摘要：目的： 建立祛瘀降脂片中芍藥苷的含量測定方法。方法： 采用HPLC法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為色譜柱，流動相為甲醇_0.1%磷酸溶液（14：86），流速為1.0ml/min；檢測波長為230nm；柱溫為30℃。結(jié)果：采用高效液相色譜法測定芍藥苷的含量，線性關(guān)系良好，線性范圍為0.1634ug—1.634ug， 平均加樣回收率為98.48%，RSD%為1.39% 。結(jié)論：所建立的方法簡便易行、準(zhǔn)確可靠，可用于祛瘀降脂片的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：祛瘀降脂片；芍藥苷；HPLC；含量測定

中圖分類號：R972+.6 文獻標(biāo)識碼：C 文章編號：1005-0515（2013）9-010-02

祛瘀降脂片系我院自制劑，由大黃、白芍、桃仁、地黃、山楂、澤瀉、白術(shù)等11味中藥組成。具有活血化瘀、祛除痰濁、疏通脈絡(luò)的功效，主要用于高血脂癥、腦血栓后遺癥、動脈粥樣硬化。白芍為方中要藥，功能養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、柔肝止痛、平抑肝陽?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)白芍中的主要成分芍藥苷能擴張血管、保護腦缺血、抗血小板聚集、抗血栓形成，有提高抗高脂肪高膽固醇引起的促血栓形成的作用。原標(biāo)準(zhǔn)無含量控制項，筆者采用HPLC法對方中白芍的主要成分芍藥苷進行了含量測定[1-4]，為其質(zhì)量控制提供依據(jù)?，F(xiàn)報告如下。

1儀器、試藥與材料

Waters 510型高效液相色譜儀（美國）、Waters 486紫外檢測器、威瑪通用多媒體色譜數(shù)據(jù)工作站；SB3200超聲清洗機（上海必能信超聲有限公司）、AEL_200電子天平（日本島津）。芍藥苷對照品（批號：110736—201136）購自中國藥品生物制品檢定所。甲醇為色譜純（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司），水為重蒸餾水（自制），其他試劑均為分析純。祛瘀降脂片由本院制劑室提供（批號：20120911、20121105、20121222、20130201、20130417）。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱： DiamonsilC18（4.6mm×250mm，5um）；流動相：甲醇_0.1%磷酸溶液（14：86）；流速為1.0ml/min；檢測波長：230nm；柱溫：30℃。

2.2 溶液制備

2.2.1對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含60ug的溶液，即得。

2.2.2供試品溶液的制備方法 取本品20片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，取2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理（300W，40KHz）30min， 放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照品溶液的制備 按照祛瘀降脂片的制備工藝制備缺白芍的陰性樣品，按上述供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液，在上述色譜條件下分別進樣10ul，記錄色譜圖。結(jié)果表明，供試品溶液在對照品溶液色譜峰相應(yīng)位置上有相應(yīng)峰，而陰性對照品溶液色譜中無此峰，說明陰性無干擾。在此條件下，芍藥苷峰與樣品中其它組分色譜峰可達基線分離，分離度大于1.5；理論板數(shù)按芍藥苷峰計算，應(yīng)不低于3000。（見圖1）

A-對照品

B-供試品

C-陰性對照品

圖1 祛瘀降脂片HPLC圖 （1_芍藥苷）

2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取芍藥苷對照品16.34mg，置50ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備溶液。精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、5.0ml，分別置10ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液，按上述色譜條件分別進樣10ul測定。以進樣量（ug）為橫坐標(biāo)（X），峰面積積峰值為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=46948140.35X+52424.3789，r=0.9992（n=5），結(jié)果表明：進樣量在0.1634ug—1.634ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液10uL，重復(fù)進樣6次，測定芍藥苷峰面積。結(jié)果表明，機器精密度良好。RSD%為1.06%（n=6）

2.6 穩(wěn)定性試驗 對同一供試品溶液（批號：20121222），于0、2、4、8、16、24h依法測定，記錄芍藥苷峰面積，試驗結(jié)果表明，在24h內(nèi)被測物穩(wěn)定。RSD%為1.21%（n=6）。

2.7 重復(fù)性試驗 對同一批樣品（批號：20121222），平行測定6份，計算芍藥苷含量。結(jié)果平均含量為1.120mg/g，RSD%為1.70%（n=6），結(jié)果表明，重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗 取已知含量為1.120mg/g（批號20121222）的樣品約0.5g，共5份，精密稱定，分別精密加入濃度為0.3268mg·mL-1芍藥苷對照品貯備液1ml，按2.2.2項下方法制備5份加樣回收樣品溶液，測定，計算回收率。結(jié)果顯示平均加樣回收率為98.48%，RSD%為1.39%（n=5）。

2.9 樣品含量測定 取5批樣品，按上述含量測定方法，測定芍藥苷含量，結(jié)果顯示平均含量為1.124mg/g?？紤]到藥材來源及生產(chǎn)的實際情況，筆者暫定本品含白芍以芍藥苷計不得少于1.10mg/g。

3 討論

芍藥苷是白芍重要有效成分之一，具有較強的生理活性。故以芍藥苷的含量作為質(zhì)量控制指標(biāo)。

本文參照《中國藥典》和相關(guān)文獻報道[1-4]，在紫外_可見分光光度計上芍藥苷對照品溶液在230nm處有最大吸收，故選擇230nm作為檢測波長。

用50%甲醇為提取溶劑[5]，分別采用超聲10，20，30，40，60min進行提取，結(jié)果表明超聲20min可以提取完全，為確保提取完全，選擇30min為樣品提取時間。

流動相的選擇，因乙腈有毒且價格相對較貴，可由呼吸或經(jīng)皮膚進入人體，損害研究人員的健康，故流動相選擇相對危險性小的甲醇而棄用乙腈。選擇甲醇一0.1 % 磷酸（ 14：86）作為本方法的流動相，其效果較好，色譜峰不拖尾，可達到基線分離，分離度符合要求。

從5批樣品的含量測定結(jié)果可知，其芍藥苷測得值相差較大，這可能與所采用藥材的產(chǎn)地、采收季節(jié)以及白芍根的直徑等不同有直接關(guān)系。

采用高效液相色譜法測定祛瘀降脂片中芍藥苷含量，方法簡單易行，具有準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好等優(yōu)點，可以用于祛瘀降脂片的質(zhì)量控制。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.95-96

[2] 李文博，韓建平，倪倩等.SPE—UPLC法測定養(yǎng)血清腦顆粒中的芍藥苷含量[J].藥物分析雜志 ，2011，31（7）：1385.

[3]林月英，董憲鳳.HPLC法測定三九胃泰顆粒中芍藥苷的含量[J].天津藥學(xué)，2012，24（4）：12—13.

[4]奚永蘭，徐富柱.高效液相色譜法測定乳寧顆粒中芍藥苷的含量[J].中國民族民間醫(yī)藥，2012， 21（6）：42—43.

[5]張慶、馬駿、辛俐華.高效液相色譜法測定鱉甲煎丸中芍藥苷和黃芩苷的含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2013，32（3）：356—359