肖正國(guó)，李喜香，劉效栓，姜玲艷

(甘肅省中醫(yī)院，甘肅蘭州730050)

通竅鼻淵丸為我院院內(nèi)制劑，由梔子、辛夷、葛根、川芎等15味中藥組成，為半粉末濃縮丸。梔子為其主藥。梔子是茜草科植物Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果實(shí)，性味苦寒，入心、肝、肺、三焦經(jīng)，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、解毒之功效［1］。梔子屬植物中含有黃酮類(lèi)(梔子素類(lèi))、環(huán)烯醚萜類(lèi)(梔子苷類(lèi))、三萜類(lèi)(梔子花酸類(lèi))和有機(jī)酸脂類(lèi)(綠原酸)等多種化合物，而梔子苷是梔子藥材中環(huán)烯醚萜類(lèi)的代表成分。2010版《中國(guó)藥典》規(guī)定：梔子苷為梔子藥材藥效成分評(píng)價(jià)的指標(biāo)［2-4］。本實(shí)驗(yàn)探討了通竅鼻淵丸在制備的各個(gè)環(huán)節(jié)中，梔子苷含量變化的規(guī)律，以期為生產(chǎn)提供一定的理論依據(jù)。

1 藥品、試劑與儀器

所用藥材飲片購(gòu)自蘭州安泰堂中藥飲片公司、蘭州方正藥業(yè)有限公司，經(jīng)甘肅省中醫(yī)院藥物分析實(shí)驗(yàn)室檢定，符合2010版《中國(guó)藥典》各藥材項(xiàng)下規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。梔子苷對(duì)照品，供含量測(cè)定用，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)110749-200714;甲醇(批號(hào)20100410)，乙腈(批號(hào)20100410)，為色譜純，由天津市科米歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心提供;含量測(cè)定用水為娃哈哈純凈水;提取用水為飲用水。美國(guó)Waters 2695高效液相色譜儀，包括Waters 2487雙通道紫外檢測(cè)器;Sartorius R-200D電子天平，產(chǎn)地德國(guó);HM500型電熱套，北京科偉儀器公司產(chǎn)品;KQ2500DE型超聲波清洗器，昆山超聲儀器有限公司產(chǎn)品;HHS數(shù)顯恒溫水浴鍋，北京科偉儀器公司產(chǎn)品;TYPE-YUG101型全自動(dòng)速控中藥制丸機(jī)、微波真空干燥儀，均為甘肅天水華圓制藥設(shè)備有限公司產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2.1 藥材細(xì)粉配料

按處方比例稱(chēng)取梔子、辛夷、葛根、川芎等15味藥材細(xì)粉共 55.6 g，其中梔子6.3 g，辛夷3.3 g。細(xì)粉過(guò)120目篩，用倍研法混合均勻。

2.2 浸膏的制備

按處方比例稱(chēng)取梔子、辛夷、葛根、川芎等15味藥材粗粉共209 g，其中梔子24 g，辛夷6 g。粗粉過(guò)3號(hào)篩，加水煎煮3次，加水量分別為10倍、8倍、8倍，合并濾液，減壓濃縮至稠膏，收膏110 g，干燥失重45%，干膏得率52.6%。

2.3 成品總混合粉制備

浸膏與藥材細(xì)粉按2∶1的比例混合，制丸成形，40℃微波真空干燥8 min，得丸劑110.5 g。取一定數(shù)量的濃縮丸粉碎，得總混合粉。

2.4 梔子苷含量測(cè)定

2.4.1 色譜條件

色譜柱(Symmetryshield RP18，4.6 mm ×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇 ∶水(13∶87)，流速1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)238 nm，進(jìn)樣量10μL，柱溫為室溫。理論塔板數(shù)按梔子苷峰計(jì)，不低于1500［5-6］。

2.4.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取梔子苷對(duì)照品8.02 mg，加甲醇溶解，稀釋定容至50 mL，制成160.4 mg/L的對(duì)照品儲(chǔ)備液，備用。精密吸取儲(chǔ)備液 0.2，0.6，1.0，4.0，8.0，10.0 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，分別得到 3.208，9.624，16.04，64.16，128.32，160.40 mg/L的對(duì)照品甲醇溶液。

2.4.3 供試品溶液的制備

分別精密稱(chēng)取2.1，2.2，2.3 項(xiàng)下的細(xì)粉、浸膏、總混合粉各1 g，以及梔子藥材(細(xì)粉∶粗粉質(zhì)量比為6∶24)0.1 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理20 min，放冷;再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò);精密量取續(xù)濾液10 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾即得。

2.4.4 陰性對(duì)照溶液的制備

按照2.1，2.2，2.3 項(xiàng)下的方法制備不含梔子的濃縮丸，精密稱(chēng)取1 g，參照2.4.3方法，制成陰性對(duì)照溶液。

2.4.5 線性關(guān)系考察

精密吸取2.4.2項(xiàng)下梔子苷對(duì)照品溶液各10μL進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，濃度(C)為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得回歸方程 A=320.619C+28 277.210，r=0.999 2(n=6)。表明：梔子苷在3.208～160.40 mg/L范圍內(nèi)峰面積與濃度的線性關(guān)系良好。

2.4.6 精密度試驗(yàn)

取3.208 mg/L的梔子苷對(duì)照品溶液按2.4.1項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，峰面積的RSD值為0.18%(n=6)。

2.4.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取2.4.3項(xiàng)下的供試品溶液在 0，2，4，8，10，12 h各進(jìn)樣10μL，記錄峰面積。結(jié)果峰面積的RSD=0.28%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.8 重復(fù)性試驗(yàn)

分別精密稱(chēng)取 2.1，2.2，2.3 中的樣品各 5 份，照2.4.3的方法各制備5份樣品溶液，進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：梔子苷峰面積的 RSD值分別為 0.28%、0.42%、0.29%(n=5)。

2.5 含量測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各10μL進(jìn)樣，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，陰性對(duì)照溶液色譜圖與樣品溶液位置處無(wú)干擾(見(jiàn)圖1～5)，此方法可行。

2.6 結(jié) 果

梔子原料藥材中梔子苷含量以2.098%計(jì)，結(jié)果按下列公式計(jì)算［7］：

每g樣品中梔子苷的含量=［實(shí)測(cè)濃度(mg/L)×25L/10 g/L］×0.025 L

每g細(xì)粉中梔子苷理論投入量=1×6.3/55.6×2.098% ×100% ×103

每g浸膏中梔子苷理論投入量=1×24/110×2.098% ×100% ×103

每g成品中梔子苷理論投入量=1×(30.3×2.098%) ×100%/110.5 ×103

梔子苷轉(zhuǎn)移率=每g樣品中梔子苷含量/理論投入量×100%，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

根據(jù)《中國(guó)藥典》規(guī)定［1］，梔子藥材中之梔子苷的含量不低于1.8%。以此為依據(jù)，在目前的條件下，院內(nèi)制劑通竅鼻淵丸中梔子苷含量應(yīng)不低于0.45 mg/g;以此可作為鼻淵丸質(zhì)量?jī)?nèi)控標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)。從表2的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，我們以往采用的水提濃縮工藝相對(duì)落后，資源浪費(fèi)較大。浸膏制作過(guò)程梔子苷只有7.25%被利用，由原料到成品轉(zhuǎn)移率不到10%，究其原因，可能有以下幾點(diǎn)：①提取不完全。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，與梔子環(huán)烯醚萜苷的溶解性相匹配的溶劑的極性，在乙酸乙酯與甲醇之間［8］，而大部分文獻(xiàn)采用500～600 g/L)的稀乙醇提?。?］。②濃縮中破壞。即使在減壓條件下，水提液濃縮時(shí)溫度亦在60℃以上，生產(chǎn)上很難控制。③干燥時(shí)的溫度［10］。盡管中藥復(fù)方制劑成分復(fù)雜，只使用單一有效成分分析，難以全面表達(dá)制劑質(zhì)量的全面性和系統(tǒng)性［11］，但由原料至成品，畢竟梔子苷損失了90%之多。如何提高梔子苷轉(zhuǎn)移率，同時(shí)盡量減少其他有效成分的損失，是研究的關(guān)鍵。在進(jìn)一步研究中，筆者采用乙醇為溶劑，以干膏得率和梔子苷含量結(jié)合，綜合評(píng)分為考察指標(biāo)，均勻設(shè)計(jì)優(yōu)選出正確的提取工藝：即乙醇濃度為527.3 g/L，固液比為10.82倍，提取時(shí)間為60.91 min，提取次數(shù)為 3 次［12］。工藝驗(yàn)證中，梔子苷轉(zhuǎn)移率提高到32.5%。

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