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        松針總黃酮抗氧化調(diào)血脂作用研究

        2013-12-17 05:30:38劉紅煜劉樹民于棟華李偉王加志
        中醫(yī)藥信息 2013年1期
        關(guān)鍵詞:松針過氧化黃酮

        劉紅煜,劉樹民,于棟華,李偉,王加志

        (1.黑龍江生物科技職業(yè)學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150025;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),黑龍江 哈爾濱 150040;3.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院,黑龍江 佳木斯 154007)

        松針(Pineneedles)為松科(Pinaceae)松屬(Pinus)植物的針狀葉。現(xiàn)代研究表明,松針提取物中富含黃酮類化合物,有抗氧自由基作用[1-4]。本研究試圖通過探討松針總黃酮對飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠自由基和血脂代謝的影響,為松針的減肥作用機(jī)制的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)對象 清潔級Wistar(4月齡)大鼠40只,雌雄各半,體質(zhì)量(200±20)g,購于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為4組,每組10只,分別為空白對照組(空白組)、膳食誘導(dǎo)肥胖組(模型組)、藥物治療組(治療組)和維生素E對照組(對照組)。

        1.2 實(shí)驗(yàn)材料 樟子松松針,采自黑龍江省大興安嶺塔河,經(jīng)植物專家檢驗(yàn)、鑒定為樟子松松針。

        1.3 總黃酮的制備 新鮮松針洗凈,干燥后稱取200g,置具塞圓底燒瓶中,加入70%乙醇10倍量回流提取2次,2h/次。減壓收干,熱蒸餾水分散,靜置后得棕黃色溶液及黑綠色沉淀,取棕黃色濾液減壓蒸干,經(jīng)聚酰胺柱處理,50%醇水洗脫組分為受試樣品[5]。蒸餾水溶解,配成含生藥1g/ml受試液備用。

        1.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)預(yù)處理 高脂飼料配方如下:基礎(chǔ)飼料50%、豬油10%、蔗糖20%、豬膽鹽1%、雞蛋10%、奶粉9%。每周稱重,飼養(yǎng)12周。松針總黃酮灌胃給藥4周,于末次給藥后,禁食不禁水12h,烏拉坦腹腔注射麻醉,門靜脈采血,4500 轉(zhuǎn)離心15min分離得血清,測定血脂水平;立即摘取肝臟并用預(yù)冷的生理鹽水洗凈血液,濾紙吸干,按體積比1:9 加入低溫預(yù)冷pH7.2的磷酸鹽緩沖液勻漿,4℃離心(5000r/min)15min,取上清液測定抗氧化酶水平。

        1.5 檢測指標(biāo)和方法 丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和過氧化氫酶(CAT),血清總膽固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)、血清低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、血清極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL-C),測定試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供,嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行測定。

        1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

        用SPSS 13.0 軟件對所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和t檢驗(yàn),結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。顯著性水平定為P<0.05 或P<0.01。

        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        2.1 松針總黃酮對大鼠肝臟自由基代謝的影響

        與模型組比較,治療組SOD、GSH-Px和CAT的活性顯著增強(qiáng),MDA含量顯著降低(P<0.05)。見表1。

        表1 松針總黃酮對大鼠肝臟自由基代謝的影響(±s)

        表1 松針總黃酮對大鼠肝臟自由基代謝的影響(±s)

        注:與模型組比較,*P <0.05。

        nSOD(u/ml)GSH-Px(u/ml)MDA(μmol/L)CAT(u/mgprot)空白組 10 369.15 ±40.65393.75 ±45.16 4.80 ±0.11 269.66 ±29.70模型組 10 323.08 ±39.39356.16 ±42.12 6.01 ±0.13 142.82 ±26.33治療組 10 371.88 ±41.87*432.03 ±65.02*4.89 ±0.20*210.29 ±13.37*對照組 10 358.80 ±40.08*412.33 ±62.12*4.82 ±0.18*201.81 ±11.77*

        2.2 松針總黃酮對大鼠血脂的影響

        結(jié)果顯示,治療組大鼠血清血脂水平與模型組相比,LDL-C、VLDL-C、TC、TG 都顯著降低,差異顯著(P <0.05)。見表2。

        表2 松針總黃酮對大鼠血脂的影響(±s)

        表2 松針總黃酮對大鼠血脂的影響(±s)

        注:與模型組相比,*P <0.05。

        組別 nLDL-C(mmol/L)VLDL-C(mmol/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)10 0.20 ±0.09 1.04 ±0.11 1.27 ±0.15 0.24 ±0.11模型組 10 1.74 ±0.71 8.94 ±2.6810.21 ±2.49 1.93 ±0.66治療組 10 0.79 ±0.07*5.35 ±1.37*6.27 ±1.70*0.77 ±0.39*對照組 10 0.36 ±0.10*2.96 ±0.67*3.36 ±0.72*0.42 ±0.29空白組*

        3 討論

        肥胖癥是一種機(jī)體能量代謝障礙性疾病,是心腦血管疾病和糖尿病的高發(fā)危險(xiǎn)因素,因?yàn)樯盍?xí)慣的改變而在發(fā)達(dá)國家中高發(fā)[6]。

        有研究顯示,肥胖本身會(huì)造成自由基生成過多和消除不足[7-8],氧自由基使細(xì)胞產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化,進(jìn)一步導(dǎo)致其功能受損,產(chǎn)生多種臟器功能障礙。通過體外培養(yǎng)3T3 脂肪細(xì)胞的研究顯示,H2O2 作用于培養(yǎng)的脂肪細(xì)胞,會(huì)使細(xì)胞氧化應(yīng)激標(biāo)記物上升[9]。而機(jī)體內(nèi)存在著自由基防御酶,通過SOD歧化O-2 生成的H2O2,并在CAT作用下分解為H2O和O2,阻斷毒性更強(qiáng)的羥自由基產(chǎn)生,GSH-Px主要作用是以GSH為底物,與SOD、CAT協(xié)同作用清除機(jī)體內(nèi)的各種氧自由基,以減輕或阻斷脂質(zhì)過氧化反應(yīng),保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。

        本實(shí)驗(yàn)采用飲食性高脂血癥動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)方法。主要用于降血脂藥物的篩選和評價(jià),以及對人類高脂血癥的研究。因大鼠對外源性膽固醇的吸收率高,對血脂的清除能力低,且便于采血和飼養(yǎng)管理,是一種比較理想的研究模型。

        天然抗氧化劑松針總黃酮可以使大鼠抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT活性上升,MDA 含量下降,抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和自由基產(chǎn)生,并能調(diào)節(jié)血脂代謝,對諸如糖尿病、高血壓、動(dòng)脈硬化等一系列并發(fā)癥有較好的防治作用。

        [1] 邢雁霞,劉斌鈺,李麗芬.松針對小鼠應(yīng)激能力和自由基代謝的影響[J].中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2010,11(3):298-300.

        [2] 曾明,李守漢,郭層城,等.松針提取液對小鼠骨骼肌自由基代謝和運(yùn)動(dòng)能力的影響[J].北京體育大學(xué)學(xué)報(bào),2006,29(4):484-485.

        [3] 孔慶峰,楊金宇,潘西芬.松針?biāo)幚碜饔醚芯窟M(jìn)展[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2010,7(26):16-17.

        [4] 俞靈鶯,李向榮.植物黃酮類抗糖尿病及其并發(fā)癥的研究進(jìn)展[J].國外醫(yī)學(xué)·衛(wèi)生學(xué)分冊,2000,27(6):331-335.

        [5] 樊鐵波,劉紅煜,湯青,等.HPLC法測定松針中二氫槲皮素含量[J].中國藥師,2009,12(8):1046-1048.

        [6] 支滌靜,沈水仙.肥胖的危害及預(yù)后[J].中國全科醫(yī)學(xué),2003,6(4):2821-2822.

        [7] 王焰山.松針提取液對實(shí)驗(yàn)性高脂血癥及過氧化作用的影響[J].北京中醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2001,24(2):35-37.

        [8] 羅蓉.肥胖與自由基[J].國外醫(yī)學(xué)·內(nèi)分泌分冊,2004,31(24):9-10.

        [9] JeBailey L.Ceramide-and oxidant-induced insulin resistanceinvolve loss of insulin-dependent rac-activation and actinremodeling in muscle cells[J].Diabetes,2007,56:394-403.

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