黃劍鋒 福建省南平市延平區(qū)畜牧水產(chǎn)局動(dòng)物疫控中心 353000

豬瘟是威脅我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的頭號(hào)疾病，目前，我國(guó)對(duì)于豬瘟的控制主要依靠豬瘟疫苗的免疫預(yù)防，豬場(chǎng)豬瘟疫苗免疫效果的好壞直接關(guān)系到本場(chǎng)豬瘟感染壓力的大小，也關(guān)系到豬場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益，豬場(chǎng)定期對(duì)豬瘟疫苗效果檢測(cè)評(píng)估是十分重要的。目前，用于豬瘟疫苗免疫效果評(píng)估的方法很多，選擇科學(xué)合理的檢測(cè)方法是科學(xué)評(píng)估的首要問(wèn)題。作者采用生產(chǎn)實(shí)際中2種常用的評(píng)估方法（正向間接血凝試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）對(duì)3個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)66份血清樣品進(jìn)行了豬瘟免疫效果平行對(duì)比檢測(cè)試驗(yàn)。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試劑 豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒（阻斷ELISA）購(gòu)自北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司，法國(guó)LSI豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒，試劑盒批號(hào)：2-VETPRA-017。豬瘟正向間接血凝試驗(yàn)器材包括豬瘟正向間接血凝抗原、豬瘟陰（陽(yáng)）性血清、正向稀釋液，購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，試劑盒批號(hào)：20120406。

1.2 儀器 3 000×g（g為相對(duì)離心力）臺(tái)式離心機(jī)、精密移液器（50～1 000 μL）、單道微量移液器（0.5～10 μL）、多道微量移液器（25～50 μL）、酶標(biāo)儀（普朗）、96孔110°V型微量血凝反應(yīng)板、微型振蕩器、隔水式培養(yǎng)箱。

1.3 檢測(cè)室溫濕度 檢測(cè)室溫度為22℃、濕度為57%。

1.4 待檢樣品 延平區(qū)A、B、C 3個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)提供的66份血清（其中A豬場(chǎng) 20份、B豬場(chǎng)23份、C豬場(chǎng)23份）。3個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)提供的66份血清均為180～220日齡二次免疫后 15～18 d所采的后備母豬血清。

1.5 試驗(yàn)操作與結(jié)果判定 2種試驗(yàn)操作步驟分別按各試劑盒附帶的使用說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格操作。

豬瘟抗體檢測(cè)試驗(yàn)（阻斷ELISA）成立條件：陽(yáng)性對(duì)照的平均OD值阻斷率大于60%，陰性對(duì)照平均OD值/陽(yáng)性對(duì)照平均OD值大于4。用INH%來(lái)說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果，其計(jì)算方式為：IHN%=［（陰性對(duì)照OD值-樣品OD值）／陰性對(duì)照平均OD值］×100。結(jié)果說(shuō)明：被檢樣品的阻斷率大于40，該樣品為豬瘟抗體陽(yáng)性；樣品阻斷率小于或等于30，該樣品為陰性（無(wú)豬瘟抗體存在）；樣品阻斷率在30～40，該樣品為可疑。

豬瘟正向間接血凝試驗(yàn)成立條件：陽(yáng)性對(duì)照的血凝效價(jià)≥1：512，陰性對(duì)照的血凝效價(jià)為0，試驗(yàn)成立、有效。以能引起50%紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集的最大稀釋度為被檢樣品的血凝效價(jià)，抗體效價(jià)≥1：32為免疫合格，小于1：32為免疫不合格。

2 結(jié)果與分析

2.1 A豬場(chǎng)豬瘟免疫檢測(cè)結(jié)果 A場(chǎng)ELSA檢測(cè)結(jié)果在IHN%51～60的有1份、IHN%61～70有3份、IHN%71～80有 9份、IHN%81～90有 7份；豬瘟正向間接血凝試驗(yàn)抗體效價(jià)為1：128的有1份、1：512的有19份。見(jiàn)表1。

2.2 B豬場(chǎng)豬瘟免疫檢測(cè)結(jié)果 B場(chǎng)ELSA檢測(cè)結(jié)果在IHN%41～50的有1份、IHN%51～60為0份、IHN%61～70有 3份、IHN%71～80有 10份、IHN%81～90有9份；豬瘟正向間接血凝試驗(yàn)抗體效價(jià)為1：16的有 1份、1：32有 2份、1：64有 2份、1：128有3份、1：256有 2份、1：512有 13份。見(jiàn)表 2。

2.3 C豬場(chǎng)豬瘟免疫檢測(cè)結(jié)果 C場(chǎng)ELSA檢測(cè)結(jié)果在 IHN%41～50的 0份、IHN%51～60的 0份、IHN%61～70有 1份、IHN%71～80有 7份、IHN%81～90有15份；豬瘟正向間接血凝試驗(yàn)抗體效價(jià)為1：16 的 0 份、1：32 的 0 份、1：64 的 0 份、1：128有1份、1：256有 1份、1：512有 21份。見(jiàn)表 3。

從表1-表3可以看出，通過(guò)ELISA方法檢驗(yàn)，66份血清豬瘟抗體均為陽(yáng)性；通過(guò)IHA方法檢驗(yàn)，66份血清中有1份為豬瘟抗體陰性、65份陽(yáng)性，IHA檢測(cè)方法的陽(yáng)性率較低。經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)x2檢驗(yàn)，兩種檢測(cè)方法差異不顯著（P＞0.05）。

表1 A豬場(chǎng)豬瘟免疫檢測(cè)結(jié)果

表2 B豬場(chǎng)豬瘟免疫檢測(cè)結(jié)果

表3 C豬場(chǎng)豬瘟免疫檢測(cè)結(jié)果

3 小結(jié)與討論

1）ELISA 檢測(cè)的抗體阻斷率在 71～80、81～90 兩個(gè)區(qū)域較多，血清數(shù)為57份；IHA檢測(cè)的抗體在1：512區(qū)域較多，血清數(shù)53份，ELISA檢測(cè)法的血清數(shù)分布更傾向正態(tài)分布，IHA檢測(cè)法的血清數(shù)分布呈負(fù)偏態(tài)分布。兩種方法檢測(cè)的抗體值也存在較大差異，如B場(chǎng)中71號(hào)豬血清ELISA檢測(cè)IHN%值為 80.62284，IHA 檢測(cè)為 1：32；108 號(hào)豬血清ELISA檢測(cè)IHN值為 70.54979，IHA檢測(cè)為1：32；148號(hào)豬血清ELISA檢測(cè)IHN%值為78.5429，IHA檢測(cè)為 1：16；200號(hào) 豬 血清 檢 測(cè) IHN%值為47.63552，IHA檢測(cè)為1：64等。造成這些差異的原因可能是：（1）手工操作的誤差。如加樣、稀釋過(guò)程中出現(xiàn)的誤差；（2）工作溫度。如在ELISA試驗(yàn)過(guò)程中反應(yīng)板需要在37℃溫箱中分別培育2次，每次各2 h，而在IHA試驗(yàn)過(guò)程中只需保持室溫在20～25℃即可；（3）在ELISA試驗(yàn)中洗板次數(shù)的多少和顯色時(shí)間的長(zhǎng)短也是決定樣品OD值大小的關(guān)鍵步驟。

2）通過(guò)試驗(yàn)比較，兩種檢測(cè)方法在確定母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律、掌握疫苗免疫效果、豬場(chǎng)凈化等方面均可提供較為準(zhǔn)確的理論依據(jù)。從費(fèi)效比來(lái)看，ELISA試驗(yàn)具有快速、敏感、重復(fù)性好、樣品用量少、結(jié)果容易判斷等優(yōu)點(diǎn)，但它對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員、試驗(yàn)儀器設(shè)備、工作溫度等均有很高的要求，并且成本較高，而IHA試驗(yàn)也具有快速、敏感、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，且不需要特殊設(shè)備，檢測(cè)成本低，有利于推廣使用。