胡劍鋒（江蘇省盛澤醫(yī)院，江蘇吳江 215228）

肺癌已成為嚴(yán)重威脅人們生命和健康的疾病，其中非小細(xì)胞肺癌占肺癌總數(shù)的75%～80%，約1/3的患者一經(jīng)確診即為晚期肺癌[1]。厄洛替尼（Erlotinib）是近年上市的治療晚期非小細(xì)胞肺癌的藥物，在國(guó)際及國(guó)內(nèi)肺癌指南中厄洛替尼均被列為晚期非小細(xì)胞肺癌的二線(xiàn)治療藥物之一[2]。藥品的質(zhì)量直接決定了藥物的治療效果，并且與藥品的毒副反應(yīng)密切相關(guān)，因此對(duì)藥品質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)和控制是十分必要的，其中制劑含量測(cè)定是藥品質(zhì)量控制的重要組成部分之一。筆者查閱相關(guān)文獻(xiàn)和報(bào)道，未見(jiàn)關(guān)于厄洛替尼制劑含量測(cè)定方法的報(bào)道及研究，所以本文以厄洛替尼為指標(biāo)成分，建立了厄洛替尼片中厄洛替尼含量測(cè)定的高效液相色譜（HPLC）法，采用紫外檢測(cè)器在342 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行檢測(cè)，以期為該制劑的質(zhì)量控制提供有效的含量考察方法。結(jié)果表明，本方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于該制劑中厄洛替尼的定量分析。

1 材料

1200型HPLC儀（美國(guó)Agilent公司）；5210DT超聲處理器（上海金力超聲波儀器廠(chǎng)，功率：250 W，頻率：33 kHz）；AUW-220D電子天平（日本島津公司）；pH計(jì)（瑞士Mettler Toledo公司）。

厄洛替尼對(duì)照品（美國(guó)Selleck公司，批號(hào)：PEA1023674，純度：99%）；厄洛替尼片（南京醫(yī)藥有限公司，批號(hào)：110510、110515、110520，規(guī)格：每片150 mg）；甲醇為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Phenomexex Luna-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-pH 3.5磷酸鹽緩沖液（25∶75，V/V），流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：342 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：20 μl。厄洛替尼與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)不小于1.2，厄洛替尼峰的拖尾因子應(yīng)不大于1.5，理論板數(shù)按厄洛替尼峰計(jì)應(yīng)不低于5000。

2.2 對(duì)照品及樣品溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品貯備溶液的制備。精密稱(chēng)取厄洛替尼對(duì)照品10 mg，置于100 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備。精密吸取對(duì)照品貯備液2 ml，置于10 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液。取厄洛替尼片2片，置于研缽中研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約含厄洛替尼10 mg），置于100 ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，0.22 μm的微孔濾膜濾過(guò)；精密吸取續(xù)濾液2 ml，置于10 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 空白溶液的制備。取處方量輔料，精密稱(chēng)定，置于100 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，0.22 μm的微孔濾膜濾過(guò)；精密吸取續(xù)濾液2 ml，置于10 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 方法專(zhuān)屬性考察

分別取空白溶液和厄洛替尼對(duì)照品溶液各20 μl，注入色譜儀，記錄色譜。結(jié)果，空白溶液在與厄洛替尼對(duì)照品溶液主峰相同的保留時(shí)間處未見(jiàn)色譜峰出現(xiàn)，表明輔料對(duì)樣品的測(cè)定無(wú)干擾，色譜見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.4 線(xiàn)性關(guān)系考察

精密吸取厄洛替尼對(duì)照品貯備液適量，定量稀釋成10、20、40、60、80、100 μg/ml的溶液，分別進(jìn)樣20 μl。以厄洛替尼質(zhì)量濃度（c）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程為：A＝28221.6c+50443.1（r＝0.9999）。表明厄洛替尼檢測(cè)質(zhì)量濃度線(xiàn)性范圍為10～100 μg/ml。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取20 μg/ml的厄洛替尼對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果峰面積的RSD＝0.50%（n＝5），表明精密度良好，符合要求。

2.6 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果，RSD＝0.66%（n＝7），表明供試品溶液在12 h內(nèi)比較穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

按照處方比例，取高（120%）、中（100%）、低（80%）3種不同量的厄洛替尼對(duì)照品，分別加入處方量的輔料，過(guò)120目篩混合均勻，精密稱(chēng)取粉末適量（約相當(dāng)于頭孢地尼8、10、12 mg），按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備處理后（每個(gè)濃度2份樣品），進(jìn)樣20 μl，記錄色譜；另取對(duì)照品溶液，同法測(cè)定。按外標(biāo)法計(jì)算3種樣品中厄洛替尼的回收率。結(jié)果分別為100.26%、100.27%、100.56%，平均值為100.36%，RSD＝0.62%（n＝6），詳見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 1 Results of recovery tests（n＝6）

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖；另取對(duì)照品溶液，同法測(cè)定。按外標(biāo)法計(jì)算樣品的含量，測(cè)得的含量平均值為99.11%，RSD＝0.72%，表明本方法的重復(fù)性良好。

2.9 樣品含量測(cè)定

取3批樣品按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備處理后進(jìn)樣分析，供試品色譜見(jiàn)圖1C（批號(hào)：110510）。含量測(cè)定結(jié)果分別為99.67%、99.92%、100.13%。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇

厄洛替尼在水中的溶解性較差，所以采用甲醇為溶劑來(lái)溶解厄洛替尼。以甲醇配制的厄洛替尼對(duì)照品貯備液再用水稀釋為對(duì)照品溶液，取此溶液于200～800 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果發(fā)現(xiàn)厄洛替尼在波長(zhǎng)為342、261 nm處有最大吸收，但是在342 nm處的吸收干擾更小。故選擇厄洛替尼的檢測(cè)波長(zhǎng)為342 nm。

3.2 流動(dòng)相選擇

目前在國(guó)內(nèi)鮮有關(guān)于厄洛替尼含量檢測(cè)方面的研究報(bào)道。筆者查閱了國(guó)內(nèi)外的相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行了篩選[1，3-4]，并且進(jìn)行了優(yōu)化。試驗(yàn)結(jié)果表明，以甲醇-pH 3.5磷酸鹽緩沖液（25∶75，V/V）為流動(dòng)相，效果最佳。

綜上所述，本方法操作簡(jiǎn)便、專(zhuān)屬性較強(qiáng)、回收率好，為厄洛替尼原料藥及片劑的含量測(cè)定提供了有效的質(zhì)量控制依據(jù)。

[1]黃逸生，周志凌，雷麗嬋，等.高效液相色譜質(zhì)譜串聯(lián)法檢測(cè)厄洛替尼濃度[J].中南藥學(xué)，2011，11（9）：801.

[2]吳一龍，陸舜，周清華，等.2010中國(guó)肺癌臨床指南[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：78.

[3]Bouchet S，Chauzit E，Ducint D，et al.Simultaneous determination of nine tyrosine kinase inhibitors by 96-well solid-phase extraction and ultra performance LC/MS-MS[J].Clin Chim Acta，2011，412（11/12）：1060.

[4]Chahbouni A，den Burger JC，Vos RM，et al.Simultaneous quantification of erlotinib，gefitinib，and imatinib in human plasma by liquid chromatography tandem mass spectrometry[J].Ther Drug Monit，2009，31（6）：683.