朱 玲，邵彥江，李 敏，崔文琪，阿有梅，高珊珊，張振中

鄭州大學(xué)藥學(xué)院鄭州450001

#通訊作者，男，1964年11月生，博士，教授，研究方向:腫瘤納米給藥系統(tǒng)研究，E－mail:zhangzhenzhong@zzu.edu.cn

他莫昔芬屬于三苯乙烯非甾體抗雌激素類抗腫瘤藥物，用于治療乳癌［1－2］。他莫昔芬脂溶性強(qiáng)，口服后易在體內(nèi)蓄積，不良反應(yīng)較多，特別是對(duì)子宮和卵巢影響最大［3－4］。作者旨在研究枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑經(jīng)大鼠乳腺周圍組織皮膚局部給藥后在大鼠體內(nèi)組織分布的特征，為枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑的進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、材料及儀器 雌性SD 大鼠50 只，體質(zhì)量(250±30)g，購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證編號(hào)SCXK(豫)2005－0001。枸櫞酸他莫昔芬對(duì)照品(阿利斯康中國(guó)公司，純度99.8%);枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑(自制，質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%);1100型高效液相色譜系統(tǒng)(Agilent 公司，美國(guó))。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent ODS C18(5 μm，4.6 mm× 250 mm);柱溫:25℃;流動(dòng)相:甲醇和體積分?jǐn)?shù)為1%三乙胺水溶液(體積比89 ︰11)，冰乙酸調(diào)節(jié)pH 至8.5;流速1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，參比波長(zhǎng)376 nm;進(jìn)樣量30 μL。

1.2.2 樣品處理組織樣品與Tris－HCl 溶液(Tris 6 g/L)混合勻漿，乳腺及卵巢組織每0.1 g 加入Tris－HCl溶液1 mL，子宮及肝臟組織每0.1 g 加入Tris－HCl 溶液0.5 mL。取漿液0.5 mL，加入甲醇1.5 mL，渦旋振蕩3 min，離心(6 000 g)15 min，棄上清，56℃下氮?dú)饬鞔蹈?。殘?jiān)?00 μL 甲醇溶解，渦旋振蕩1 min，離心(8 000 g)15 min，取上清液進(jìn)行分析。

1.2.3 方法學(xué)驗(yàn)證 精密稱取枸櫞酸他莫昔芬對(duì)照品12.81 mg(約相當(dāng)于“他莫昔芬”8.43 mg)，配制對(duì)照品貯備液，精密量取貯備液，以適量甲醇進(jìn)行稀釋，得系列濃度的對(duì)照品溶液;參照1.2.2 樣品處理方法，以對(duì)照品溶液和空白組織勻漿液制備標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品及質(zhì)控樣品，考察標(biāo)準(zhǔn)曲線、準(zhǔn)確度、精密度及樣品的穩(wěn)定性。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組與他莫昔芬大鼠體內(nèi)分布考察 SD大鼠50 只，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各25 只。給藥前3 d 備皮，給藥前禁食12 h，自由飲水。對(duì)照組灌胃給予濃度為0.8 g/L 枸櫞酸他莫昔芬丙二醇溶液，給藥劑量為10 mg/kg。實(shí)驗(yàn)組按50 mg/kg 的劑量給藥(該劑量與口服10 mg/kg 枸櫞酸他莫昔芬丙二醇溶液后血漿的達(dá)峰濃度水平接近［5］)，將枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑均勻涂布于大鼠乳腺組織周圍(藥物涂布總面積為12～16 cm2)。2組均每24 h給藥1 次，連續(xù)給藥3 d，并于末次給藥后0、4、8、12、24 h 腹腔注射濃度為0.05 g/mL 的水合氯醛溶液處死大鼠，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死5 只，剖取乳腺、肝臟、子宮及卵巢等組織。生理鹽水沖洗組織表面浮血，用濾紙吸干水分后精密稱取質(zhì)量并記錄，置于－70℃冰箱避光保存。按1.2.3 處理樣品，進(jìn)行分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 15.0 處理數(shù)據(jù)，對(duì)2組各時(shí)間點(diǎn)藥物濃度的比較采用兩獨(dú)立樣本的t 檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 方法學(xué)考察

2.1.1 方法專屬性 色譜圖見圖1。他莫昔芬的保留時(shí)間為11.8 min 左右，峰形良好，基線平穩(wěn)，與內(nèi)源性物質(zhì)分離良好(R≥2)。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線 各組織標(biāo)準(zhǔn)曲線在考察范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，系數(shù)r 均＞0.999。各組織定量限的RSD 均＜15%(n=3)。

2.1.3 精密度及準(zhǔn)確度 各組織勻漿液中他莫西芬的回收率82%～113%，批內(nèi)差2.3%～13.4%(n=3)，批間差4.4%～10.4%(n=9)。

2.1.4 穩(wěn)定性 各組織模擬生物樣品高、中、低濃度樣品回收率的RSD 均小于15%(n =3);回收率92%～113%，與新配制模擬生物樣品的測(cè)定結(jié)果相比回收率沒有顯著變化(n=3)。

2.2 2組大鼠不同組織他莫昔芬濃度比較 各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組大鼠乳腺組織中他莫昔芬的濃度均高于對(duì)照組，2組達(dá)峰時(shí)間均為4 h。2組其他組織中他莫昔芬濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1～4。

圖1 各組織樣品色譜圖

表1 各組織中他莫昔芬的回歸方程

表1 2組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)乳腺組織中他莫昔芬濃度比較 μg/g

表2 2組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)子宮組織中他莫昔芬濃度比較 μg/g

表3 2組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)卵巢組織中他莫昔芬濃度比較 μg/g

表4 2組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)肝臟組織中他莫昔芬濃度比較 μg/g

3 討論

他莫昔芬口服給藥后體內(nèi)組織分布較廣，口服后非靶組織中的藥物濃度相對(duì)較高，肝臟中的峰濃度甚至達(dá)到了乳腺組織的2 倍以上。

枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑經(jīng)皮給藥后，血漿中的達(dá)峰時(shí)間晚于口服給藥(經(jīng)皮約7.3 h，口服約2.5 h)［5］，而乳腺組織中藥物的達(dá)峰濃度相同，且實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)大鼠乳腺組織中的濃度顯著高于對(duì)照組，表明經(jīng)皮給藥后他莫昔芬可被迅速吸收進(jìn)入乳腺組織，而進(jìn)入全身循環(huán)的速度相對(duì)緩慢，表現(xiàn)出顯著的趨向乳腺組織的分布特征。

該研究結(jié)果顯示，與口服給藥相比，枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑經(jīng)乳腺周圍皮膚組織給藥，乳腺組織中的他莫昔芬濃度顯著提高，而其他組織如子宮、卵巢、肝臟中藥物濃度水平則相當(dāng)，這可能是由于他莫昔芬凝膠劑在給藥部位的皮膚及組織蓄積，形成暫時(shí)的藥物儲(chǔ)庫，使乳腺組織內(nèi)的藥物濃度顯著高于其他組織。這對(duì)于降低他莫昔芬對(duì)非靶組織的毒副作用、提高治療效果十分有利。

總之，與口服給藥途徑相比，枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑經(jīng)皮局部給藥可增加乳腺組織對(duì)藥物的吸收。

［1］Chirgwin J，Sun Z，Smith I，et al.The advantage of letrozole over tamoxifen in the BIG 1－98 trial is consistent in younger postmenopausal women and in those with chemotherapy－induced menopause［J］.Breast Cancer Res Treat，2012，131(1):295

［2］Kulak CA，Baz－Hecht M，Nieves J，et al.Responses of urinary N－telopeptide and renal calcium handling to PTH infusion after treatment with estrogen，raloxifene，and tamoxifen［J］.Calcif Tissue Int，2012，90(4):263

［3］張麗萍，丁紅，謝茵，等.高效液相色譜法測(cè)定枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑的含量［J］.中國(guó)藥物與臨床，2009，9(8):716

［4］李宏，姜繼勇.他莫昔芬與子宮內(nèi)膜癌［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué):婦產(chǎn)科學(xué)分冊(cè)，2005，32(3):189

［5］朱玲，王彩芳，阿有梅，等.枸櫞酸他莫昔芬凝膠劑在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究［J］.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2009，40(7):510