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        正交試驗(yàn)優(yōu)選復(fù)方苦蛇黃洗劑提取工藝

        2013-12-09 05:01:02許時(shí)貴丁志軍羅美蘭甘慧群江西省皮膚病專科醫(yī)院南昌330001
        江西中醫(yī)藥 2013年12期
        關(guān)鍵詞:洗劑苦參堿苦參

        ★ 許時(shí)貴 丁志軍 羅美蘭 甘慧群 (江西省皮膚病??漆t(yī)院 南昌330001)

        復(fù)方苦蛇黃洗劑由苦參、烏梢蛇、黃柏等7 味中藥組成,具有清熱燥濕、解毒、殺蟲、祛風(fēng)止癢等功效。主要治療風(fēng)濕熱蟲所致皮膚瘙癢癥以及疥瘡、濕疹、丘疹性蕁麻疹、體股癬、夏季皮炎等引起的瘙癢性皮膚病。為了將復(fù)方苦蛇黃洗劑更好地應(yīng)用于臨床,我院研究開發(fā)出攜帶及使用方便的復(fù)方苦蛇黃洗劑(批準(zhǔn)文號(hào):贛藥制字H20100009),并對(duì)其制備工藝進(jìn)行了研究?,F(xiàn)報(bào)道如下。

        1 儀器與試藥

        Agilent 1 100 高效液相色譜(HPLC)系統(tǒng)(美國(guó)安捷倫科技有限公司);CP225D 微量天平(德國(guó)Sartorius 公司);KQ -500E 醫(yī)用超聲清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。

        苦參堿對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)分別為110753 -200512);乙腈為色譜純、甲醇為色譜純;磷酸為分析純。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 評(píng)價(jià)指標(biāo)的確定

        復(fù)方苦蛇黃洗劑處方中有多味藥材,有效成分眾多,其中苦參為君藥,具有清熱燥濕,殺蟲,利尿,止癢功效??鄥⒅饕猩飰A成分,而以苦參堿含量最高,因此選擇苦參堿為含量測(cè)定指標(biāo)。

        2.2 苦參堿的含量測(cè)定[1]

        2.2.1 測(cè)定方法

        照高效液相色譜法《中華人民共和國(guó)藥典》(2010 版)一部附錄附錄ⅥD 測(cè)定。

        2.2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

        用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-甲醇-磷酸鹽緩沖液(pH6.8)-三乙胺(18∶18∶70∶0.1)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

        2.2.3 對(duì)照品溶液的制備

        精密稱取苦參堿對(duì)照品10mg,置50mL 容量瓶中,加甲醇溶解至刻度,搖勻,精密吸取5mL,置10mL 容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,制成每1mL 含苦參堿100μg 的溶液,作為對(duì)照品溶液。即得。

        2.2.4 供試品溶液的制備

        精密吸取本品2mL,加水20mL,用氨試液調(diào)PH值為9 -10,用三氯甲烷提取4 次,每次20mL,合并三氯甲烷提取液,蒸干,殘?jiān)蛹状际谷芙猓?5mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液5mL,置10mL 量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

        2.2.5 測(cè)定法

        分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。

        圖4 高效液相色譜圖

        2.3 正交試驗(yàn)優(yōu)選提取工藝

        2.3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

        通過預(yù)試驗(yàn)對(duì)影響水煎煮的各因素進(jìn)行考察,選擇加水量(A)、提取時(shí)間(B)、為影響水煎煮的主要因素,每個(gè)因素選取3 個(gè)水平。因素水平見表1。

        2.3.2 正交試驗(yàn)安排及結(jié)果

        按處方比例稱取苦參等藥材800g,共9 份,根據(jù)L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表,將藥材浸泡0.5 小時(shí)后提取。提取完畢后,將不同條件下的加水煎煮2 次,濾過,合并濾液,分別濃縮至900mL,備用。以苦參堿為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行試驗(yàn)。正交試驗(yàn)結(jié)果見表2。

        表1 因素水平表

        表2 L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

        結(jié)論:從上表結(jié)果并按直觀分析,影響水煎提取工藝的因素為A >B,最佳提取工藝為A3B3,故擬選擇A3B3,即苦參等藥材加水煎煮2 次,第1 次加12倍量水,煎煮2 小時(shí),第2 次加10 倍量水,煎煮1.5小時(shí),濾過,合并濾液,濾液濃縮至900mL。

        2.4 工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

        為了驗(yàn)證正交試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,以確保提取工藝合理可行,按上述工藝條件A3B3,重復(fù)安排3批試驗(yàn)。結(jié)果,苦參堿含量分別為2.70mg/mL、2.73mg/mL、2.69mg/mL,與正交試驗(yàn)較好的結(jié)果相近,表明優(yōu)選的工藝合理、可行。

        3 討論

        本試驗(yàn)曾參考文獻(xiàn)[2-4]采用不同流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行洗脫。結(jié)果發(fā)現(xiàn),乙腈- 甲醇- 磷酸鹽緩沖液(pH6.8)-三乙胺(18∶18∶70∶0.1)溶液即能將指標(biāo)成分與雜質(zhì)峰徹底分開,且陰性試驗(yàn)無(wú)干擾,故采用此流動(dòng)相進(jìn)行洗脫。

        采用正交設(shè)計(jì),并根據(jù)預(yù)試驗(yàn),確定了水提工藝的最佳條件,即稱取水提取藥材,加水煎煮兩次,第1 次加12 倍量水,煎煮2 小時(shí),第2 次加10 倍量水,煎煮1.5 小時(shí),其中第1 次提取前先將藥材浸泡0.5 小時(shí)。

        [1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S]. 北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:188.

        [2]王穎,王秋香.高效液相色譜法測(cè)定婦炎康濃縮丸中苦參堿的含量[J].中國(guó)藥房,2005,16(24):1 901.

        [3]廖銀根,丁志軍,羅美蘭,等.正交試驗(yàn)優(yōu)選荊防止癢顆粒提取工藝[J].中國(guó)藥房,2011,22(39):3 673 -3 675.

        [4]任潔,劉光斌,鄒干朋,等.HPLC 測(cè)定舒陰洗液中苦參堿的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,16(18):76,77.

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