行ERCC1檢測(cè)

2.2.1 方法 鼠抗人ERCC1單克隆抗體由上海長(zhǎng)島生物技術(shù)有限公司提供。①石蠟切片經(jīng)常規(guī)脫蠟水化后，使用3%的H2O2溫育20 min，以滅活其內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，使用蒸餾水洗滌3次，每次洗滌時(shí)間約為5 min；②微波抗原修復(fù)約5 min，使用0.1 mol/LPBS洗滌3次，每次5 min；③滴加正常血清封閉液，室溫溫育30 min后將多余液體倒出；④滴加1∶80鼠抗人ERCC1單抗（稀釋倍數(shù)1∶100），37℃1 h，4℃冰箱放置8～12 h；⑤0.1 mol/LPBS洗滌5 min，3次；⑥滴加生物素化二抗，37℃環(huán)境下靜置60 min；⑦0.1 mol/LPBS洗滌5 min ，3次；⑧滴加試劑SABC，37℃，60 min，使用0.1 mol/LPBS洗滌5 min ，3次；⑨DAB顯色5 min；⑩蘇木素復(fù)染，脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)脂封片，待檢。

2.2.2 判定標(biāo)準(zhǔn) ERCC1主要呈細(xì)胞核染色，在400×視野下，對(duì)1000個(gè)腫瘤細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)予以記錄。參照Wachters等[4]的方法來(lái)分析免疫組化ERCC1的表達(dá)水平，即陰性表達(dá)（-）：不表達(dá)或陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%；陽(yáng)性表達(dá)（+）：視野中陽(yáng)性細(xì)胞>10%。按照其表達(dá)程度分為陰性組和陽(yáng)性組，以進(jìn)行分組治療。

3 治療方式

ERCC1陽(yáng)性患者（陽(yáng)性組）用不含鉑方案，ERCC1陰性患者（陰性組）用含鉑方案化療[5]。

4 觀(guān)察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)I期非小細(xì)胞肺癌微轉(zhuǎn)移率，ERCC1陽(yáng)性率及總體3年復(fù)發(fā)率、轉(zhuǎn)移率及存活率。

5 統(tǒng)計(jì)方法

對(duì)本臨床研究的所有數(shù)據(jù)采用SPSS13.0進(jìn)行分析，對(duì)計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，對(duì)計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)設(shè)定為a=0.05，當(dāng)P<0.05時(shí)，認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

6 結(jié)果

6.1 CK檢測(cè)結(jié)果

全部患者CK檢測(cè)均為陽(yáng)性，陽(yáng)性率100.0%。

6.2 ERRC1及轉(zhuǎn)移率檢測(cè)

對(duì)患者行ERRC1檢測(cè)，顯示ERRC1陰性表達(dá)（低表達(dá)）者42例（53.8%），納入陰性組，ERRC2陽(yáng)性表達(dá)（高表達(dá)）者36例（46.2%），納入陽(yáng)性組；2009年6月—2010年12月，共有235例Ⅰ期NSCLC患者在該院就診，經(jīng)治療及CK檢測(cè)陽(yáng)性確定微轉(zhuǎn)移患者共78例，轉(zhuǎn)移率33.2%。見(jiàn)表1。

6.3 3年情況統(tǒng)計(jì)

陽(yáng)性組3年復(fù)發(fā)18例，轉(zhuǎn)移30例，生存率61.1%，陰性組復(fù)發(fā)20例，轉(zhuǎn)移34例，生存率69.0%，兩組患者復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、生存率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表2。

7 討論

肺癌是世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和死亡率均已高居各類(lèi)癌癥死亡率之首。而腫瘤出現(xiàn)淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移一般無(wú)明顯臨床表現(xiàn)，常規(guī)影像學(xué)及臨床病理學(xué)檢查不易發(fā)現(xiàn)。而多數(shù)肺癌患者在手術(shù)前已經(jīng)存在區(qū)域淋巴結(jié)或骨髓、外周血微轉(zhuǎn)移灶，造成病死率居高不下。因此，探討檢測(cè)微轉(zhuǎn)移灶的新方法，補(bǔ)充完善病理TNM分期系統(tǒng)，對(duì)選擇適宜的綜合治療方法及延長(zhǎng)其生存期均具有重要意義。2008年NCCN《非小細(xì)胞肺癌指南》[6]指出，IA期病變不需化療，IB期病變不推薦化療，但為提高患者預(yù)后，保證其生活質(zhì)量及生存率，我們認(rèn)為，應(yīng)根據(jù)患者指標(biāo)進(jìn)行個(gè)體化治療，遂設(shè)計(jì)了本次探究。

CK是一種分化特異的蛋白質(zhì)，是組成細(xì)胞骨架的蛋白質(zhì)之一，廣泛存在于人體上皮組織中，而不存在于間葉組織中。但當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)癌變時(shí)，上皮性腫瘤可表達(dá)CK，且間葉組織仍不表達(dá)，因此，可認(rèn)為肺癌患者淋巴結(jié)中檢測(cè)到CK可指示腫瘤微轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)。本例采用該理論，確診78例CK陽(yáng)性微轉(zhuǎn)移患者，總體Ⅰ期NSCLC轉(zhuǎn)移率為33.2%，與Kim KS等[7]研究結(jié)果相仿，結(jié)果可靠。

ERCC1是一類(lèi)重要的核苷酸外切修復(fù)酶，肺癌患者體內(nèi)ERCC1一般呈現(xiàn)低表達(dá)，而高表達(dá)往往與鉑類(lèi)制劑耐藥相關(guān)；鉑類(lèi)是NSCLC化療的基本藥物，通過(guò)分析患者基因表達(dá)水平以及遺傳狀態(tài)，對(duì)設(shè)計(jì)是否選擇含鉑方案治療及預(yù)測(cè)鉑類(lèi)藥物療效均具有指導(dǎo)意義，而且能夠在一定程度上避免藥物相關(guān)的嚴(yán)重毒副作用風(fēng)險(xiǎn)，從而使病人接受真正的個(gè)體化治療。目前，肺癌的分子分期及個(gè)體化治療是肺癌研究領(lǐng)域的難點(diǎn)和熱點(diǎn)，本例根據(jù)患者ERCC1表達(dá)差異制定不同的化療方案，即ERCC1陽(yáng)性患者用不含鉑方案，ERCC1陰性患者用含鉑方案化療，最終陽(yáng)性組復(fù)發(fā)率50.0%，轉(zhuǎn)移率83.3%，生存率69.4%，而陰性組復(fù)發(fā)率47.6%，轉(zhuǎn)移率81.0%，生存率73.8%，兩組組間數(shù)據(jù)比較無(wú)明顯差異，而通過(guò)對(duì)其他研究結(jié)論的對(duì)比分析[8]，我們發(fā)現(xiàn)，經(jīng)個(gè)體化治療后，患者復(fù)發(fā)率、轉(zhuǎn)移率無(wú)明顯變化，而生存率較傳統(tǒng)治療方案上升約10%，說(shuō)明檢測(cè)上述指標(biāo)并進(jìn)行合理化治療可有效提高患者的生存期，能夠?yàn)棰衿贜SCLC患者的術(shù)后化療提供可靠的臨床指導(dǎo)。

綜上所述，ERCC1和CK檢測(cè)有助于客觀(guān)評(píng)價(jià)患者預(yù)后，合理應(yīng)用多學(xué)科綜合治療，避免不必要的醫(yī)療資源的浪費(fèi)，具有巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益，值得廣泛推廣。

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（收稿日期：2012-11-26）