黃志堅(jiān) 福建省三明市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 365000

口蹄疫（foot and mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（FMDV）所致的偶蹄動(dòng)物共患的急性、熱性、高度接觸性傳染病。臨床上以口腔黏膜、蹄部及乳房皮膚發(fā)生水皰和潰爛為主要特征。該病具有流行快、傳播廣、發(fā)病急、危害大等流行病學(xué)特點(diǎn)。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A類家畜傳染病之首。自1514年FMD首次報(bào)道以來，世界各地均有暴發(fā)流行，對(duì)家畜養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展造成嚴(yán)重威脅［1-2］。在我國(guó)，防治豬O型FMD主要采用疫苗免疫與撲殺等綜合性防治措施相結(jié)合的方法，收到了較明顯的效果，但由于傳統(tǒng)的滅活疫苗質(zhì)量參差不齊，干擾因素多，免疫效果不理想，對(duì)野毒與疫苗產(chǎn)生的抗體鑒別困難，且應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)烈，甚至造成死亡等情況，給廣大養(yǎng)殖戶帶來巨大損失，故使研究安全、高效的新型口蹄疫疫苗成為研究熱點(diǎn)。豬口蹄疫O型合成肽疫苗是采用固相多肽合成技術(shù)制作而成，具有良好的免疫原性和安全性，是近年來主要推廣的新型豬口蹄疫疫苗。

2012年，三明市引進(jìn)豬口蹄疫O型合成肽疫苗并在全市范圍內(nèi)推廣，為了解掌握其臨床應(yīng)用效果，為制定科學(xué)的免疫程序提供可靠依據(jù)。應(yīng)用豬口蹄疫O型合成肽疫苗、豬口蹄疫O型滅活疫苗進(jìn)行免疫效果對(duì)比試驗(yàn)。通過觀察免疫后臨床反應(yīng)和檢測(cè)免疫后21 d、28 d后的抗體效價(jià)水平，對(duì)兩種疫苗臨床應(yīng)用效果進(jìn)行比較?，F(xiàn)將試驗(yàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 從某規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)選用品種、來源相同的50日齡左右的同一批體質(zhì)健康仔豬200頭。

1.1.2 疫苗 豬口蹄疫O型滅活疫苗和豬口蹄疫O型合成肽疫苗均采購(gòu)于同一家疫苗生產(chǎn)企業(yè)。

1.1.3 試劑盒 豬O型口蹄疫VPl抗體檢測(cè)試劑盒，上海優(yōu)耐特生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：201209019；口蹄疫O型正向間接血凝試驗(yàn)診斷液，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號(hào)：121017。

1.2 方法

1.2.1 分組 200頭豬隨機(jī)分為2組（A組和B組），每組100頭。A組接種豬口蹄疫O型滅活疫苗；B組接種豬口蹄疫O型合成肽疫苗。

1.2.2 免疫劑量 按照說明書的免疫劑量對(duì)試驗(yàn)豬只進(jìn)行免疫接種?？谔阋逴型滅活疫苗，每頭仔豬2 mL；口蹄疫O型合成肽疫苗，每頭仔豬1mL。

1.2.3 樣品采集 疫苗免疫前采血檢測(cè)母源抗體；免疫后分別于21 d、28 d采血檢測(cè)。

1.2.4 檢測(cè)方法 母源抗體和滅活疫苗的抗體使用豬口蹄疫O型正向間接血凝試驗(yàn)檢測(cè)；免疫合成肽疫苗的抗體使用VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.5 判定標(biāo)準(zhǔn) 正向間接血凝試驗(yàn)，抗體效價(jià)≥25判定為免疫合格；VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA，抗體效價(jià)≥25判定為免疫合格。

2 結(jié)果

2.1 免疫應(yīng)激反應(yīng)觀察結(jié)果 對(duì)免疫接種的200頭生豬進(jìn)行觀察和登記，第1 d每4 h觀察1次，第2 d每8 h觀察1次，第3 d每12 h觀察1次，結(jié)果A組中有5頭試驗(yàn)豬出現(xiàn)輕度應(yīng)激反應(yīng)，主要表現(xiàn)為體溫升高0.5～1℃，減食1～2 d，個(gè)別豬只注射部位腫脹，觀察期內(nèi)未發(fā)生死亡；B組未發(fā)現(xiàn)任何不良應(yīng)激反應(yīng)。

2.2 母源抗體正向間接血凝試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果 在進(jìn)行疫苗免疫前用正向間接血凝試驗(yàn)對(duì)200頭試驗(yàn)豬進(jìn)行母源抗體檢測(cè)，其抗體效價(jià)均＜25。

2.3 免疫21 d后抗體檢測(cè)結(jié)果 由表1可見，免疫21 d后對(duì)A組和B組試驗(yàn)豬進(jìn)行抗體水平檢測(cè)，抗體效價(jià)合格的有133份，平均免疫合格率為66.5%。其中A組100份血清有45份的抗體效價(jià)≥25，免疫合格率為45%；B組100份血清有88份血清的抗體效價(jià)≥25，免疫合格率為88%。

表1 免疫21 d后試驗(yàn)組抗體檢測(cè)結(jié)果

2.4 免疫28 d后抗體檢測(cè)結(jié)果 由表2可見，免疫28 d后對(duì)A組和B組試驗(yàn)豬進(jìn)行抗體水平檢測(cè)，抗體效價(jià)合格的有155份，平均免疫合格率為77.5%。其中A組100份血清有62份的抗體效價(jià)≥25，免疫合格率為62%；B組100份血清有93份血清的抗體效價(jià)≥25，免疫合格率為93%。

表2 免疫28 d后試驗(yàn)組抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

1）從檢測(cè)結(jié)果來看，A組和B組的試驗(yàn)結(jié)果存在較為明顯的差異。A組免疫21 d后抗體平均合格率僅為45%，免疫28 d后上升至62%，雖然抗體上升的幅度較大，但仍低于農(nóng)業(yè)部規(guī)定的抗體合格率高于70%的要求，說明口蹄疫滅活疫苗在臨床上一次免疫效果偏差，達(dá)不到國(guó)家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)范圍；B組免疫21 d后抗體平均合格率為88%，比A組高出43個(gè)百分點(diǎn)，免疫28 d后上升至93%，比A組高出31個(gè)百分點(diǎn)，說明合成肽疫苗一次免疫效果良好，且在免疫21 d后其抗體合格率就達(dá)到了峰值。由此可見，免疫接種疫苗21 d和28 d后，免疫口蹄疫合成肽疫苗的合格率都高于傳統(tǒng)的滅活疫苗的合格率，從而表現(xiàn)出口蹄疫合成肽疫苗良好的免疫原性。

2）從疫苗免疫后臨床應(yīng)激反應(yīng)的觀察來看，接種合成肽疫苗的豬只在觀察期內(nèi)精神狀態(tài)良好，各項(xiàng)生理指標(biāo)正常，未出現(xiàn)體溫升高、食欲下降、呼吸困難等不良反應(yīng)，而接種滅活疫苗的豬只在觀察期24 h內(nèi)，先后有5頭出現(xiàn)輕度應(yīng)激反應(yīng)，主要表現(xiàn)為焦躁不安、呼吸加快、肌肉震顫、口吐白沫等，在注射腎上腺素后逐漸恢復(fù)正常。臨床上出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)主要是由于滅活疫苗中含有大量異體蛋白，對(duì)致敏因子引起變態(tài)反應(yīng)，而合成肽疫苗采用人工多肽合成技術(shù)，是一種單一抗原，不存在異體蛋白，能有效避免異體蛋白引起不良應(yīng)激反應(yīng)。由該次試驗(yàn)臨床觀察來看，口蹄疫合成肽疫苗具有良好的生物安全性，不易產(chǎn)生過敏反應(yīng)。這與朱玉華等［3］關(guān)于合成肽疫苗安全、穩(wěn)定及副反應(yīng)小等特點(diǎn)的報(bào)道相一致。

3）由于某些原因，該次試驗(yàn)未對(duì)兩種疫苗二次免疫的效果進(jìn)行比較，但從該次試驗(yàn)結(jié)果表明，豬口蹄疫O型合成肽疫苗比傳統(tǒng)的滅活疫苗更快誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，且抗體維持時(shí)間也較長(zhǎng)。這與周靜華等［4］應(yīng)用合成肽苗首免后4周抗體合格率已達(dá)到80%以上的結(jié)果基本一致，說明該疫苗高效、安全、副反應(yīng)小，是目前預(yù)防豬O型口蹄疫的理想疫苗。

［1］ 白文彬，于康震.動(dòng)物傳染病診斷學(xué)［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2002：543-549.

［2］ 李國(guó)平.規(guī)模豬場(chǎng)傳染病診斷與防治［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科技出版社，2001：85-90.

［3］ 朱玉華，陳亮.生豬注射口蹄疫滅活苗引起免疫應(yīng)激的防治［J］.安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2007，13（18）：223.

［4］ 周靜華，李巧根，張曉東，等.豬口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果實(shí)驗(yàn)［J］.上海畜牧獸醫(yī)通訊，2009（2）：56.