摘要：為了探索優(yōu)化超聲波輔助提取格爾木產(chǎn)枸杞（Lycium barbarum L.）多糖的最佳工藝條件，以枸杞多糖得率為指標(biāo)，用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)L9（34）對(duì)料液比、提取時(shí)間、提取溫度和超聲波功率4個(gè)因素進(jìn)行考察，確定超聲波輔助提取枸杞多糖的最佳工藝，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果表明，超聲波輔助提取枸杞多糖的最佳工藝條件為提取溫度50 ℃、提取時(shí)間10 min、料液比1∶20（m/V，g∶mL）、超聲波功率50 W，在該條件下，格爾木產(chǎn)枸杞中多糖得率為3.006%。

關(guān)鍵詞：枸杞（Lycium barbarum L.）多糖；超聲波輔助提取法；得率

中圖分類號(hào)：R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）16-3933-03

枸杞（Lycium barbarum L.）作為一味傳統(tǒng)常用的中藥，臨床使用歷史久遠(yuǎn)。枸杞的主要活性成分枸杞多糖日益得到重視[1，2]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明，枸杞多糖有較強(qiáng)的免疫活性，是有效的免疫增強(qiáng)劑，在細(xì)胞免疫和體液免疫中具有重要作用，并以此為基礎(chǔ)發(fā)揮枸杞多糖的多種功能，對(duì)機(jī)體細(xì)胞起到保護(hù)作用[3，4]。枸杞多糖的藥理作用和無(wú)不良反應(yīng)展示了其在新藥及功能食品研究上具有廣闊的前景[5]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料與試劑 枸杞產(chǎn)自青海省格爾木市大格勒鄉(xiāng)，甲醇（分析純）購(gòu)自天津市大茂化學(xué)試劑廠，無(wú)水葡萄糖（分析純）購(gòu)自山東省萊陽(yáng)市化工實(shí)驗(yàn)廠，無(wú)水乙醇（分析純）和三氯甲烷（分析純）購(gòu)自天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司，苯酚（分析純）購(gòu)自北京化工廠。

1.1.2 儀器與設(shè)備 FA2104S型電子天平購(gòu)自上海精密科學(xué)儀器有限公司，LG10-2.4A型高速離心機(jī)購(gòu)自北京醫(yī)用離心機(jī)廠，DZX-6090B型真空干燥箱購(gòu)自上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，DL201-2型電熱恒溫干燥箱購(gòu)自天津市實(shí)驗(yàn)儀器廠，KH-250DB型數(shù)控超聲波清洗儀購(gòu)自昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司，RZ-3000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀購(gòu)自上海亞榮生化儀器廠，722S型分光光度計(jì)購(gòu)自上海分析儀器廠。

1.2 方法

1.2.1 枸杞多糖得率的測(cè)定

1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。多糖濃度的測(cè)定采用苯酚-硫酸比色法。精確稱取在105 ℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖50 mg加入100 mL的容量瓶中，加去離子水定容，得到葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液[6-8]。分別吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于50 mL容量瓶中，加去離子水稀釋至刻度，然后各取1.0 mL于10 mL比色皿中，分別加入50 g/L苯酚溶液1.0 mL，搖勻后加入5.0 mL濃硫酸，搖蕩，在沸水浴中加熱15 min，冷卻至室溫。以去離子水作空白對(duì)比，在最佳吸收波長(zhǎng)處測(cè)吸光度，繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)方程。

2）枸杞多糖得率的測(cè)定。將得到的枸杞多糖濾液稀釋至合適濃度，精確吸取待測(cè)液1.0 mL置于10 mL比色皿中，按上述方法測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)方程計(jì)算多糖濃度[6]，即可得到枸杞多糖得率。

1.2.2 單因素試驗(yàn) ①料液比對(duì)枸杞多糖得率的影響。在最大吸收波長(zhǎng)485 nm下，分別選取料液比1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30（m/V，g∶mL，下同）進(jìn)行試驗(yàn)。②提取時(shí)間對(duì)枸杞多糖得率的影響。在最大吸收波長(zhǎng)485 nm、料液比1∶15下，分別選取提取時(shí)間1、3、6、10、15、20 min進(jìn)行試驗(yàn)。③提取溫度對(duì)枸杞多糖得率的影響。在最大吸收波長(zhǎng)485 nm下，分別在40、45、50、55、60、65、70 ℃下進(jìn)行試驗(yàn)。④超聲波功率對(duì)枸杞多糖得率的影響。在最大吸收波長(zhǎng)485 nm下，分別在30、40、50、60、70、80、90 W下進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2.3 正交試驗(yàn) 根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，考察提取溫度、提取時(shí)間、料液比和超聲波功率4個(gè)因素對(duì)枸杞多糖得率的影響，按正交設(shè)計(jì)表L9（34）進(jìn)行四因素三水平的正交試驗(yàn)，試驗(yàn)的因素與水平見表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 最大吸收波長(zhǎng)的確定和標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

5種不同濃度的葡萄糖溶液的吸光度如表2所示，0.05 mg/mL葡萄糖溶液的波長(zhǎng)-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示，綜合分析確定，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品的最大吸收波長(zhǎng)為485 nm。在485 nm波長(zhǎng)下葡萄糖溶液的濃度0.01、0.02、0.03、0.04和0.05 mg/mL與吸光度成線性關(guān)系，回歸線性方程為A=12.05C+0.051，r=0.992 7。

2.2 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 料液比對(duì)枸杞多糖得率的影響 由圖2可知，隨著料液比的減少，枸杞多糖得率先增加，但在料液比小于1∶25后，枸杞多糖得率反而下降。綜合考慮提取效率和能耗，初步確定料液比為1∶20或者1∶25。

2.2.2 提取時(shí)間對(duì)枸杞多糖得率的影響 由圖3可知，當(dāng)提取時(shí)間增加時(shí)，多糖得率也隨之增加，但提取時(shí)間過(guò)長(zhǎng)也不適宜于多糖的提取，過(guò)長(zhǎng)的提取時(shí)間不但會(huì)加大多糖水解的程度，還會(huì)增加能耗。選取提取時(shí)間10～15 min為宜。

2.2.3 提取溫度對(duì)枸杞多糖得率的影響 由圖4可知，隨著提取溫度的增加，多糖得率也在增加，當(dāng)提取溫度大于60 ℃時(shí)，多糖得率的增加不太明顯，由于提取溫度太高會(huì)影響多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)，綜合以上分析確定提取溫度為50～60 ℃為宜。

2.2.4 超聲波功率對(duì)枸杞多糖得率的影響 由圖5可知，超聲波功率大于60 W對(duì)提取效果影響不是很明顯，根據(jù)KH-250DB型數(shù)控超聲波清洗儀的具體情況確定超聲波功率50～60 W為佳。

2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果

由表3可知，料液比對(duì)枸杞多糖得率的影響最大，4個(gè)因素對(duì)超聲波輔助提取工藝的影響程度依次為料液比>超聲波功率>提取溫度>提取時(shí)間，最佳提取工藝為A2B1C3D1，即提取溫度為50 ℃，提取時(shí)間為10 min，料液比為1∶20，超聲波功率為50 W。

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

驗(yàn)證試驗(yàn)中1號(hào)和2號(hào)試驗(yàn)材料為格爾木產(chǎn)枸杞，3號(hào)試驗(yàn)為寧夏回族自治區(qū)中衛(wèi)市中寧縣產(chǎn)枸杞。由表4可知，所確定的最佳提取工藝相對(duì)穩(wěn)定，以最佳工藝條件提取的格爾木產(chǎn)枸杞多糖平均得率為3.006%，寧夏回族自治區(qū)中衛(wèi)市中寧縣產(chǎn)枸杞多糖得率為2.197%。這與一些文獻(xiàn)記載的得率相一致[7，8]。

格爾木產(chǎn)枸杞中多糖含量高于寧夏回族自治區(qū)中衛(wèi)市中寧縣產(chǎn)枸杞，這是因?yàn)楦駹柲捐坭椒N植基地位于柴達(dá)木盆地，受降水量少、日照時(shí)間長(zhǎng)、晝夜溫差大等氣候特征影響，這里的枸杞以顆粒大、子少肉厚、味道比較甜、含糖量高而著稱。

3 小結(jié)

枸杞多糖超聲波輔助提取的最佳工藝條件為提取溫度50 ℃、提取時(shí)間10 min、料液比1∶20、超聲波功率50 W，在該條件下，格爾木產(chǎn)枸杞多糖的得率為3.006%，多糖含量比寧夏回族自治區(qū)中衛(wèi)市中寧縣產(chǎn)枸杞的高。

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