摘要：采用顯微鑒別法對(duì)三十五味沉香丸中的紅花（Carthamus tinctorius）進(jìn)行鑒定，采用HPLC法對(duì)其所含羥基紅花黃色素A進(jìn)行含量測(cè)定，制定了三十五味沉香丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果表明，顯微鑒別法可見(jiàn)紅花特征性花粉粒；羥基紅花黃色素A在0.078 1～3.905 0 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r=0.999 9），平均回收率為99.84%，RSD為0.91%（n=9）。該方法可準(zhǔn)確定性、定量，能夠有效控制制劑質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：三十五味沉香丸；紅花（Carthamus tinctorius）；羥基紅花黃色素A；HPLC

中圖分類號(hào)：R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）12-2911-03

Study on Quality Standard of Sanshiwuwei Chenxiang Pills

WEI Wen-zhi，LIN Peng-cheng，LU Yong-chang

（Chemistry and Life Sciences College， Qinghai University for Nationalities， Xining 810007， China）

Abstract： In order to establish the quality standard of Sanshiwuwe Chenxiang pills， the Carthamus tinctorius in pill was identified by microscopy， and its main content hydroxysafflor yellow A was analyzed by HPLC. The results showed that microscopic identification could clearly distinguish C. tinctorius by pollen grains； and the linear relationship was good in the range of 0.078 1～3.905 0 μg for hydroxysafflor yellow A（r=0.999 9） in HPLC. The average recovery was 99.84% with RSD of 0.91%（n=9）. The method was accurate and specific， and it could be used for the quality control of Sanshiwuwei Chenxiang pills.

Key words： Sanshiwuwei Chenxiang pills； Carthamus tinctorius； hydroxysafflor yellow A； HPLC

三十五味沉香丸由沉香、降香、紅花、木香、丁香、豆蔻等35種中藥組成，可祛風(fēng)、益肺、利痹，為清瘟熱類常用藏藥，臨床多用于高原地區(qū)冠心病、肺病、風(fēng)濕性心臟病等疾病的治療[1]。方中紅花為菊科植物紅花（Carthamus tinctorius）的干燥花，能活血通經(jīng)、散瘀止痛[2]。其標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》[3]藏藥第一冊(cè)，原標(biāo)準(zhǔn)無(wú)鑒別、含量測(cè)定項(xiàng)目。其為有效控制藥品質(zhì)量，本試驗(yàn)通過(guò)顯微鑒別法對(duì)方中紅花進(jìn)行特征性鑒定，并采用HPLC法對(duì)方中紅花的主要有效成分進(jìn)行含量測(cè)定，以期為三十五味沉香丸的質(zhì)量控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器

Waters 2695高效液相色譜儀，配2487 紫外檢測(cè)器，Empower 3工作站（美國(guó)Waters ），電子天平（BS 224S，CP 225D，德國(guó)Sartorius），KQ-500DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），BX51顯微成像儀（日本Olympus）。

1.2 試劑

羥基紅花黃色素A 對(duì)照品（批號(hào)：111637-201106，中國(guó)食品藥品檢定研究院提供）；三十五味沉香丸樣品6批次（批號(hào)：110701、111001、111201、100401、101201，由西藏昌都地區(qū)制藥廠提供；批號(hào)20111117，由青海金訶藏藥有限公司提供）；甲醇、乙腈為色譜純（Dikma）；去離子水；其余試劑為分析純。

1.3 方法

1.3.1 紅花的顯微鑒別 分別取紅花對(duì)照藥材粉末和三十五味沉香丸樣品粉末少許于載玻片上，加水合氯醛封片后，置顯微鏡下觀察。

1.3.2 色譜條件 Waters XBrige 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；梯度洗脫程序：0～12 min，乙腈-0.5% 磷酸水溶液-甲醇（2∶75∶23，V/V）；12～30 min，乙腈-0.5% 磷酸水溶液-甲醇（2∶15∶83，V/V）；30～40 min，乙腈-0.5% 磷酸水溶液-甲醇（2∶75∶23，V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)為405 nm；流速1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；理論塔板數(shù)（按羥基紅花黃色素A 計(jì)算）不低于4 000。

1.3.3 樣品前處理 精確稱取羥基紅花黃色素A 對(duì)照品15.62 mg，用25%甲醇（V/V，下同）定容至10 mL，制成羥基紅花黃色素A儲(chǔ)備液；按三十五味沉香丸的處方比例稱取除紅花外的其他藥材，照三十五味沉香丸制備方法制成陰性樣品。稱取樣品粉末3.000 g，置具塞錐形瓶中，加入25%甲醇50 mL，稱重，超聲處理（功率300 W、頻率50 kHz）30 min，放冷，再稱重，用25%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取濾液待測(cè)。

1.3.4 空白試驗(yàn) 精確吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。

1.3.5 方法學(xué)試驗(yàn) 精確量取羥基紅花黃色素A 儲(chǔ)備液1 mL，用25%甲醇定容至200 mL，分別精確量取1、2、5、10、25、50 mL于100 mL容量瓶中，用25%甲醇定容，分別吸取上述溶液10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算線性范圍；精確吸取羥基紅花黃色素A 對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算方法精密度；精確吸取供試品（批號(hào)為20111117）溶液10 μL，分別于3、6、10、16、24、48 h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算方法穩(wěn)定性；取同一批樣品（批號(hào)為20111117），制備平行樣品6份，測(cè)定峰面積，計(jì)算方法重復(fù)性；精確稱取已知羥基紅花黃色素A含量的同一批號(hào)樣品（批號(hào)為20111117，羥基紅花黃色素A含量為0.294 0 mg/g）9份，按相當(dāng)于羥基紅花黃色素A量的80%、100%、120%分別加入羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液，測(cè)定每份供試品中羥基紅花黃色素A的含量，計(jì)算方法回收率。

1.3.6 樣品測(cè)定 取5批三十五味沉香丸樣品（批號(hào)：110701、111001、111201、100401、101201）粉末適量，照1.3.3項(xiàng)方法前處理供試品，測(cè)定峰面積，外標(biāo)法計(jì)算羥基紅花黃色素A的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 紅花的顯微鑒別

顯微觀察可見(jiàn)圓形、橢圓形或橄欖形花粉粒，具3個(gè)萌發(fā)孔，外壁有齒狀突起（圖1）。

2.2 方法評(píng)價(jià)

空白干擾試驗(yàn)結(jié)果表明，羥基紅花黃色素A 陰性對(duì)照無(wú)干擾，與相鄰雜質(zhì)峰分離良好，HPLC分析結(jié)果見(jiàn)圖2。以羥基紅花黃色素A濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)（x）、峰面積為縱坐標(biāo)（y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：y=2 326 741x-10 142，r=0.999 9，線性范圍為0.078 1～3.905 0 μg。精密度試驗(yàn)測(cè)得峰面積RSD（n=6）為0.28%。穩(wěn)定性試驗(yàn)測(cè)得羥基紅花黃色素A 的峰面積RSD 為0.13%，表明羥基紅花黃色素A 在48 h內(nèi)穩(wěn)定。重復(fù)性試驗(yàn)測(cè)得同一批樣品平行樣中羥基紅花黃色素A平均含量為0.294 0 mg/g，RSD為0.99%。加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1，羥基紅花黃色素A 的平均回收率為99.84%，RSD為0.91%。

2.3 樣品測(cè)定

5批三十五味沉香丸樣品的羥基紅花黃色素A的含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

3 小結(jié)

紅花已分離鑒定的化學(xué)成分較多[4]，且藥理作用廣泛[5-8]，其中羥基紅花黃色素A為單查爾酮苷類化合物，可抑制血小板激活因子誘發(fā)的血小板聚集與釋放，競(jìng)爭(zhēng)性地抑制血小板激活因子與血小板受體的結(jié)合[9，10]，是紅花活血化瘀的主要有效成分。試驗(yàn)結(jié)果表明， 25%甲醇對(duì)羥基紅花黃色素 A 的提取效果最佳，雜質(zhì)干擾最小。選用25%甲醇為提取溶劑，分別超聲處理10、20、30、40 min后進(jìn)樣，結(jié)果超聲處理30 min 即可將供試品中羥基紅花黃色素A 提取完全，故采用25%甲醇為提取劑、超聲處理30 min 為羥基紅花黃色素A提取方法。

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