康黎芳，李永平，曹冬梅，張 超，段九菊，王云山

（山西省農(nóng)業(yè)科學院園藝研究所，山西太原030031）

安祖花（Anthuium andraeanum Lind）是天南星科多年生草本植物，其花形獨特，花色艷麗，已成為全球銷售量僅次于熱帶蘭的第二大商品花卉。安祖花生長緩慢，生長周期長，繁殖困難，一般采取分株繁殖的方式，但是繁殖率低，無法滿足生產(chǎn)的需求。因此，開發(fā)一種新的安祖花繁殖方法非常必要。近年來，植物組培快繁技術(shù)被廣泛應用于各種觀賞植物的繁殖上。據(jù)報道，組培快繁技術(shù)已用于滿天星[1]、蝴蝶蘭[2-3]、鳳梨[4-5]、大花蕙蘭[6]、百合[7-8]等的繁殖上。目前，安祖花的繁殖主要是通過組培快繁的途徑，很多研究指出，安祖花的不同品種及不同器官和部位對誘導條件的反應有所不同[9-21]。

本研究主要以安祖花的幼嫩葉片為外植體，研究其組培快繁的最佳培養(yǎng)基配方，尋找最優(yōu)化的安祖花再生體系，從而為生產(chǎn)提供優(yōu)質(zhì)種苗。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

供試材料為安祖花，由山西省農(nóng)業(yè)科學院園藝研究所花卉中心提供，選擇生長健壯、葉色濃綠、無病斑的具有一定市場價值的品種阿里桑娜（Arizona）、阿米戈（Amigo）、亞特蘭大（Atlanta）和情人紅（SH Red）。

1.2 試驗方法

1.2.1 不同滅菌時間對外植體污染率和存活率的影響 選取剛展開的幼嫩葉片、成葉、葉柄、花梗、花序、根和苞片，用自來水沖洗10～15 min，然后轉(zhuǎn)入0.1%HgCl2溶液中消毒。試驗設(shè)3個處理：0.1%HgCl2分別滅菌5，10，15 min，用無菌水沖洗3～4次備用。每瓶接種5～6塊，10 d后統(tǒng)計不同滅菌時間對不同外植體滅菌效果的影響。

1.2.2 愈傷組織誘導培養(yǎng)基篩選 試驗選用基本培養(yǎng)基5種（1/3 MS，1/3 MS（NH4NO3為200 mg/L），1/2 MS，MS（NH4NO3為200 mg/L），MS），附加不同質(zhì)量濃度的6-BA（0.5，1.0，1.5，2.0 mg/L）和2，4-D（0.05，0.1，0.2，0.5 mg/L），蔗糖30 g/L，瓊脂5 g/L，共80個處理。每處理5瓶，每瓶接種4塊，重復3次。

1.2.3 不定芽分化增殖培養(yǎng)基篩選 試驗選用基本培養(yǎng)基6種（1/3 MS，1/2 MS，MS，MS（NH4NO3為為720 mg/L）），附加不同質(zhì)量濃度的6-BA（0，0.25，0.50，0.75，1.00 mg/L）或KT（0，0.25，0.50，0.75，1.00 mg/L），蔗糖30 g/L，瓊脂5 g/L，共60個處理。每個處理5瓶，每瓶接種4塊生長良好的愈傷塊，重復3次。

1.2.4 生根培養(yǎng)基篩選 基本培養(yǎng)基為1/2 MS，分別附加不同質(zhì)量濃度IBA（0.05，0.1，0.2，0.5，1.0mg/L）或NAA（0.05，0.1，0.2，0.5，1.0 mg/L），共10個處理。每處理5瓶，每瓶接種4塊，重復3次。

2 結(jié)果與分析

2.1 滅菌時間對不同外植體滅菌效果的影響

外植體的選取關(guān)系到能否成功誘導出愈傷組織，是組培快繁成功的第1步，為了探討不同的氯化汞處理時間對不同外植體污染的影響，分別選取幼葉、成葉、葉柄、花梗、花序、根和苞片進行不同滅菌時間的研究，其結(jié)果列于表1。

表1 滅菌時間對不同外植體滅菌效果的影響

一般情況下，如果材料消毒不徹底，在接種第3天左右即開始出現(xiàn)污染，在接種10 d后污染基本穩(wěn)定。本試驗結(jié)果（表1）表明，隨著氯化汞消毒時間的增加，滅菌效果隨之提高，污染率降低，其中，幼葉的污染率從5 min的46.0%減少到15 min的3.3%；成齡葉、葉柄等都有相同趨勢。但隨著消毒時間的增加，外植體的褐死率隨之提高，造成存活率下降，其中，幼葉的存活率由10 min的80%降到15 min的43%。但由于幼葉5 min的污染率較高，所以，5 min的存活率反而比10 min的低。

綜合考慮，安祖花的成葉、葉柄、花梗、佛焰苞片的消毒時間以氯化汞15 min為宜，幼葉以10 min為宜，而花序在試驗的氯化汞濃度范圍內(nèi)全部污染。為了保證培養(yǎng)材料的無菌，避免污染帶來的損失，滅菌時間在可能的范圍內(nèi)宜稍長一些。

2.2 不同外植體對愈傷組織誘導的影響

植物不同器官的脫分化能力不同，本試驗的材料包括幼葉、成葉、葉柄、花梗、根、佛焰苞片、花序7個部分，其中，葉片和苞片根據(jù)不同部位剪成1 cm2大小，花梗、葉柄、根段切成0.5 cm長，花序切成0.5 cm2的小塊，將以上材料接種于愈傷組織誘導培養(yǎng)基上。結(jié)果（表2）表明，不同部位誘導愈傷的難易程度不同，幼葉最易誘導形成愈傷組織，其次是花序，而成熟的葉片、花梗和根段在供試的安祖花品種中均未誘導出愈傷。不同品種的安祖花外植體誘導愈傷組織的難易程度也不盡相同，如阿里桑娜和情人紅可以用葉柄誘導出愈傷組織，而阿米戈和亞特蘭大誘導失敗。因此，綜合考慮取材的難易等因素，安祖花組培外植體以選擇生長10 d左右的幼葉為佳。

2.3 愈傷組織誘導培養(yǎng)基篩選

對5個基本培養(yǎng)基配方附加不同濃度的6-BA和2，4-D共計80個配方的研究發(fā)現(xiàn)，在葉片愈傷組織的誘導過程中細胞分裂素的作用非常明顯，無論是培養(yǎng)20 d還是60 d，均以6-BA 0.5 mg/L愈傷組織誘導率最高，此后隨6-BA濃度增加愈傷組織誘導率下降（表3）。

表2 不同取材部位對愈傷組織誘導率的影響%

表3 不同培養(yǎng)基配比對阿里桑娜愈傷組織誘導率的影響%

2.4 不定芽分化增殖培養(yǎng)基篩選

每個處理接種20塊生長良好的愈傷組織，觀察不同處理對愈傷組織不定芽分化的影響，結(jié)果顯示，只有4個配方有較多的芽形成，其余配方或愈傷組織褐化或發(fā)芽數(shù)極少而不具有統(tǒng)計意義。4個配方的分化結(jié)果列于表4。

由表4可知，6-BA為1 mg/L時繁殖系數(shù)較高，但在6-BA定量的情況下，1/2 MS繁殖系數(shù)顯著高于1/3 MS。說明在4個配方中，以1/2 MS＋6-BA 1 mg/L誘導不定芽分化培養(yǎng)基效果最好，其次為1/3 MS＋6-BA 1 mg/L。

各品種雖然在不同的調(diào)查天數(shù)發(fā)芽率不同，但是對培養(yǎng)基的反應基本一致，均以1/2 MS＋6-BA 1 mg/L＋瓊脂6 g/L＋蔗糖30 g/L最好。在對4個品種的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，各個品種芽分化的能力不一，以阿里桑娜最容易進行芽的分化。

表4 不同培養(yǎng)基配方對不定芽分化的影響

2.5 生根培養(yǎng)基篩選

試驗結(jié)果（表5）表明，在生根培養(yǎng)基中附加IBA的生根率極顯著高于附加NAA的培養(yǎng)基，其中，在附加IBA的各質(zhì)量濃度中，以IBA 0.05 mg/L生根率最高，顯著高于附加IBA 1 mg/L的培養(yǎng)基，而與附加IBA 0.1，0.2，0.5 mg/L的生根率間沒有顯著差異。安祖花試管苗生根培養(yǎng)基以1/2 MS＋IBA 0.05 mg/L＋瓊脂6 g/L＋蔗糖30 g/L最佳。

表5 不同培養(yǎng)基配方對阿里桑娜生根的影響

3 討論

外植體進行徹底的消毒滅菌是組培快繁的前提和保證，目前關(guān)于安祖花外植體消毒的研究并不多。凌雷[17]研究認為，最佳消毒方法是流水沖洗30 min后，用70%酒精浸泡60 s。陳華等[18]研究認為，莖、葉、葉柄的最佳消毒條件分別為0.1%氯化汞消毒15～20，5～7，10～12 min。本試驗結(jié)果顯示，氯化汞對不同外植體的消毒能力不同，一般外植體以氯化汞消毒10～15 min為宜，但是花序組織在試驗的氯化汞濃度范圍內(nèi)，接種后或污染或褐化死亡，最后的成活率為0，這可能是由于花序組織細胞或細胞間隙比葉片等其他部位更適合內(nèi)生菌生存所導致的。

基本培養(yǎng)基保證了培養(yǎng)物的生存與最低的生理活動，但只有配以合適濃度的植物激素才能誘導細胞的分裂、愈傷組織的形成和增殖、芽的分化等生理過程[16]。本試驗結(jié)果表明，在葉片愈傷組織的誘導過程中，細胞分裂素的作用非常明顯，當附加6-BA為0.5 mg/L時愈傷組織形成最多，而2，4-D的作用不太明顯，與前人的研究結(jié)果存在一定的差異[10-12，18]，可能是由于供試的外植體葉片的年齡、部位、取材時間不同或培養(yǎng)條件的不同所造成的[19]。本試驗的結(jié)果還表明，無機鹽的濃度對愈傷組織的形成至關(guān)重要，在某種程度上起著決定作用，當基本培養(yǎng)基為1/3 MS，硝酸銨質(zhì)量濃度降到200 mg/L時，愈傷組織形成數(shù)量最多，而且可以縮短愈傷組織形成的時間，這與劉炤[20-22]等報道的結(jié)果基本一致，但是硝酸銨的最佳濃度略有不同，這可能是由于供試材料選取的品種不同所造成的。

外植體經(jīng)過40～50 d誘導愈傷組織培養(yǎng)后，可將愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上增殖。本試驗結(jié)果表明，以1/2 MS＋6-BA 1 mg/L＋瓊脂6 g/L＋蔗糖30 g/L為最佳培養(yǎng)基，這與前人的研究結(jié)果不完全相同[15-19]。

安祖花試管苗生根比較容易，在小苗的分化過程中常伴有根的生成。本試驗結(jié)果表明，生根培養(yǎng)基以1/2 MS＋IBA 0.05 mg/L＋瓊脂5 g/L＋蔗糖30 g/L最佳，而且在生根培養(yǎng)基中附加IBA的生根率極顯著高于附加NAA的培養(yǎng)基，與已有的報道略有差異[9，13]，可能是由于所使用的外植體材料及培養(yǎng)條件不同所引起的。

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