甘秀海，趙 超，趙 陽(yáng)，周 欣，*

(1.貴州師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽(yáng)550018;2.貴州師范大學(xué)天然藥物質(zhì)量控制研究中心，貴州貴陽(yáng)550001;3.中國(guó)航空油料有限責(zé)任公司油品應(yīng)用研究中心，北京100621)

梔子花為茜草科植物山梔子(Gardenia jasminoidesEllis)的花，又名山梔花、雀舌花、野桂花、黃梔子、玉荷花等，是我國(guó)八大香花之一。其性寒、味甘苦，具有清肺止咳、涼血止血的功效，主治肺熱咳嗽，鼻衄，咯痰，腫毒等病癥［1］。其精油可用于多種香型化妝品、香皂香精以及高級(jí)香水香精。有關(guān)梔子花揮發(fā)性成分的提取，劉百戰(zhàn)等人［2-5］均采用固相微萃取技術(shù)(SPME)對(duì)梔子花揮發(fā)性成分的提取進(jìn)行了研究。另外，趙喜蘭等人［6］利用水蒸氣法對(duì)梔子花的揮發(fā)性成分進(jìn)行了提取。相對(duì)于水蒸氣法，SPME技術(shù)的優(yōu)勢(shì)為操作簡(jiǎn)單、快捷。但其對(duì)設(shè)備要求較高，同時(shí)對(duì)植物精油大量的提取具有一定的局限性。在抗氧化研究方面，Trishna Debnath［7］等人研究表明梔子果提取物具有明顯的抗氧化活性，而關(guān)于梔子花精油的抗氧化作用未見(jiàn)報(bào)道。植物精油是香料工業(yè)的重要原料和出口物質(zhì)，隨著香料香精工業(yè)的迅猛發(fā)展，研究梔子花精油有著越來(lái)越重要的現(xiàn)實(shí)意義。因此，本文采用微波輔助-水蒸氣蒸餾法提取梔子花精油，并以VC為陽(yáng)性對(duì)照，采用分光光度法測(cè)定梔子花精油對(duì)DPPH·和ABTS+·的清除率，為梔子花的綜合開(kāi)發(fā)與利用奠定一定的科學(xué)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

梔子花鮮品 于2011年6月采于貴州師范學(xué)院校內(nèi)，經(jīng)貴州師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院朱富壽教授鑒定為山梔子的花;正構(gòu)烷烴混合對(duì)照品(C4～C40) 美國(guó)Accu Standard公司;1，1-二苯基苦基苯肼(DPPH)、2，2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS) 美國(guó)SIGMA公司;維生素C 北京市金諾欣成化工有限公司，純度＞98%;其他試劑 均為分析純。

Agilent7890A-5975C型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀美國(guó)安捷倫公司;UV-2450型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 日本島津公司;YH-100B型微波合成萃取儀 北京祥鵠科技發(fā)展有限公司;2000 mL同時(shí)蒸餾-萃取(SDE)裝置 南京鑾玉化玻儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 梔子花精油的提取 參考文獻(xiàn)［8］略有改進(jìn)，稱取當(dāng)日采摘新鮮梔子花200g切碎，置于揮發(fā)油萃取器中，加6倍量水，設(shè)置微波功率200W，提取1h，之后用無(wú)水乙醚萃取，再用適量無(wú)水硫酸鈉干燥，揮盡乙醚，得淺黃色具有芳香氣味精油約1mL，提取率為0.38%，密封，4℃下保存，備用。

1.2.2 GC-MS分析［3］氣相色譜條件:色譜柱HP-5(30m ×0.25mm ×0.25μm);保持 1min，以 10℃/min升溫至 130℃，保持 10min，以 5℃/min升溫至250℃，保持10min，以 10℃/min升溫至280℃，保持10min;進(jìn)樣口溫度:250℃;氣相與質(zhì)譜接口溫度:280℃。載氣為高純氦氣，載氣流速1.2mL/min;進(jìn)樣量1μL(揮發(fā)油正己烷稀釋液)，分流比50∶1。

質(zhì)譜條件:離子源為EI源，離子源溫度230℃;四級(jí)桿溫度150℃;溶劑延遲時(shí)間4.0min;質(zhì)量范圍35～500m/z。

1.2.3 KI值測(cè)定 參考文獻(xiàn)［9］取正構(gòu)烷烴混合對(duì)照品按1.2.2中條件分析，進(jìn)樣量1μL，記錄各正烷烴的保留時(shí)間，采用線性升溫公式計(jì)算梔子花精油中各組分的KI值:KI=100n+100(tx-tn)/(tn+1-tn)

其中tx，tn和tn+1分別為被分析組分和碳原子數(shù)處于n和n+1之間的正烷烴(tn＜tx＜tn+1)的流出峰的保留時(shí)間。

1.2.4 抗氧化能力測(cè)定

1.2.4.1 消除DPPH·能力測(cè)定 消除DPPH·能力測(cè)定實(shí)驗(yàn)參照文獻(xiàn)［10-11］并加以改進(jìn)，將精油樣品用甲醇配制成一系列濃度，取400μL樣品加入2mL 0.06mmol/L的DPPH甲醇溶液，混合室溫放置30min后測(cè)定517nm處吸光度，之后每隔10min測(cè)定1次，直至到達(dá)平衡為止，每份樣品平行操作3次，同時(shí)以維生素C為陽(yáng)性對(duì)照評(píng)價(jià)樣品消除DPPH·的能力。

計(jì)算公式為:清除率(%)=［1-(A1-A2)/A0］×100，式中 A1為2mL DPPH甲醇溶液與400μL樣品混合后的吸光度;A2為2mL甲醇與400μL樣品混合后的吸光度;A0為2mL DPPH甲醇溶液與400μL甲醇混合后的吸光度。

1.2.4.2 消除ABTS+·能力測(cè)定 參照文獻(xiàn)［10-12］方法，配制ABTS自由基工作液。將樣品用甲醇配制成一系列濃度，取500μL樣品及VC樣品分別加入4mL ABTS自由基工作液，混合，放置10min后，在734nm處測(cè)定吸光度。每份樣品平行操作3次，以維生素C為陽(yáng)性對(duì)照評(píng)價(jià)樣品消除ABTS+·的能力。計(jì)算公式為:清除率(%)=［1-(A1-A2)/A0］×100，式中A1為4mL ABTS自由基工作液與500μL樣品混合后的吸光度;A2為4mL甲醇與500μL樣品混合后的吸光度;A0為4mL ABTS自由基工作液與500μL甲醇混合后的吸光度。

1.2.4.3 半數(shù)抑制率的計(jì)算 半數(shù)抑制率(IC50)指清除率為50%時(shí)所需抗氧化劑的濃度，由不同濃度抗氧化劑的清除率作曲線求出。

2 結(jié)果與分析

2.1 梔子花精油成分分析

取梔子花精油正己烷1000倍稀釋液1μL，在確定的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析條件下進(jìn)行分析鑒定。進(jìn)樣后，延遲3min采集圖譜，得到梔子花精油化學(xué)成分總離子流圖(見(jiàn)圖1)。

圖1 梔子花精油總離子流圖Fig.1 Total ion current chromatograms of essential oil from flowers of Gardenia jasminoides

通過(guò)G1701BA化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，按面積歸一化法求得各化學(xué)成分在總精油中的相對(duì)含量，利用Nist98和Wiley275質(zhì)譜圖庫(kù)對(duì)相對(duì)含量大于0.1%的組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，并結(jié)合保留指數(shù)及有關(guān)文獻(xiàn)［13-14］確定主要成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 抗氧化能力的測(cè)定

根據(jù)1.2.3.1及1.2.3.2項(xiàng)下方法測(cè)定不同濃度梔子花精油樣品對(duì)DPPH·和ABTS+·的消除能力，并經(jīng)數(shù)據(jù)分析計(jì)算出梔子花精油的IC50，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 梔子花精油的抗氧化活性Table 2 Antioxidation of essential oil from flowers of Gardenia jasminoides

由表2可知，梔子花精油對(duì)DPPH·和ABTS+·具有較強(qiáng)的消除能力，且消除DPPH·的能力強(qiáng)于ABTS+·，但其消除自由基的能力弱于VC。

3 結(jié)論

3.1 梔子花精油的化學(xué)成分主要為芳樟醇(21.09%)、莰烯(7.25%)、α-石竹烯(6.49%)、香葉醇(5.72%)、α-法呢烯(5.35%)等。其中芳樟醇具有典型玫瑰花香香氣，香葉醇具有甜果香味，α-法呢烯具有花香［15］，以上化學(xué)成分可能與梔子花的特殊香味具有一定的關(guān)系，這需要相關(guān)的嗅覺(jué)測(cè)量法來(lái)確定。

3.2 在抗氧化活性方面，與維生素C相比，消除DPPH自由基和ABTS自由基時(shí)，梔子花精油在相同濃度下弱于維生素C，但兩者存在較大的純度差異，因而可說(shuō)明梔子花精油具有較強(qiáng)的消除自由基能

力。這為后續(xù)梔子花精油的研究與開(kāi)發(fā)提供了一定的基礎(chǔ)。

表1 梔子花精油的化學(xué)成分Table 1 Chemical constituents of essential oil from flowers of Gardenia jasminoides

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