【摘 要】 目的：了解目前臨床上常用的幾種丙型肝炎抗體（抗-HCV）酶聯(lián)免疫診斷試劑的質量情況。方法：選用三種國內不同廠家生產的抗-HCV酶聯(lián)免疫診斷試劑盒，對40份來自醫(yī)院的抗-HCV陽性病人血清（以雅培i1000檢測結果為準）、40份常規(guī)體檢抗-HCV陰性血清、1份上海市臨檢中心抗-HCV室內質控品進行檢測。從而對三種試劑的靈敏度、特異性、相對符合率及精密度進行分析。結果：三種國產試劑靈敏度均達100%。其中試劑盒A和試劑盒C的相對特異性均為97.5%，相對符合率均為98.75%。試劑盒B的相對特異性與相對總符合率均為100%。三家廠家試劑CV分別為14.8%、13.3%、10.9%。結論：國產抗-HCV酶聯(lián)免疫試劑靈敏度已符合要求，特異性及精密度的提高依然是主要問題。影響試劑盒質量的因素是多方面的，不同批次試劑盒在使用前應注意抽檢，以確保檢測結果的可靠。陽性結果應做兩次檢驗，避免假陽性結果的報出。

【關鍵詞】 肝炎病毒；HCV；抗-HCV抗體；酶聯(lián)免疫法；試劑盒

【中圖分類號】 R446.6 【文獻標識碼】 B

QUALITY ANALYSIS OF SEVERAL ANTI-HCV EIA KITS

Zhang Qianlan Zhang Jian Liu Xiaoyan*

（Shanghai Obstetrics and Gynecology Hospital， Fudan University， Huangpu ，Shanghai， 200011）

【Abstract】 Objective： To investigate the quality of several anti-HCV EIA kits in common market. Methods： 40 patients sera which were positive for anti-HCV（confirmed with Abbott i1000），40 samples which were negative for anti-HCV and one quality control materials of Shanghai Centre for Clinical Laboratory were detected by using three kinds of anti-HCV EIA kits which made of different manufactories. So the sensitivity and specificity and precision of each kit were calculated and the ability of each kit to detect the anti-HCV was also analyzed. Results： The sensitivity of three domestic anti-HCV EIA kits all reached 100%.The specificity of kit A and kit C reached 97.5% which of kit B reached 100%.The compliance rate of kit A and kit C reached 98.75% which of kit B reached 100%.The CV values of kits were 14.8%，13.3% and 10.9%. Conclusion： The sensitivity of domestic anti-HCV kits has already meet the requirements. But those kits still need improve the specificity. The factors which affect the quality of kit are variety. We should make the quality analysis before that kit of different batch number being used to ensure the reliable results. The positive results should be detected twice to avoid the 1 positive.

【Keywords】 hepatitis virus； HCV； anti-HCV； ELISA；EIA kits

1 材料與方法

1.1 樣本 從各家醫(yī)院收集的肝炎病人抗-HCV陽性血清（-20℃保存）26份（已用雅培i1000檢測確認，無溶血、乳糜標本），從中隨機各抽取200μl血清兩兩混合，組成混合陽性血清14份（每份400μl）。（見表1）

全部陽性血清編號為1-40；上海市臨檢中心2009年正常體檢標本40份（已用雅培i1000檢測確認），編號為41-80；上海市臨檢中心抗-HCV室內調查品1份（批號1001）。2℃-8℃冰箱保存。

1.2 材料

1.2.1 試劑 北京某廠家生產抗-HCV試劑盒（96孔），批號2009090810，編號試劑A；上海某廠家生產抗-HCV試劑盒（96孔），批號201001021，編號試劑B；上海某廠家生產抗-HCV試劑盒（96孔），批號20100101，編號試劑C。三種試劑盒均具有中國藥品生物制品檢定所批檢合格報告單，每盒均在有效期內，有防偽標簽。所用包被抗原均為合成多肽及基因工程抗原（包括HCV病毒結構區(qū)核心抗原和非結構區(qū)抗原）。2-8℃冰箱避光保存。

1.2.2 洗板機 Wellwash 4 Mk 2（Labsystems Dragon，芬蘭）

1.2.3 酶標儀 Wellscan Mk 3（Labsystems Dragon，芬蘭）

1.2.4 其他 ARCHITECT i1000化學發(fā)光免疫分析儀（Abbott雅培，美國）

1.3 方法 將收集的26份抗-HCV陽性血清標本用雅培i1000檢測，隨機抽取部分標本兩兩吸樣混合，制成14份混合陽性血清標本。將所有40份抗-HCV陽性標本與40份陰性標本編號1-80。將精密度參考品10孔連續(xù)加樣，編號901-910。用三種待評定丙型肝炎病毒抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑盒嚴格按照說明書方法進行檢測。

2 實驗結果

2.1 靈敏度、特異性與總符合率 以雅培i1000的檢測結果為相對標準，凡試劑盒檢出標準品的陽性結果與標準品的預期陽性結果相一致的稱為真陽性以a表示，凡不符合的結果為假陽性以b表示。試劑盒檢出的標準品陰性結果與標準品預期的陰性結果一致時為真陰性以d表示，不符合的為假陰性以c表示。按照下列公式計算各項評價試劑指標：靈敏度=（a/a+c）×100%（某試驗從已知某一種病的人群中檢出這一病真正陽性結果的率）；特異性=（d/b+d）×100%（某試驗能從某一人群中檢出某一疾病的陰性結果的能力）；符合率=（a+d/a+b+c+d）×100%（某試驗能從陽性患者中測出陽性結果和從陰性人群中測出陰性結果的能力）。

抽檢的三種國產丙型肝炎試劑盒，每個批次的相對靈敏度均為100%。其中試劑盒A和試劑盒C的相對特異性均為97.5%，相對符合率均為98.75%。試劑盒B的相對特異性與相對總符合率均為100%。

2.1.1 試劑A

2.2 精密度 用三家廠家生產的抗-HCV酶聯(lián)免疫診斷試劑盒分別檢測精密度參考品（抗-HCV室內調查品，2NCU/ml），每板內連續(xù)檢測10孔。計算每孔的吸光度（A）值與cutoff的比值（S/CO值）、變異系數(shù)（CV）。（表5）

3 討論與結論

我國的抗-HCV診斷試劑自1993年面世以來，其質量已取得了很大進展。自1994年5月國家對抗-HCV試劑實行批批檢定以來，已有多份的抗-HCV EIA試劑用于供血員和血液制品篩查，國內丙型肝炎的發(fā)病率已明顯下降[2]。EILSA試驗以其操作簡便、靈敏度高和特異性強等特點而廣泛應用于全國各級醫(yī)療機構，但其受其他因素影響較大，如加樣準確性、溫育時間、試劑反應溫度、洗板效果、酶標儀準確性等。因此實驗中嚴格按照試劑盒說明書進行操作并努力減少操作誤差是獲得最佳實驗結果的關鍵[3]。由于抗-HCV陽性標本收集較為困難，在幾個月的時間內無法收集大量標本，因此在實驗中采用陽性標本混合稀釋的方法使標本量達到所需數(shù)量。但人類血清成分復雜多變，雖然同為血清，但混合后不可避免地也會產生一定基質效應，經過處理的混合血清，由于血清機制的理化性質在處理過程中的改變，在常規(guī)測定上往往出現(xiàn)基質偏差。關于不同血清成分組合對標本稀釋后的影響的研究也正在進行，如劉沛等所做的混合血清法篩檢丙型肝炎抗體的前瞻性研究。為使基質效應的影響降至最低，標本混合后應及時測定，以免血清成分發(fā)生改變對測定結果造成影響，也可避免標本反復凍融影響檢測結果。

從實驗結果來看，三個品牌試劑盒檢測的相對靈敏度均達到100%，而特異性也分別達到了97.5%和100%，相對符合率達到了98.75%和100%?？梢钥闯鰢鴥葟S家自從開發(fā)了第三代抗-HCV EIA試劑盒，其檢測的靈敏度與特異性均較第二代試劑有了很大的提高，對于陽性較強標本無一漏檢。特異性方面，試劑A與試劑B都有1例假陽性（經過雅培i1000復檢2例標本抗-HCV S/CO值分別為0.08與0.12），可以看出檢測試劑在假陽性率方面還有待加強，各醫(yī)療單位在日常檢測中如遇陽性結果不應直接報出，而應復檢。若兩次結果皆為陽性才可認為是陽性。三廠牌試劑盒的CV值均小于15%，但其較高的CV值顯示出三種試劑的精密度有待提高。當然由于手工ELISA方法的特性，檢測過程中的影響因素多樣，如操作人員水平、溫育時間控制等等，容易造成操作誤差，因此精密度的結果與儀器檢測相比稍遜一籌也是可以接受的結果[3]。

可以看出國產抗-HCV酶聯(lián)免疫試劑靈敏度已符合要求，特異性及精密度的提高依然是主要問題。影響試劑盒質量的因素是多方面的，不同批次試劑盒在使用前應注意抽檢，以確保檢測結果的可靠。陽性結果應做兩次檢驗，避免假陽性結果的報出。

參考文獻

[1] 祁自柏，周城，揚振.第3代丙肝試劑國家參考品的研制及初步應用[J].中國生物測品學雜志.1999，12（2）：103-105.

[2] 于洋，祁自柏，周誠，谷金蓮，楊振，張庶民，張華遠，李河民.國產抗HCV酶聯(lián)免疫診斷試劑質量分析[J].中國預防醫(yī)學雜志，2001，2（3）：168-170.

[3] 伍建寧，夏傳友，李交，等.自動化酶免檢測系統(tǒng)與手工酶免檢測的對比評價[J].上海醫(yī)學檢驗雜志.2001，16：294-295.