劉 培，邵鐵梅，李 雪，焦 展，溫 昕，仵 陶，安勝軍

(河北化工醫(yī)藥職業(yè)技術學院，河北省高校生物反應器與蛋白類藥物開發(fā)應用技術研發(fā)中心，河北石家莊 050026)

血管損傷后發(fā)生的管壁結構重塑是血管重建術后再狹窄、動脈粥樣硬化等多種心血管疾病發(fā)病的共同病理基礎。已有研究表明血管外膜并非僅起支撐作用，在血管損傷和高血壓中也起重要作用。特別是在某些刺激因子作用下，成纖維細胞表型轉化為肌成纖維細胞，表達α-平滑肌肌動蛋白，遷移至內膜下區(qū)域和新生內膜中并增殖，同時膠原合成增加，導致血管重構［1］。因此，成纖維細胞的增殖、遷移及轉化在血管重構的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要的角色。本實驗旨在比較在血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)刺激下，兩細胞亞群在增殖能力方面的異同，以期為研究其在血管重構機制中的作用提供實驗數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級 ♂ SD大鼠，體質量150～180 g，購自河北醫(yī)科大學實驗動物中心，許可證號:SCXK(冀)2008-1-003。

1.2 試劑 AngⅡ購自Sigma公司;MTT購自Solarbio公司;dNTP、TaqDNA聚合酶購自Promega公司;所用引物由上海生工生物技術有限公司根據(jù)設計合成。

1.3 方法

1.3.1 血管外膜成纖維細胞亞群培養(yǎng)與鑒定 方法同參考文獻［2］。

1.3.2 細胞增殖活性檢測 取生長狀態(tài)良好的細胞亞群，用0.25%的胰酶消化成細胞懸液，以1.0×107·L－1接種于96孔培養(yǎng)板，每孔200 μl，置培養(yǎng)箱中孵育24 h后，換無血清DMEM培養(yǎng)過夜，使其生長同步化，分為實驗組和對照組，實驗組 Ang Ⅱ濃度依此為10、102、103nmol·L－1，每組6孔，繼續(xù)培養(yǎng)72 h，采用酶聯(lián)免疫檢測儀測定各孔吸光度值(A值)。細胞增殖率/%=(實驗組A值－對照組A值)/對照組A值×100%。

Tab 1 Effects of AngⅡon proliferation of adventitial fibroblast subpopulations

2 結果

2.1 細胞亞群純度鑒定 經克隆環(huán)法獲得的成纖維細胞亞群和圓形細胞亞群不混有內皮細胞、平滑肌細胞和白細胞，為純細胞系。

2.2 細胞亞群增殖活性分析 從Tab 1可看出，與自身對照相比，在10～103nmol·L－1范圍內，AngⅡ對兩細胞亞群的增殖活性有不同程度的促進作用，AngⅡ 102nmol·L－1對紡錘形細胞的增殖率高達19.9%(P＜0.01);而當AngⅡ濃度增加時，對圓形細胞的增殖促進作用也更加明顯，增殖率分別為9.8%、23.3%(P＜0.01)、30.5%(P＜0.01)。這說明AngⅡ對兩細胞亞群的增殖促進作用存在差異。

3 討論

AngⅡ是腎素血管緊張素系統(tǒng)的一個重要效應物質。循環(huán)和局部自分泌或旁分泌的AngⅡ，通過其受體介導，引起血管收縮、血壓增高、交感神經系統(tǒng)興奮、醛固酮分泌促進水鈉潴留，還致細胞生長增殖，細胞外基質成分合成增加，促進其它生長因子和生物活性物質釋放，在心肌、血管組織的病理性重構、順應性下降、功能失代償?shù)倪^程中起著重要作用［3］。之前的研究顯示兩細胞亞群的生長特性略有不同［2］，本實驗進一步發(fā)現(xiàn)AngⅡ對亞群的增殖能力有不同程度的促進作用，其中AngⅡ103nmol·L－1對紡錘形細胞亞群的增殖活性無明顯影響(增殖率6.8%，P＞0.05)，而對圓形細胞亞群的增殖作用有明顯促進作用(增殖率30.5%，P＜0.01)。提示兩細胞亞群可能在血管重構等病變中扮演不同角色，為研究AngⅡ對兩細胞亞群的增殖及轉化等作用機制奠定基礎。

［1］Siow R C，Mallawaarachchi C M，Weissberg P L，et al.Migration of adventitial myofibroblasts following vascular balloon injury:insights fromin vivogene transfer to rat carotid arteries［J］.Cardiovasc Res，2003，59(1):212－21.

［2］劉 培，邵鐵梅，盧海剛，等.大鼠血管外膜成纖維細胞亞群生長特性及功能研究［J］.中國病理生理雜志，2012，28(1):47－52.

［2］Liu P，Shao T M，Lu H G，et al.Growth characteristics and function of rat vascular adventitia fibroblast subpopulations［J］.Chin J Pathophysiol，2012，28(1):47－52.

［3］張曉一，劉玉環(huán)，廖端芳，秦旭平.Losartan和CGRP對血管緊張素Ⅱ誘導血管平滑肌細胞增殖作用的影響［J］.中國藥理學通報，2006，22(1):101－5.

［3］Zhang X Y，Liu Y H，Liao D F，Qin X P.Effect of Losartan and CGRP on the proliferation of vascular smooth muscle cell induced by angiotensin Ⅱ［J］.Chin Pharmacol Bull，2006，22(1):101－5.