梁結玲 袁耀欽 陳健發(fā) 徐艷紅 陳運嬌 李志威

廣東省東莞市茶山醫(yī)院檢驗科，廣東東莞 523382

質量管理是實驗室的主要任務，檢驗結果的準確性、可靠性會直接影響到疾病的診斷、治療方案的確定以及療效的觀察[1-3]。因此，中國合格評定委員會（CNAS）頒布的《醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則》（CNAS-CL02：2008）5.6.2指出“適用且可能時，實驗室應確定檢驗結果的不確定度”。測量不確定度（uncertainty of measurement）是表征合理地賦予被測量之值的分散性、與測量結果相聯(lián)系的參數(shù)。CNAS認可指南《測量不確定度要求的實施指南》（CNAS-GL05：2011）給出了測量不確定度評估的一般原則和方法，不確定度評估一般包括識別不確定度來源、量化不確度分量、合并標準不確定度、計算擴展不確定度等步驟。本文基于對測量不確定度相關知識的理解和認識，評價國內外學者在臨床檢驗應用中的測量不確定度評定方法，探索一種適合本實驗室不確定度評定方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Roche Modular PI檢測系統(tǒng)，由Roche Modular PI全自動生化分析儀（包括P和ISE模塊）、Roche原裝試劑與檢測程序、c.f.a.s校準品，該檢測系統(tǒng)配套具有溯源性[2]。本次評價包括常規(guī)開展的14個生化檢測項目：鈣（Ca）、磷（P）、鎂（Mg）、總膽紅素（T-Bil）、直接膽紅素（D-Bil）、堿性磷酸酶（ALP）、總 蛋 白（TP）、白 蛋 白（Alb）、血 糖（Glu）、尿 素（Ure）、肌酐（Crea）、尿酸（Ua）、三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC），所有項目都使用Roche原裝配套試劑，按Roche SOP文件進行操作。評定過程中的質控品由Bio-Rad公司提供，室間質評質控品由衛(wèi)生部臨床檢驗中心提供。

1.2 評定方法

嚴格分別參照文獻方法[4-8]進行（分別標示為A、B、C、D），設備操作與保養(yǎng)嚴格按照本室SOP文件執(zhí)行。校準、室內和室間質控品的測量過程嚴格按照項目SOP文件執(zhí)行。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0軟件處理，測量不確定度均數(shù)間差異性比較采用配對t檢驗，以檢驗不同評定方法之間差異性。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 批內重復性（CVw）

將患者血清樣本均勻分為20份，對選擇的14個項目在一個分析批內進行重復測定，并計算其均值、變異系數(shù)（CV%）。見表1。

表1 不同方法各個不同不確定度分量及相對擴展不確定度

2.2 批間重復性（CVb）

①1個月期批間重復性：兩個水平Bio-Rad質控品，每天測定選定項目，1個月后收集數(shù)據(jù)并計算其變異系數(shù)（CVb1%）。②半年批間重復性：兩個水平Bio-Rad質控品，每天測定選定項目，6個月后收集數(shù)據(jù)并計算其變異系數(shù)（CVb2%）。見表1。

2.3 項目測定偏倚（CVbias）

采集2010～2012年衛(wèi)生部臨檢中心室間質量評價的回報結果，按文獻[3]所介紹的方法計算方法偏倚的。見表1。

2.4 校準品賦值的不確定度（CVref）

校準品賦值不確定度由Roche提供。見表1。

2.5 校準驗證與其相應參考值的偏差（CVother）

儀器校準后，通過對校準驗證材料或其他不同批號間多個濃度校準品重復測試（n=5），驗證通過后，計算其偏差。見表1。

2.6 相對擴展不確定度計算（U%，k=2）

①A方法：按公式U2=CVw2＋CVb12＋CVbias2×2計算；②B方法：按公式U2=CVb22＋CVref2計算；③C方法：按公式U2=CVb22＋CVbias2計 算；④D方 法：按 公 式U2=CVb22＋CVref2＋CVother2計算。

2.7 相對擴展不確定度與其各分量之間的相關性

利用SPSS 19.0軟件分析不同方法內各分量與不確定度之間的相關性，計算其r值和P值。從表2中可以看出，對于A方法來說CVbias是其擴展不確定度的主要分量；對于B方法來說不確定度的大小主要取決于長期重復性和校準品不確定度；對于C方法來說不確定度的大小主要取決于長期重復性和長期（3年）平均偏倚；對于D方法來說不確定度的大小主要取決于長期重復性和校準驗證與其相應參考值的偏差，而與校準品賦值的不確定度無明顯相關性。

表2 各個不確定度分量與擴展不確定度之間的相關性

2.8 不同評定方法的不確定度之間配對分析結果

從表中除方法A和C對同一項目不確定度評定結果差異有統(tǒng)計學意義外（P＜0.05），其余方法間不確定度評定結果差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表3。

表3 不同評定方法的不確定度之間統(tǒng)計學分析

3 討論

隨著我國對國外實驗室管理規(guī)范的不斷認識及實驗室認可不斷開展，量值溯源、測量不確定度等概念受到了越來越多專家學者的關注。我國政府在1999年根據(jù)GUM公布了中華人民共和國計量技術規(guī)范《JJF1059-1999測量不確定度評定與表示》。然而，國內外關于醫(yī)學實驗室是否有必要引入測量不確定度的爭論仍較多，無論是評定測量前過程的不確定度或誤差都很復雜。Westgard計算總允許誤差時，也只是包括測量過程的偏移和不精密度。2002年澳大利亞生化學家協(xié)會（AACB）的測量不確定度工作組在公布的標準中提出認為醫(yī)學實驗室在評定“測量不確定度”時只需考慮測量過程，國內有許多學者也認為臨實驗室宜先只評定測量過程的不確定度[9-12]。

目前，國內外評定常規(guī)項目不確定方法基本上都是將偏移的不確定度和從不精密度導出的不確定度作為合成不確定度的主要來源。本文是選擇評價的四種方法也主要是從不精密度（批內重復性、批間重復性）、偏移（室間質量評價偏移、校準品賦值不確定度、校準驗證偏移）作為合成不確定度的主要來源。從本文評價結果來看，方法A和C的評定結果差異有統(tǒng)計學意義，在方法上兩種方法都采用室間質量評價回報結果計算出的CVbias作為偏移的不確定度主要分量，方法A不精密度采用了批內重復性和短期（n=30 d）批間重復性作為不確定度分量，而方法C采用長期（n=180 d）批間重復性作為不確定度分量。有學者認為用實驗室長期復現(xiàn)性（中間精密度）來評定測量不確定度，批內重復性不適用于評定測量不確定度，因為“它排除了對不確定度的很多貢獻”。在不確定度分量相關分析中可看出，不管是何種方法長期批間重復性都是不確定度的主要分量。而偏移分量主室間質量評價回報結果計算出的CVbias、校準品賦值及與驗證材料（或參考物質）偏差，有學者認為室間質評結果不能用作不確定度的分量來評估，因為室間質評的“靶值”也是均值，并非真值[8]。在方法D中校準品不確定度與擴展不確定度較差，并非不確定度的主要分量，可能的原因是Roche校準品不確定度較小（大多在1%以下）或是校準驗證時的偏差包含了校準品不確定度分量。因此，以長期重復性、校準驗證時的偏差或校準品不確定度為分量計算實驗室的檢驗項目的測量不確定度的方法可能是現(xiàn)階段一種實用的評定測量不確定度簡便方法。

本文在評價方法的實踐過程中發(fā)現(xiàn)，不同的評定方法在不同的檢測系統(tǒng)評價的結果不一致（有的系統(tǒng)不確定度太大，本文未列出），這涉及到溯源性的問題。同時，許多檢測項目尚無可溯源的標準品，這給與溯源性聯(lián)系起來的不確定度評定帶來了很大的困難。盡管如此，需要臨床實驗室對包括不確定度評估在內的標準化工作做進一步探索，重視臨床檢驗的標準化工作，建立完善的質量體系，最終實現(xiàn)實驗室的檢測結果具有溯源性和可比性。

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