摘要：在酸性介質(zhì)中，高碘酸鈉能氧化結(jié)晶紫，亞硝酸根離子能催化該反應(yīng)。據(jù)此建立了一個(gè)線性范圍為4.0×10-3～3.5×10-1 mg/L，線性回歸方程為△A=0.634 9C+0.102 8，相關(guān)系數(shù)為 0.999 1，檢測(cè)限為1.3×10-3 mg/L的亞硝酸根離子催化動(dòng)力學(xué)分析方法，該方法用于檢測(cè)肉制品中痕量亞硝酸鹽的含量，結(jié)果十分滿意。

關(guān)鍵詞：催化動(dòng)力學(xué)；亞硝酸鹽；肉制品；測(cè)定

中圖分類號(hào)：O657.31 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）21-5311-03

Determination of Trace Nitrite in Product of Meat by Catalytic Kinetic Spectrophotometry

XING Jian-huaa，XIN Jian-haoa，ZHANG Shou-renb，YUAN Wen-jinga

（a.School of Medicine；b.Institute of Nano-structured Functional Materials， Huanghe Science and Technology College，

Zhengzhou 450063，China）

Abstract： Sodium periodate can oxidize crystal violet in acidic media， and nitrite ion can catalyze this reaction， which provides a method for determining content of nitrite ion. The linear equation △A=0.634 9 C+0.102 8（R2=0.999 1） was achieved with the linear range of nitrite ion of 4.0×10-3～3.5×10-1 mg/L， and the limit of determination was 1.3×10-3 mg/L. The method was applied to the determination of trace nitrite ion in meat products with satisfactory results.

Key words： catalytic kinetic； nitrite； meat product； determination

亞硝酸鹽是肉類食品加工中常用發(fā)色劑，肉制品由于使用亞硝酸鹽呈鮮艷的亮紅色。同時(shí)，亞硝酸鹽也是一種防腐劑，它可抑制微生物的增殖，尤其對(duì)肉毒桿菌具有特殊抑制作用，使食品具有獨(dú)特風(fēng)味。但亞硝酸鹽對(duì)人體有一定毒性，攝取過多亞硝酸鹽，可使血液中正常的血紅蛋白（Fe2+）轉(zhuǎn)變成高鐵血紅蛋白（Fe3+）而失去攜氧功能，導(dǎo)致神經(jīng)缺氧使人患高鐵血紅蛋白癥。亞硝酸鹽還可與人和動(dòng)物攝入的仲胺等結(jié)合，轉(zhuǎn)化成強(qiáng)致癌物——亞硝酸銨，從而誘發(fā)消化系統(tǒng)癌變。因此，必須控制肉制品中的亞硝酸鹽含量。測(cè)定亞硝酸根的方法較多，主要有分光光度法[1]、催化光度法[2，3]、電化學(xué)法[4]、毛細(xì)管電泳法[5-7]、色譜法[8-10]及流動(dòng)注射法[11，12]等。在酸性條件下，亞硝酸根離子能夠催化高碘酸鈉氧化結(jié)晶紫，且在一定濃度范圍內(nèi)，反應(yīng)速度與亞硝酸根離子濃度成線性關(guān)系，據(jù)此建立了測(cè)定亞硝酸鹽的方法。該方法用于測(cè)定肉制品中痕量的亞硝酸鹽，操作簡(jiǎn)便、設(shè)備簡(jiǎn)單、靈敏度高，結(jié)果滿意。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

7230G型可見分光光度計(jì)（上海菁華科技儀器有限公司）； TU-1810型紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）；電子恒溫水浴鍋（上?？莆鲈囼?yàn)儀器廠）。

0.5 g/L結(jié)晶紫溶液： 稱取甲結(jié)晶紫0.125 g，用95%乙醇溶解并定容至250 mL；0.05 mol/L高碘酸鈉溶液：稱取高碘酸鈉10.7 g， 加水溶解，定容至1 000 mL；1 mg/L亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取110 ℃干燥4 h的亞硝酸鈉1.000 g加水溶解，定容至100 mL，再量取10 mL加水定容至100 mL，配制成含亞硝酸鈉1 000 mg/L 的溶液為貯備液，使用時(shí)稀釋成含亞硝酸鹽1 mg/L的溶液；1 mol/L磷酸溶液：取98%濃磷酸溶液10 mL，加水稀釋至100 mL；飽和硼砂溶液：稱取5 g硼砂溶于100 mL熱水中；1.0 mol/L硫酸鋅溶液：稱取28.76 g七水硫酸鋅溶于100 mL水中。試驗(yàn)用水為二次蒸餾水，試劑均為分析純。

1.2 試驗(yàn)方法

在50 mL比色管中，加入1 mol/L磷酸溶液0.5 mL、0.5 g/L結(jié)晶紫溶液0.5 mL、0.05 mol/L高碘酸鈉溶液0.5 mL及不同體積的1 mg/L亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液，加水稀釋至50 mL，搖勻，將其置于70 ℃恒溫水浴中加熱18 min，取出放入冰水中冷卻5 min以終止反應(yīng)，在587 nm波長處分別測(cè)其吸光度（A）。以同樣方法測(cè)定非催化體系的吸光度（A0），△A=A0-A。

稱取經(jīng)絞碎的肉制品試樣10.00 g置500 mL燒杯中，加入硼砂飽和溶液25 mL，攪拌均勻后加入300 mL 70 ℃以上的熱水，置沸水浴中加熱20 min，在輕輕搖動(dòng)下滴加硫酸鋅溶液3 mL以沉淀蛋白，冷卻至室溫后轉(zhuǎn)移至500 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。移至1 000 mL燒杯中，離心15 min后靜置10 min，除去上層脂肪，過濾。棄去初濾液，量取濾液2 mL，置50 mL比色管中，加0.1 mol/L氟化銨 1 mL，按上述試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 吸收光譜及測(cè)定波長的確定

按試驗(yàn)方法得到的溶液用TU-1810紫外可見分光光度計(jì)進(jìn)行光譜掃描，所得吸收光譜如圖1。由吸收光譜圖可知，無氧化劑體系、非催化體系及催化體系的吸收光譜曲線形狀基本相同，最大吸收峰均在587 nm。故選擇587 nm為測(cè)定波長。

2.2 反應(yīng)條件的選擇

2.2.1 酸介質(zhì)選擇 在其他條件不變的情況下，分別以1 mol/L的磷酸、鹽酸、硫酸、硝酸為反應(yīng)介質(zhì)進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明，采用磷酸為反應(yīng)介質(zhì)△A最大。選用磷酸溶液為反應(yīng)介質(zhì)。

2.2.2 酸用量選擇 試驗(yàn)考察了磷酸溶液的用量分別為0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1 mL時(shí)對(duì)測(cè)定的影響。結(jié)果表明，磷酸溶液用量為0.5 mL時(shí)△A最大，選擇磷酸溶液用量為0.5 mL。

2.2.3 結(jié)晶紫溶液用量選擇 考察了結(jié)晶紫溶液的用量分別為0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1 mL時(shí)對(duì)測(cè)定的影響。結(jié)果顯示，△A隨著結(jié)晶紫溶液用量的增加而增大，但吸光度過大將產(chǎn)生較大誤差，吸光度在 0.2～0.7之間較佳。結(jié)晶紫溶液用量0.5 mL時(shí)可較好地達(dá)到要求，因而選擇結(jié)晶紫的用量為0.5 mL。

2.2.4 高碘酸鈉溶液用量選擇 考察了高碘酸鈉溶液用量分別為0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1 mL時(shí)對(duì)測(cè)定的影響。結(jié)果顯示，高碘酸鈉溶液用量為0.5 mL時(shí)，△A最大，所以選擇高碘酸鈉的用量為0.5 mL。

2.2.5 反應(yīng)溫度選擇 考察了對(duì)反應(yīng)溫度測(cè)定的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)， 隨著反應(yīng)溫度的升高，反應(yīng)速度加快。當(dāng)溫度高于90 ℃時(shí)，由于非催化體系反應(yīng)速率的加速，使△A值下降。綜合反應(yīng)易控等因素，試驗(yàn)選擇反應(yīng)溫度70 ℃恒溫水浴，隨后用冰水冷卻5 min以終止反應(yīng)。

2.2.6 加熱時(shí)間選擇 在其他條件相同的情況下，測(cè)定不同加熱時(shí)間對(duì)△A的影響，在加熱時(shí)間為18 min時(shí)，△A值最大，故確定加熱時(shí)間為18 min。

2.3 干擾試驗(yàn)

移取1 mg/L亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液2 mL，考察了一些常見離子對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。當(dāng)相對(duì)誤差在

±10%以內(nèi)時(shí)，下列離子不存在干擾（以倍數(shù)計(jì)）：K+（1 000）、Na+（1 000）、Ca2+（100）、Zn2+（1 000） 、Mg2+（50）、Cu2+（10）、Fe3+（1）、HCO3-（2 000）、SO42-（1 000）、Cl-（1 000）。從結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)e3+干擾比較嚴(yán)重，樣品測(cè)定時(shí)，需將Fe3+掩蔽后再進(jìn)行測(cè)定。

2.4 工作曲線

研究了△A在亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液不同濃度時(shí)的測(cè)定值，結(jié)果見圖2。由圖2可知，亞硝酸鹽的質(zhì)量濃度在4.0×10-3～3.5×10-1 mg/L間與△A成良好的線性關(guān)系。其線性回歸方程為△A=0.634 9C+0.102 8，相關(guān)系數(shù)為R2=0.999 1。測(cè)定11次空白溶液，其標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.034，由此計(jì)算出該方法檢測(cè)限為1.3×10-3 mg/L。

2.5 樣品的前處理及亞硝酸鹽含量的測(cè)定

按上述方法對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，并用GB/T 5009.33-2008中的分光光度法進(jìn)行對(duì)照，結(jié)果見表1。

2.6 回收率測(cè)定

按標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行回收率試驗(yàn)，結(jié)果見表2。測(cè)定結(jié)果表明，方法精密度較高，準(zhǔn)確度較好。

3 小結(jié)與討論

以磷酸溶液為反應(yīng)介質(zhì)，根據(jù)亞硝酸根離子可以催化高碘酸鈉氧化結(jié)晶紫反應(yīng)，建立了催化動(dòng)力學(xué)測(cè)定亞硝酸根離子的方法，亞硝酸鹽濃度在4.0×10-3～3.5×10-1 mg/L內(nèi)與△A具有良好的線性關(guān)系，其線性回歸方程為△A=0.634 9C+0.102 8，相關(guān)系數(shù)為0.999 1。該方法具有設(shè)備簡(jiǎn)單、靈敏度高等特點(diǎn)，用于肉制品中痕量亞硝酸根離子測(cè)定時(shí)，取得了滿意的結(jié)果。該方法用于測(cè)定肉制品中的亞硝酸根離子時(shí)，由于鐵離子存在干擾，可在樣品處理時(shí)加入氟化銨，屏蔽鐵離子后測(cè)定。

參考文獻(xiàn)：

[1] 方 力，張 燕，丁 佳，等.紫外分光光度法同時(shí)測(cè)定硝酸鹽氮和亞硝酸鹽氮[J].分析測(cè)技術(shù)及儀器，1999，5（3）：142-146.

[2] 張克忠，馮尚采，王 彬，等.催化光度法測(cè)定痕量亞硝酸根的研究-溴酸鉀-結(jié)晶紫體系[J].分析試驗(yàn)室，1998，17（3）：73-75.

[3] 張克忠，馮尚采，莊會(huì)榮.催化光度法測(cè)定痕量亞硝酸根[J].分析化學(xué)，1998，26（4）：494-496.

[4] 孫元喜，冶保獻(xiàn)，周性堯.聚中性紅膜修飾電極的電化學(xué)特性及其電催化性能[J].分析化學(xué)，1998，26（2）：166-169.

[5] 姜廷福，李菊白，李 辰，等.毛細(xì)管離子電泳法同時(shí)測(cè)定腌菜中硝酸根和亞硝酸根[J].分析試驗(yàn)室，2004，23（5）：34-36.

[6] MELANSON J E， LUCY C A. Ultra-rapid analysis of nitrate and nitrite by capillary electrophoresis [J]. J Chromatogr A，2000， 88（4）： 311-314.

[7] FUKUSHI K， TADA K， TAKEDA S ，et al. Simultaneous determination of nitrate and nitrite ions in seawater by capillary zone electrophoresis using artificial seawater as the carrier solution [J]. J Chromatogr A，1999，83（8）：303-308.

[8] CONSTANTINE D S， CONSTANTINA N K， CHRISTOS G N. Ion chromatographic method for the simultaneous determination of nitrite and nitrate by post-column indirect fluorescence detection[J]. J Chromatogr A，2003，100（2）：237-241.

[9] VERA J， ZOLTAN P， STEFAN A. Determination of nitrate and nirie by high performance liquid chromatography in human plasma [J]. Analytica Chemica Acta，2002，78（6）：193-197.

[10] 徐 霞，應(yīng)興華，段彬伍，等.膜滲透與離子色譜聯(lián)用技術(shù)測(cè)定蔬菜中亞硝酸鹽和硝酸鹽[J].分析化學(xué)，2007，35（11）：1586-1590.

[11] 龔正君，章竹君.流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法監(jiān)測(cè)環(huán)境水中的亞硝酸鹽[J].西南交通大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，38（8）：491-493.

[12] 王學(xué)鋒，史 選，皮運(yùn)清.流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法測(cè)定水樣中的痕量亞硝酸根[J]. 分析化學(xué)，2005，33（6）：865-868.