張迪，鄧俏，孫陽

(1．黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040;2．哈爾濱醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001)

癡呆是一種以多種高級皮層神經元紊亂所致的智能衰退為主要特征，以記憶、理解、計算、學習等能力以及判斷力的障礙為主要臨床表現的神經系統(tǒng)變性疾病。病理表現主要為腦萎縮，而腦萎縮又是由神經細胞凋亡及壞死所引起的，因此在凋亡前期對細胞凋亡啟動環(huán)節(jié)的遏制能明顯的挽救即將萎縮的腦神經元，逆轉凋亡的命運。近年來研究發(fā)現，Bcl－2 家族蛋白在神經細胞凋亡過程中發(fā)揮重要的調控作用［1－2］，根據其功能可分為兩類:一類是以Bcl－2、Bcl－xL為主要代表的抗凋亡蛋白;另一類是促凋亡蛋白，主要包括Bax、Bak 等［3］。早在 1993 年 Korsmeyer［4］就發(fā)現這兩種功能的Bcl－2 成員的比例決定著細胞是否走向凋亡，尤其是Bcl－2 和Bax兩者的比值。Bcl－2 作為抗凋亡基因可抑制許多因素所誘導的細胞凋亡，而Bax是促凋亡基因，可促進細胞凋亡的進程［5］。若腦內Bcl－2 基因釋放增加，Bax基因釋放減少，可減少腦內凋亡細胞的數量，進而增強機體的學習記憶能力，而當比例相反時則加速細胞的凋亡。本研究采用D－半乳糖腹腔注射合并腦內雙側Meynert鵝膏草氨酸注射的方法制做復合型學習障礙模型，運用電針百會、風府穴的方法進行治療，觀察該方法對學習記憶障礙大鼠腦內Bcl－2 家族基因釋放的影響，探討其改善學習記憶障礙的機制。

1 材料與方法

1．1 實驗動物與分組 選取健康Wistar雄性大鼠，體質量(470±50)g，18～22月齡48只，隨即分成4組，分別為假手術組、模型組、西藥組、電針組，每組12只。

1．2 模型制作與治療方法 模型組、西藥組、電針組均先腹腔注射以生理鹽水配置的0．96%D－半乳糖6周，然后行腦內雙側 Meynert鵝膏草氨酸(Ibotenic acid，IBO)注射。假手術組腹腔注射及腦內注射藥物均以同劑量生理鹽水替代。西藥組灌胃給予都可喜片3．6mg/kg/d，連續(xù)4周。電針組取百會、風府，用30號0．5 寸不銹鋼毫針針刺，施以連續(xù)波，頻率150Hz治療，留針15min，連續(xù)治療4周。

1．3 主要儀器試劑 KWD－808Ⅱ全能脈沖電療儀(江蘇長城醫(yī)療器械有限公司);Bcl－2 原位雜交檢測試劑盒及Bax原位雜交檢測試劑盒。

2 結果

見表1、表2。

表1 各組大鼠Bcl－2 mRNA檢測結果

表2 各組大鼠Bax mRNA檢測結果

實驗結果顯示，模型組大鼠腦內Bcl－2基因較假手術組陽性百分率略微增強，而Bax基因陽性表達則顯著增強;西藥組藥物及針刺組治療后大鼠腦內Bcl－2基因較假手術組陽性百分率明顯增強，而Bax基因陽性表達則無顯著變化;西藥組與針刺組比較，無顯著性差異。

3 討論

細胞凋亡(apoptosis)最早是1972年由Kerr教授等三位科學家首先提出的一種不同于細胞壞死的細胞死亡程序［6］。當細胞受到凋亡誘導因素刺激后，便遵循自身的規(guī)律，通過啟動內部轉導機制激活凋亡基因，繼而在基因調控下一步步自動走向死亡，其中Bcl－2家族是最主要的凋亡調控基因之一［7－8］。Bcl－2是從惡性生長的人濾泡B細胞中分離到的一種原癌基因，但Bcl－2本身并不能引起細胞惡變，而是作為細胞凋亡的一個潛在抑制劑調節(jié)細胞凋亡。細胞凋亡在機體內存在三種途徑［9］，但決定細胞是否凋亡的最直接環(huán)節(jié)為Bax和Bcl－2形成同源還是異源二聚體:1)如果Bcl－2和Bax的表達量幾乎相同，所形成的Bcl－2/Bax異源二聚體占優(yōu)勢，則細胞的存活期正常;2)如果Bcl－2較Bax表達相應增多，所形成的Bcl－2/Bcl－2同二聚體占優(yōu)勢將延長細胞的存活期;3)如果Bax較Bcl－2表達增多，使得Bax/Bax同二聚體占優(yōu)勢，則發(fā)生細胞凋亡［10］。Bcl－2家族蛋白基因中的抗凋亡蛋白基因成員和促凋亡蛋白基因成員之間的協(xié)同作用決定著機體內細胞是否進入凋亡程序。大量的研究表明，機體內部存在三種細胞凋亡途徑:線粒體途徑、死亡受體途徑以及內質網途徑。其中Bcl－2 蛋白基因不僅可通過干擾死亡受體途徑進入細胞凋亡的線粒體依賴途徑;而且存在于內質網上的Bcl－2蛋白基因還可通過降低鈣離子的釋放來抑制細胞色素C的釋放，進而抑制細胞的凋亡。這三條通路是相互作用的，細胞的命運就是它們互相作用的結果［9］。

細胞凋亡時刻存在于各種機體生命進程中，其中癡呆進展過程中存在大量的細胞凋亡程序。老年癡呆歸屬于中醫(yī)學中“呆證”、“善忘”、“狂證”、“郁證”等證范疇，腎虛髓虧為其病根，痰濁內生為其標，癡呆病位在腦，督脈是奇經八脈之一，是人體諸陽之總匯，督脈入屬于腦，又為陽脈之海，主一身之陽，陽氣旺盛可促進痰祛瘀化。而督脈百會穴位居巔頂部，其深處即為腦之所在。楊上善注說“胃流津液滲入骨空，變而為髓，頭中最多，故為海也。是腎所生，其氣上輸腦蓋百會穴，下輸風府也”。本實驗選取百會、風府作為針刺穴位，并施以電針，當這種脈沖電流作用于機體時，會使得體內離子濃度和分布發(fā)生顯著變化，從而影響機體組織功能。低頻脈沖電流通過毫針刺激腧穴，具有調整機體功能，促進氣血循環(huán)等作用。電針刺激百會、風府或許可抑制鈣離子的釋放進而影響凋亡途徑中的內質網通路及線粒體通路，進而阻止細胞凋亡程序的發(fā)生。本實驗以神經細胞凋亡相關基因Bax、Bcl－2 做為檢測指標，觀察電針對記憶障礙型大鼠神經細胞的保護作用。在對細胞凋亡調控基因Bcl－2/Bax的觀察中發(fā)現，針刺組模型大鼠皮層及海馬區(qū)內Bcl－2 蛋白基因陽性表達增強，而Bax蛋白基因則無顯著變化，提示針刺百會、風府穴可以通過促進腦內Bcl－2 蛋白基因的高表達抑制皮層及海馬神經細胞的凋亡，從而對神經元起到保護作用，延長神經元的壽命，對學習記憶功能發(fā)揮有益的作用。

［1］ Banjerdpongchai R，Punyati P，Nakrob A，et al．4’－h(huán)ydroxycinna－maldehyde from Alpinia galanga(Linn)induces human leukemic cell apoptosis via mitochondrial and endoplasmic reticulum stress pathways［J］．Asian Pac J Cancer Prev，2011，12:593－598．

［2］ Song XD，Zhang JJ，Wang MR，et al．Astaxanthin induces mito－chondria－mediated apoptosis in rat hepatocellular carcinoma CBRH－7919 cells［J］．Biob Pharm Bull，2011，34:839－844．

［3］ Gross A，McDonnell JM，Korsmeyer SJ．Bcl－2 family membersand the mitochondria in apoptosis［J］．Genes Dev，1999，13(15):1899－1911．

［4］ Korsmeyer SJ，Shutter JR，Veis DJ，at al．Bcl－2/Bax:a rheostathat regulates an anti－oxidant pathway and cell death［J］．Semin Cancer-Bio，1993，4(6):327－332．

［5］ Burguillos MA，Hajji N，Englund E，et al．Apoptosis－inducing factor mediates dopaminergic cell death in re－sponse to LPS－induced inflammatory stimulus:evidence in Parkinson ＇s disease patients［J］．Neurobiol Dis，2011，41(1):177－188．

［6］ Kerr JF，Wyllie AH，Currie AR．Apoptosis:a basis biological phenomenon with wide－ranging implications in tissue kinetics［J］．Br J Cancer，1972，26:239－25．

［7］ Banjerdpongchai R，Punyati P，Nakrob A，et al．4’－h(huán)ydroxycinna－maldehyde from Alpinia galanga(Linn)induces human leukemic cell apoptosis via mitochondrial and endoplasmic reticulum stress pathways［J］．Asian Pac J Cancer Prev，2011，12:593－598．

［8］ Song XD，Zhang JJ，Wang MR，et al．Astaxanthin induces mito－chondria－mediated apoptosis in rat hepatocellular carcinoma CBRH－7919 cells［J］．Biob Pharm Bull，2011，34:839－844．

［9］ 劉萍，叢國正，獨軍政，等．細胞凋亡信號傳導通路的研究進展［J］．湖北農業(yè)科學，2010，49(3):715－717．

［10］ Tomasin R，Cintra Gomes－Marcondes MC．Oral adminis－tration of Aloe vera and honey reduces walker tumour growth by decreasing cell proliferation and increasing apoptosis in tumour tissue［J］．Phytother Res，2011，25(4):619－623．