康黎芳，李永平，曹冬梅，張 超，段九菊，王云山

（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所，山西太原030031）

安祖花（Anthuium andraeanum Lind）是天南星科多年生草本植物，其花形獨(dú)特，花色艷麗，已成為全球銷售量?jī)H次于熱帶蘭的第二大商品花卉。安祖花生長(zhǎng)緩慢，生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，繁殖困難，一般采取分株繁殖的方式，但是繁殖率低，無法滿足生產(chǎn)的需求。因此，開發(fā)一種新的安祖花繁殖方法非常必要。近年來，植物組培快繁技術(shù)被廣泛應(yīng)用于各種觀賞植物的繁殖上。據(jù)報(bào)道，組培快繁技術(shù)已用于滿天星[1]、蝴蝶蘭[2-3]、鳳梨[4-5]、大花蕙蘭[6]、百合[7-8]等的繁殖上。目前，安祖花的繁殖主要是通過組培快繁的途徑，很多研究指出，安祖花的不同品種及不同器官和部位對(duì)誘導(dǎo)條件的反應(yīng)有所不同[9-21]。

本研究主要以安祖花的幼嫩葉片為外植體，研究其組培快繁的最佳培養(yǎng)基配方，尋找最優(yōu)化的安祖花再生體系，從而為生產(chǎn)提供優(yōu)質(zhì)種苗。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料為安祖花，由山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所花卉中心提供，選擇生長(zhǎng)健壯、葉色濃綠、無病斑的具有一定市場(chǎng)價(jià)值的品種阿里桑娜（Arizona）、阿米戈（Amigo）、亞特蘭大（Atlanta）和情人紅（SH Red）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 不同滅菌時(shí)間對(duì)外植體污染率和存活率的影響 選取剛展開的幼嫩葉片、成葉、葉柄、花梗、花序、根和苞片，用自來水沖洗10～15 min，然后轉(zhuǎn)入0.1%HgCl2溶液中消毒。試驗(yàn)設(shè)3個(gè)處理：0.1%HgCl2分別滅菌5，10，15 min，用無菌水沖洗3～4次備用。每瓶接種5～6塊，10 d后統(tǒng)計(jì)不同滅菌時(shí)間對(duì)不同外植體滅菌效果的影響。

1.2.2 愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基篩選 試驗(yàn)選用基本培養(yǎng)基5種（1/3 MS，1/3 MS（NH4NO3為200 mg/L），1/2 MS，MS（NH4NO3為200 mg/L），MS），附加不同質(zhì)量濃度的6-BA（0.5，1.0，1.5，2.0 mg/L）和2，4-D（0.05，0.1，0.2，0.5 mg/L），蔗糖30 g/L，瓊脂5 g/L，共80個(gè)處理。每處理5瓶，每瓶接種4塊，重復(fù)3次。

1.2.3 不定芽分化增殖培養(yǎng)基篩選 試驗(yàn)選用基本培養(yǎng)基6種（1/3 MS，1/2 MS，MS，MS（NH4NO3為為720 mg/L）），附加不同質(zhì)量濃度的6-BA（0，0.25，0.50，0.75，1.00 mg/L）或KT（0，0.25，0.50，0.75，1.00 mg/L），蔗糖30 g/L，瓊脂5 g/L，共60個(gè)處理。每個(gè)處理5瓶，每瓶接種4塊生長(zhǎng)良好的愈傷塊，重復(fù)3次。

1.2.4 生根培養(yǎng)基篩選 基本培養(yǎng)基為1/2 MS，分別附加不同質(zhì)量濃度IBA（0.05，0.1，0.2，0.5，1.0mg/L）或NAA（0.05，0.1，0.2，0.5，1.0 mg/L），共10個(gè)處理。每處理5瓶，每瓶接種4塊，重復(fù)3次。

2 結(jié)果與分析

2.1 滅菌時(shí)間對(duì)不同外植體滅菌效果的影響

外植體的選取關(guān)系到能否成功誘導(dǎo)出愈傷組織，是組培快繁成功的第1步，為了探討不同的氯化汞處理時(shí)間對(duì)不同外植體污染的影響，分別選取幼葉、成葉、葉柄、花梗、花序、根和苞片進(jìn)行不同滅菌時(shí)間的研究，其結(jié)果列于表1。

表1 滅菌時(shí)間對(duì)不同外植體滅菌效果的影響

一般情況下，如果材料消毒不徹底，在接種第3天左右即開始出現(xiàn)污染，在接種10 d后污染基本穩(wěn)定。本試驗(yàn)結(jié)果（表1）表明，隨著氯化汞消毒時(shí)間的增加，滅菌效果隨之提高，污染率降低，其中，幼葉的污染率從5 min的46.0%減少到15 min的3.3%；成齡葉、葉柄等都有相同趨勢(shì)。但隨著消毒時(shí)間的增加，外植體的褐死率隨之提高，造成存活率下降，其中，幼葉的存活率由10 min的80%降到15 min的43%。但由于幼葉5 min的污染率較高，所以，5 min的存活率反而比10 min的低。

綜合考慮，安祖花的成葉、葉柄、花梗、佛焰苞片的消毒時(shí)間以氯化汞15 min為宜，幼葉以10 min為宜，而花序在試驗(yàn)的氯化汞濃度范圍內(nèi)全部污染。為了保證培養(yǎng)材料的無菌，避免污染帶來的損失，滅菌時(shí)間在可能的范圍內(nèi)宜稍長(zhǎng)一些。

2.2 不同外植體對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響

植物不同器官的脫分化能力不同，本試驗(yàn)的材料包括幼葉、成葉、葉柄、花梗、根、佛焰苞片、花序7個(gè)部分，其中，葉片和苞片根據(jù)不同部位剪成1 cm2大小，花梗、葉柄、根段切成0.5 cm長(zhǎng)，花序切成0.5 cm2的小塊，將以上材料接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。結(jié)果（表2）表明，不同部位誘導(dǎo)愈傷的難易程度不同，幼葉最易誘導(dǎo)形成愈傷組織，其次是花序，而成熟的葉片、花梗和根段在供試的安祖花品種中均未誘導(dǎo)出愈傷。不同品種的安祖花外植體誘導(dǎo)愈傷組織的難易程度也不盡相同，如阿里桑娜和情人紅可以用葉柄誘導(dǎo)出愈傷組織，而阿米戈和亞特蘭大誘導(dǎo)失敗。因此，綜合考慮取材的難易等因素，安祖花組培外植體以選擇生長(zhǎng)10 d左右的幼葉為佳。

2.3 愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基篩選

對(duì)5個(gè)基本培養(yǎng)基配方附加不同濃度的6-BA和2，4-D共計(jì)80個(gè)配方的研究發(fā)現(xiàn)，在葉片愈傷組織的誘導(dǎo)過程中細(xì)胞分裂素的作用非常明顯，無論是培養(yǎng)20 d還是60 d，均以6-BA 0.5 mg/L愈傷組織誘導(dǎo)率最高，此后隨6-BA濃度增加愈傷組織誘導(dǎo)率下降（表3）。

表2 不同取材部位對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率的影響%

表3 不同培養(yǎng)基配比對(duì)阿里桑娜愈傷組織誘導(dǎo)率的影響%

2.4 不定芽分化增殖培養(yǎng)基篩選

每個(gè)處理接種20塊生長(zhǎng)良好的愈傷組織，觀察不同處理對(duì)愈傷組織不定芽分化的影響，結(jié)果顯示，只有4個(gè)配方有較多的芽形成，其余配方或愈傷組織褐化或發(fā)芽數(shù)極少而不具有統(tǒng)計(jì)意義。4個(gè)配方的分化結(jié)果列于表4。

由表4可知，6-BA為1 mg/L時(shí)繁殖系數(shù)較高，但在6-BA定量的情況下，1/2 MS繁殖系數(shù)顯著高于1/3 MS。說明在4個(gè)配方中，以1/2 MS＋6-BA 1 mg/L誘導(dǎo)不定芽分化培養(yǎng)基效果最好，其次為1/3 MS＋6-BA 1 mg/L。

各品種雖然在不同的調(diào)查天數(shù)發(fā)芽率不同，但是對(duì)培養(yǎng)基的反應(yīng)基本一致，均以1/2 MS＋6-BA 1 mg/L＋瓊脂6 g/L＋蔗糖30 g/L最好。在對(duì)4個(gè)品種的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，各個(gè)品種芽分化的能力不一，以阿里桑娜最容易進(jìn)行芽的分化。

表4 不同培養(yǎng)基配方對(duì)不定芽分化的影響

2.5 生根培養(yǎng)基篩選

試驗(yàn)結(jié)果（表5）表明，在生根培養(yǎng)基中附加IBA的生根率極顯著高于附加NAA的培養(yǎng)基，其中，在附加IBA的各質(zhì)量濃度中，以IBA 0.05 mg/L生根率最高，顯著高于附加IBA 1 mg/L的培養(yǎng)基，而與附加IBA 0.1，0.2，0.5 mg/L的生根率間沒有顯著差異。安祖花試管苗生根培養(yǎng)基以1/2 MS＋I(xiàn)BA 0.05 mg/L＋瓊脂6 g/L＋蔗糖30 g/L最佳。

表5 不同培養(yǎng)基配方對(duì)阿里桑娜生根的影響

3 討論

外植體進(jìn)行徹底的消毒滅菌是組培快繁的前提和保證，目前關(guān)于安祖花外植體消毒的研究并不多。凌雷[17]研究認(rèn)為，最佳消毒方法是流水沖洗30 min后，用70%酒精浸泡60 s。陳華等[18]研究認(rèn)為，莖、葉、葉柄的最佳消毒條件分別為0.1%氯化汞消毒15～20，5～7，10～12 min。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，氯化汞對(duì)不同外植體的消毒能力不同，一般外植體以氯化汞消毒10～15 min為宜，但是花序組織在試驗(yàn)的氯化汞濃度范圍內(nèi)，接種后或污染或褐化死亡，最后的成活率為0，這可能是由于花序組織細(xì)胞或細(xì)胞間隙比葉片等其他部位更適合內(nèi)生菌生存所導(dǎo)致的。

基本培養(yǎng)基保證了培養(yǎng)物的生存與最低的生理活動(dòng)，但只有配以合適濃度的植物激素才能誘導(dǎo)細(xì)胞的分裂、愈傷組織的形成和增殖、芽的分化等生理過程[16]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在葉片愈傷組織的誘導(dǎo)過程中，細(xì)胞分裂素的作用非常明顯，當(dāng)附加6-BA為0.5 mg/L時(shí)愈傷組織形成最多，而2，4-D的作用不太明顯，與前人的研究結(jié)果存在一定的差異[10-12，18]，可能是由于供試的外植體葉片的年齡、部位、取材時(shí)間不同或培養(yǎng)條件的不同所造成的[19]。本試驗(yàn)的結(jié)果還表明，無機(jī)鹽的濃度對(duì)愈傷組織的形成至關(guān)重要，在某種程度上起著決定作用，當(dāng)基本培養(yǎng)基為1/3 MS，硝酸銨質(zhì)量濃度降到200 mg/L時(shí)，愈傷組織形成數(shù)量最多，而且可以縮短愈傷組織形成的時(shí)間，這與劉炤[20-22]等報(bào)道的結(jié)果基本一致，但是硝酸銨的最佳濃度略有不同，這可能是由于供試材料選取的品種不同所造成的。

外植體經(jīng)過40～50 d誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)后，可將愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上增殖。本試驗(yàn)結(jié)果表明，以1/2 MS＋6-BA 1 mg/L＋瓊脂6 g/L＋蔗糖30 g/L為最佳培養(yǎng)基，這與前人的研究結(jié)果不完全相同[15-19]。

安祖花試管苗生根比較容易，在小苗的分化過程中常伴有根的生成。本試驗(yàn)結(jié)果表明，生根培養(yǎng)基以1/2 MS＋I(xiàn)BA 0.05 mg/L＋瓊脂5 g/L＋蔗糖30 g/L最佳，而且在生根培養(yǎng)基中附加IBA的生根率極顯著高于附加NAA的培養(yǎng)基，與已有的報(bào)道略有差異[9，13]，可能是由于所使用的外植體材料及培養(yǎng)條件不同所引起的。

［1］汪國(guó)鮮，楊春梅，阮繼偉，等.滿天星不同品種組培苗增殖研究[J].北方園藝，2013（1）：124-126.

［2］趙瀅，楊樹華，李秋香，等.熱激處理對(duì)蝴蝶蘭組培褐變的抑制及其生理機(jī)制[J].北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，35（1）：103-108.

［3］李娜.蝴蝶蘭組培快繁技術(shù)的研究進(jìn)展[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007（11）：44-46.

［4］龔明霞，何鐵光，黃如葵，等.觀賞鳳梨組培快繁技術(shù)研究進(jìn)展[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（5）：412-415.

［5］關(guān)麗霞，修紅旭，楊倩，等.3種觀賞鳳梨花蕾的離體培養(yǎng)和快速繁殖[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（5）：1999-2000.

［6］張春麗，丁義，何松林，等.不同培養(yǎng)基支持體對(duì)大花蕙蘭試管苗生長(zhǎng)的影響[J].河南科學(xué)，2010，28（6）：677-680.

［7］楊懋勛，單振菊，陳志云，等.4種觀賞百合的組培快繁技術(shù)研究[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012（2）：37-39.

［8］袁雪，鐘雄輝，李曉昕，等.鐵炮百合的胚性愈傷組織誘導(dǎo)和植株再生[J].核農(nóng)學(xué)報(bào)，2012（3）：454-460，477.

［9］汪希強(qiáng)，陶佩琳，張旭東，等.紅掌組培快繁技術(shù)優(yōu)化研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（33）：16052-16053，16080.

［10］蘭芹英，李啟任，何慧英，等.紅掌愈傷組織誘導(dǎo)和芽的分化[J].園藝學(xué)報(bào)，2003，30（1）：107-109.

［11］蘭芹英，仇玉萍，張遠(yuǎn)輝，等.不同紅掌品種的葉片、葉柄和莖段愈傷組織的誘導(dǎo)及植株再生[J].西北植物學(xué)報(bào)，2003，23（6）：1006-1009.

［12］夏時(shí)云，麥瑜玲，許繼勇，等.提高紅掌葉片愈傷組織誘導(dǎo)和植株分化及壯苗率的技術(shù)研究[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2005，21（2）：45-48.

［13］王勇，楊元，吳國(guó)智，等.紅掌組培苗兩種生根培養(yǎng)方法的比較研究[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，15（4）：27-29.

［14］潘學(xué)峰，潘海，洪世軍，等.紅掌葉片愈傷組織的誘導(dǎo)與植株再生[J].海南大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，18（2）：144-149.

［15］肖三元，梁國(guó)平.紅掌組織培養(yǎng)及快速繁殖[J].云南熱作科技，2000，23（2）：12-13.

［16］呂復(fù)兵，王碧青，廖飛雄，等.紅掌葉片離體培養(yǎng)與植株再生研究[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2002（6）：25-26.

［17］凌雷.紅掌快速繁育最適培養(yǎng)條件的篩選研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2011（11）：212-213.

［18］陳華，吳子平.粉女郎紅掌組培快繁技術(shù)研究[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2010，16（21）：55-57.

［19］關(guān)麗霞，謝永剛，彭世勇，等.紅掌葉不同部位愈傷組織的誘導(dǎo)及植株再生[J].遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，9（1）：25-27.

［20］劉炤，劉國(guó)鋒，張翼.NH4NO3及碳源對(duì)紅掌愈傷組織誘導(dǎo)影響的研究[J].北方園藝，2011（24）：152-154.

［21］郭維明，趙云鵬，文方德.花燭愈傷組織不同繼代培養(yǎng)的再分化差異[J].園藝學(xué)報(bào)，2004，31（1）：69-72.