周 明 劉 波 戈賢平* 謝 駿 萬金娟 崔素麗

(1.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306;2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心，無錫 214081;3.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)無錫漁業(yè)學(xué)院，無錫 214081)

維生素E又名生育酚，為一類化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的酚類化合物，在飼料中主要以DL－α－維生素E醋酸鹽形式添加［1］。研究表明，水生動物不能自身合成維生素E，必須由外界供給，所以飼料中維生素E的缺乏或不足，就會導(dǎo)致水生動物機(jī)體出現(xiàn)缺乏癥［2－3］。維生素E作為一種重要的營養(yǎng)成分，對維持動物機(jī)體正常代謝過程和生理功能具有重要的作用，可提高皺紋盤鮑(Paralichthys olivaceus)的 抗 氧 化 能 力［4］、蝦 類 動 物 的 繁 殖力［5－6］等、中華鱉(Pelodiscus sinensis)幼鱉［7］和黃顙魚(Pelteobagrus fulvidraco)的免疫力［8］以及尼羅羅非魚(Nile tilapia)抗應(yīng)激能力［9］等。

團(tuán)頭魴(Megalobrama amblycephala)，隸屬于硬骨魚綱，鯉形目，鯉科，鳊亞科，其肉質(zhì)鮮美、生長快、經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，為我國目前主要養(yǎng)殖魚類之一。團(tuán)頭魴和其他動物一樣，對維生素需求量受發(fā)育階段、飼料組成和品質(zhì)、環(huán)境因素以及營養(yǎng)素間的相互關(guān)系等影響［10］，迄今關(guān)于團(tuán)頭魴對維生素E需求量的研究還鮮見報(bào)道，僅有2005年中華人民共和國水產(chǎn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)列出了團(tuán)頭魴對維生素E需求量的推薦值為50 mg/kg，同時(shí)關(guān)于維生素E對團(tuán)頭魴血液和肌肉理化指標(biāo)方面影響的研究也未見報(bào)道。鑒于此，本試驗(yàn)采用單因子梯度飼養(yǎng)試驗(yàn)法對團(tuán)頭魴維生素E需求量進(jìn)行研究，探討其對團(tuán)頭魴生長性能及血液和肌肉理化指標(biāo)的影響，以期為研制適合團(tuán)頭魴生長需求的安全環(huán)保的飼料添加劑提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)魚

試驗(yàn)用團(tuán)頭魴選自中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心苗種基地。試驗(yàn)選擇健康、規(guī)格、體重［個(gè)體初均重(45.00±1.50)g］基本一致的團(tuán)頭魴360尾，隨機(jī)分成6組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15尾魚。試驗(yàn)魚以重復(fù)為單位放養(yǎng)于可控溫循環(huán)流水圓形養(yǎng)殖桶［規(guī)格為820 mm(直徑)×700 mm(高)］內(nèi)，采用循環(huán)流水控溫系統(tǒng)進(jìn)行養(yǎng)殖。

1.2 試驗(yàn)飼料

以酪蛋白和明膠為蛋白質(zhì)源，糊精和淀粉為糖源，豆油為脂肪源配制基礎(chǔ)飼料。在基礎(chǔ)飼料中分別添加 0(對照組)、12.5、25.0、50.0、100.0和200.0 mg/kg維生素E，配制成等氮等能的6種試驗(yàn)飼料，采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測定上述6種試驗(yàn)飼料中維生素E實(shí)際水平分 別 為 0.5、13.4、27.8、54.7、107.5 和197.5 mg/kg。維生素E購自國藥集團(tuán)化學(xué)有限公司，有效含量為50%?；A(chǔ)飼料組成及營養(yǎng)水平見表1。飼料原料經(jīng)粉碎、0.3 mm孔徑分篩，按表1配比混合均勻，少量的組分采用逐級擴(kuò)大法混合。加20%的水揉勻，用SLP－45型制粒機(jī)(中國水產(chǎn)科學(xué)研究院漁業(yè)機(jī)械儀器研究所生產(chǎn))制成粒徑2.0 mm的沉性顆粒飼料，50℃烘干后于4℃冰柜中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 飼養(yǎng)管理

團(tuán)頭魴在養(yǎng)殖桶馴化15 d后正式開始投喂試驗(yàn)飼料。每天投喂3次，分別在08:00—09:00、11:00—12:00、15:00—16:00各投喂1次。日投餌量為魚體重的2% ～4%，并根據(jù)攝食和生長情況作適當(dāng)調(diào)整，每天收集殘餌并烘干稱重。飼養(yǎng)期間水溫 26～28 ℃，pH 7.2～7.8，溶解氧 ＞5 mg/L，氨氮 ＜0.01 mg/L。試驗(yàn)期間養(yǎng)殖場減少人為干擾，保持安靜，以防止額外應(yīng)激，每日觀察魚攝食及死亡情況，發(fā)現(xiàn)死魚及時(shí)撈出稱重、記數(shù)，并檢查死亡原因。正式養(yǎng)殖90 d后結(jié)束試驗(yàn)，計(jì)數(shù)魚尾數(shù)，計(jì)算成活率。

表1 基礎(chǔ)飼料組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet(DM basis) %

1.4 指標(biāo)測定

1.4.1 生長性能指標(biāo)的測定

飼養(yǎng)試驗(yàn)第90天每桶隨機(jī)抽取2尾魚，每組取8尾魚，采血后測定每條魚的體重、體長、內(nèi)臟重、肝臟重，以計(jì)算內(nèi)臟比(VSI)、肝體比(HSI)及肥滿度(CF);隨后對每桶余下的魚體稱重后計(jì)算攝食率(FR)、增重率(WGR)、特定生長率(SGR)和飼料系數(shù)(FCR)。具體計(jì)算公式如下:

增重率(%)=100×(Wt－W0)/W0;

攝食率(%)=100×F/(Wt+W0)/2t;

特定生長率(%/d)=100×(ln Wt－ln W0)/t;

飼料系數(shù)=F/(Wt－W0);

成活率(%)=100×Nt/N0;

肝體比(%)=100×Wh/Wb;

臟體比(%)=100×Wv/Wb;

肥滿度(%)=100×Wb/L3。

式中:W0為初體均重(g);Wt為末體均重(g);t為試驗(yàn)天數(shù)(d);F每尾魚平均攝食飼料總量(風(fēng)干基礎(chǔ))(g);Wh為每尾魚末肝臟重(g);Wv為每尾魚末內(nèi)臟重(g);Wb為每尾魚末體重(g);L為每尾魚末體長(cm);Nt為收獲尾數(shù)(尾);N0為放養(yǎng)尾數(shù)(尾)。

1.4.2 血液理化指標(biāo)的測定

試驗(yàn)結(jié)束后每桶隨機(jī)取2尾魚，每組取8尾魚，150 mg/L MS－222(化學(xué)名為間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽)麻醉，紗布擦干尾部，一次性注射器(用肝素鈉潤濕)尾靜脈采血，每桶取20μL全血用于測定白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)數(shù)量及血紅蛋白(HGB)含量。上述指標(biāo)在邁瑞B(yǎng)C－5300VEt全自動五分類動物血液細(xì)胞分析儀上測定，試劑購自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。

剩余血液在1 000 r/min、4℃下離心5 min取血漿，標(biāo)號分裝，于－70℃冰箱中保存?zhèn)錅y。血漿谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性采用國際臨床化學(xué)聯(lián)合會(IFCC)法測定，堿性磷酸酶(ALP)活性采用2－氨基 －2－甲基 －1－丙醇(AMP)緩沖液法測定，甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)含量采用氧化酶法測定，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量采用直接法測定。上述指標(biāo)均在邁瑞B(yǎng)S－400全自動生化分析儀上測定，試劑盒均購自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。

1.4.3 肌肉理化指標(biāo)的測定

飼養(yǎng)結(jié)束后每桶隨機(jī)抽取2尾魚，每組取8尾魚，取背部白肌，剪碎，混勻后用于測定魚體肌肉的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分含量等常規(guī)營養(yǎng)成分。水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分含量分別采用常壓干燥法(GB/T 6435—2006)、凱氏定氮法(GB/T 6432—1994)、乙醚抽提法(GB/T 6432—1994)、550 ℃灼燒法(GB/T 6438—1992)測定。飼料中常規(guī)營養(yǎng)成分測定同肌肉中測定方法。

肌肉滴水損失率測定方法如下:取同側(cè)新鮮背肌，用吸水紙吸干背肌上的水分和血漬，稱重，記為W1;放于離心管中(離心管底部墊有適量吸水紙)，于4℃、4 000 r/min離心 20 min，取出肉樣，用吸水紙吸干肌肉表面的水分，稱重，記為W2。

滴水損失率(%)=100×(W1－W2)/W1。

肌肉熟肉率測定方法如下:切取試驗(yàn)魚背部肌肉鮮樣5 g左右，記為W3;然后放置于盛有沸水的鋁鍋籠屜上加蓋蒸60 min，取出熟肉樣，用鐵絲鉤掛于室內(nèi)無風(fēng)陰涼處靜置(冷卻)30 min，再準(zhǔn)確稱蒸熟肉重，記為W4。

熟肉率(%)=100×W4/W3。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，并進(jìn)行LSD多重比較，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料維生素E添加水平對團(tuán)頭魴生長性能的影響

由表2可知，隨著維生素E添加水平的增加，增重率、特定生長率均呈先升高后降低的趨勢，且均在維生素添加水平為100.0 mg/kg時(shí)達(dá)到最大值。與對照組相比，12.5、25.0、50.0、100.0 和200.0 mg/kg添加組團(tuán)頭魴的增重率和特定生長率顯著提高(P ＜ 0.05);25.0、50.0、100.0 和200.0 mg/kg添加組團(tuán)頭魴的攝食率顯著提高(P＜0.05);12.5 mg/kg添加組團(tuán)頭魴的肥滿度顯著降低(P＜0.05)。各維生素E添加組的成活率、飼料系數(shù)、臟體比、肝體比與對照組相比沒有差異顯著(P ＞0.05)。

表2 飼料維生素E添加水平對團(tuán)頭魴生長性能的影響Table 2 Effects of dietary vitamin E supplemental level on growth performance of Megalobrama amblycephala

由圖1可知，通過曲線擬合分析發(fā)現(xiàn)團(tuán)頭魴的增重率與飼料維生素E添加水平呈二次曲線關(guān)系，建立的回歸方程如下:Y=－0.001 2X2+0.277 8X+96.316(R2=0.858 1)。由上述方程得出，當(dāng)飼料中維生素E添加水平為138.5 mg/kg時(shí)，團(tuán)頭魴的增重率最大。

圖1 飼料維生素E添加水平對團(tuán)頭魴增重率的影響Fig.1 Effects of dietary vitamin E supplemental level on WGR of Megalobrama amblycephala

2.2 飼料維生素E添加水平對團(tuán)頭魴血液生理指標(biāo)的影響

由表3可知，血液中白細(xì)胞、紅細(xì)胞數(shù)量以及血紅蛋白含量各組之間均無顯著差異(P＞0.05)，但對照組的白細(xì)胞數(shù)量最高，血紅蛋白含量最低。

2.3 飼料維生素E添加水平對團(tuán)頭魴血液生化指標(biāo)的影響

由表 4 可知，與對照組相比，12.5、25.0、50.0、100.0 和 200.0 mg/kg 添加組團(tuán)頭魴血漿中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性以及甘油三酯含量均顯 著 降 低 (P ＜ 0.05);12.5、25.0、50.0、100.0 mg/kg添加組團(tuán)頭魴血漿中總膽固醇含量顯著降低(P ＜ 0.05);12.5、25.0、50.0 mg/kg 添加組團(tuán)頭魴血漿中高密度脂蛋白膽固醇含量顯著降低(P＜0.05);100.0 mg/kg添加組團(tuán)頭魴血漿中堿性磷酸酶活性顯著增加(P＜0.05)。團(tuán)頭魴血漿中低密度脂蛋白膽固醇含量各組之間差異不顯著(P ＞0.05)。

2.4 飼料維生素E添加水平對團(tuán)頭魴肌肉理化指標(biāo)的影響

由表 5 可知，飼料添加 12.5、25.0、50.0、100.0和200.0 mg/kg維生素E顯著提高了團(tuán)頭魴的肌肉熟肉率(P ＜0.05);同時(shí)，飼料添加25.0、50.0和100.0 mg/kg維生素E還顯著降低了團(tuán)頭魴的肌肉滴水損失率(P＜0.05)。與對照組相比，25.0、50.0、100.0 和 200.0 mg/kg 添加組團(tuán)頭魴肌肉中粗蛋白質(zhì)含量顯著增加(P＜0.05)，其中以100.0 mg/kg添加組的含量最高，為22.60%。飼料添加維生素E對團(tuán)頭魴肌肉中水分、粗灰分和粗脂肪含量沒有顯著影響(P＞0.05)。

表3 飼料維生素E添加水平對團(tuán)頭魴血液生理指標(biāo)的影響Table 3 Effects of dietary vitamin E supplemental level on blood physiological indexes of Megalobrama amblycephala

表4 飼料維生素E添加水平對團(tuán)頭魴血液生化指標(biāo)的影響Table 4 Effects of dietary vitamin E supplemental level on blood biochemical indexes of Megalobrama amblycephala

表5 飼料維生素E添加水平對團(tuán)頭魴肌肉理化指標(biāo)的影響(濕重基礎(chǔ))Table 5 Effects of dietary vitamin E supplemental level on muscle physiochemical indexes of Megalobrama amblycephala(wet weight basis) %

3 討論

3.1 飼料維生素E添加水平對團(tuán)頭魴生長性能的影響

研究表明，維生素E的缺乏會降低水產(chǎn)動物的生長性能，而適量的維生素E可有效降低水產(chǎn)動物體內(nèi)過多的高不飽和脂肪酸，保持水產(chǎn)動物的正常代謝，提高水產(chǎn)動物機(jī)體的生長性能［11］。Shiau等［12］報(bào)道，飼料添加75 mg/kg維生素 E可顯著提高羅非魚的生長。周岐存等［13］研究表明，飼料中添加50～100 mg/kg維生素E可提高皺紋盤鮑幼鮑的增重率、特定生長率。何敏等［14］在斑點(diǎn)叉尾飼料中添加0、50、100 和 1 000 mg/kg維生素E，結(jié)果顯示飼料中添加50～100 mg/kg維生素E能顯著提高斑點(diǎn)叉尾的特定生長率、攝食率。本試驗(yàn)也表明，隨著維生素E添加水平的增加，團(tuán)頭魴的增重率、特定生長率呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢，當(dāng)添加水平達(dá)到100.0 mg/kg時(shí)增重率和特定生長率最高;以魚體增重率為評價(jià)指標(biāo)，通過曲線擬合和回歸方程分析，團(tuán)頭魴飼料維生素E最適添加水平為138.5 mg/kg;而添加水平達(dá)到200.0 mg/kg時(shí)團(tuán)頭魴的增重率反而有下降的趨勢。相關(guān)報(bào)道也顯示，添加高水平維生素E對黃顙魚［8］和斑點(diǎn)叉尾［14］的生長無明顯促進(jìn)作用，這與本研究結(jié)果基本一致，而維生素E在體內(nèi)的具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

不同魚類的維生素E需求量存在差異，而同一種魚在不同生理階段對維生素E的需求量也不同，一般魚苗對維生素E的需求量要高于成魚。中華人民共和國水產(chǎn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中對團(tuán)頭魴維生素E需求量的推薦值是50 mg/kg，而本試驗(yàn)得出團(tuán)頭魴最佳生長狀態(tài)時(shí)飼料中維生素E添加水平為138.5 mg/kg，這與中華人民共和國水產(chǎn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)推薦值有較大差異，原因可能是團(tuán)頭魴對維生素E的需求量與魚體本身情況、其生長環(huán)境等都有關(guān)［15］。

3.2 飼料維生素E添加水平對團(tuán)頭魴血液理化指標(biāo)的影響

紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白含量與魚體的生理特征有密切的聯(lián)系，可作為對魚體健康及環(huán)境適應(yīng)能力評價(jià)的指標(biāo)［16］。Sealey 等［17］研究發(fā)現(xiàn)，攝食缺乏維生素E飼料的斑紋鱸其血液中紅細(xì)胞數(shù)量會降低。何敏［15］研究表明，飼料中缺乏維生素E降低了斑點(diǎn)叉尾血液中紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白含量。本試驗(yàn)中，未添加維生素E的對照組血液中紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白含量較50.0、100.0和200.0 mg/kg添加組有降低趨勢，這與上述研究結(jié)果基本一致，說明維生素E缺乏可使魚體血液中紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白含量降低，導(dǎo)致魚體攜氧能力降低，影響魚體代謝能力。

當(dāng)肝臟和心肌細(xì)胞受損或通透性增高時(shí)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶會釋放到血液中，導(dǎo)致血液轉(zhuǎn)氨酶活性升高［18］，因此血漿谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性可以用來監(jiān)測魚體的健康狀況［19－20］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加 12.5、25.0、50.0、100.0 和 200.0 mg/kg 維生素 E 顯著降低了團(tuán)頭魴血漿中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性，說明飼料中添加適量維生素E對肝臟組織有一定的保護(hù)作用［17］。

堿性磷酸酶是動物代謝過程中的重要調(diào)控酶，在魚體對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用過程中發(fā)揮著重要的作用［21］。堿性磷酸酶可通過水解作用將表面帶有磷酸酯的異物破壞掉，并可修飾或改變外來異物的表面分子組成，加快吞噬細(xì)胞的吞噬作用和對異物的降解速度，從而阻止病菌在機(jī)體的生長和繁殖，是機(jī)體解毒體系中的重要成員［22］。相關(guān)研究認(rèn)為堿性磷酸酶在機(jī)體的非特異性免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，其活性的高低可反映動物的生長速度和生產(chǎn)性能［23－24］。艾春香等［25］試驗(yàn)表明飼料中添加100、200、400和600 mg/kg的維生素E均能增強(qiáng)河蟹體組織中堿性磷酸酶活性，且隨維生素E添加水平的增加，堿性磷酸酶活性增強(qiáng)。何敏［15］研究表明，飼料中添加 50～100 mg/kg維生素E可顯著提高斑點(diǎn)叉尾血液中堿性磷酸酶活性。本試驗(yàn)也表明，飼料中添加100.0 mg/kg維生素E 顯著增加了團(tuán)頭魴血漿中堿性磷酸酶活性，有助于提高團(tuán)頭魴的非特異性免疫能力，間接的促進(jìn)生長。

水產(chǎn)動物脂類的轉(zhuǎn)運(yùn)需要經(jīng)過血液運(yùn)輸?shù)狡渌M織，血液中膽固醇等脂類物質(zhì)的水平能夠反映水產(chǎn)動物脂類的代謝狀態(tài)［26］。本試驗(yàn)中，飼料中添加 12.5、25.0、50.0、100.0 mg/kg 維生素 E顯著降低了團(tuán)頭魴血漿中總膽固醇、甘油三酯的含量，推測原因可能是維生素E促進(jìn)了團(tuán)頭魴血漿中膽固醇和甘油三酯的分解，降低了血漿膽固醇和甘油三酯的含量，調(diào)節(jié)血液脂類水平，這與何敏［15］的研究結(jié)果相一致，具體原因還待進(jìn)一步研究。

3.3 飼料維生素E添加水平對團(tuán)頭魴肌肉理化指標(biāo)的影響

肌肉的滴水損失率可用來表示肌肉的系水力，即肌肉中水分的保持程度。高系水力可防止肌肉中水分的過多流失，防止肉變質(zhì)［27］。熟肉率是肌肉烹調(diào)損失程度的標(biāo)志，也是評價(jià)魚體肌肉蛋白質(zhì)持水性的指標(biāo)。上述二者均是衡量肌肉蛋白質(zhì)保持水分能力的重要指標(biāo)［28－30］。研究表明，動物肌肉中脂肪易被氧化，可造成肉品質(zhì)下降［31］。在畜禽動物方面，Guo等［32］研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加40、200和400 mg/kg維生素E可提高豬肉中脂肪的穩(wěn)定性，減少滴水損失;高秦燕等［33］在豬飼料中添加30、60和90 mg/kg維生素E降低了豬肉的滴水損失率，提高了保水力。楊丹［34］在鯉魚飼料中添加不同水平(0、100、300和500 mg/kg)的維生素E，結(jié)果表明熟肉率隨著維生素E添加水平的增加而升高。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加25.0、50.0、100.0 mg/kg 維生素 E 可降低團(tuán)頭魴肌肉的滴水損失率，提高熟肉率。

魚體的肌肉常規(guī)成分與其生理機(jī)能關(guān)系密切，其中蛋白質(zhì)供魚體生長和發(fā)育，其含量反映了魚體的生長狀況和肉品質(zhì)量。任澤林等［35］指出，維生素E缺乏時(shí)，鯉魚肌肉粗蛋白質(zhì)含量降低，水分含量增加。文華等［36］研究指出，當(dāng)飼料中維生素E不足(添加水平為0和20 mg/kg)時(shí)，會降低鱘魚肌肉粗蛋白質(zhì)含量。本試驗(yàn)結(jié)果表明，對照組和12.5 mg/kg添加組團(tuán)頭魴肌肉中粗蛋白質(zhì)含量顯著低于 25.0、50.0、100.0 和200.0 mg/kg添加組。結(jié)合肌肉滴水損失率、熟肉率及粗蛋白質(zhì)含量來看，飼料中添加25.0～200.0 mg/kg維生素E可能對團(tuán)頭魴的肉質(zhì)有一定的改善作用，具體作用機(jī)理還待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

① 在本試驗(yàn)條件下，飼料中添加25.0～200.0 mg/kg維生素E在一定程度上促進(jìn)了團(tuán)頭魴幼魚的生長，并在維持機(jī)體正常新陳代謝和改善肉質(zhì)上發(fā)揮了一定的作用。

②以增重率為評價(jià)指標(biāo)，經(jīng)回歸方程預(yù)測團(tuán)頭魴飼料中維生素E的最適添加水平為138.5 mg/kg。

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